【技术实现步骤摘要】
干细胞高效表达外泌体用于皮肤美容的制备方法和产品
本专利技术涉及干细胞外泌体
，尤其涉及一种干细胞高效表达外泌体用于皮肤美容的制备方法和一种干细胞高效表达外泌体用于皮肤美容的产品。
技术介绍
干细胞外泌体在国外研究已经多年，用于市场上的外泌体越来越多，而国内对于干细胞外泌体的应用也随之越来越多，用于美容护肤的产品种类也越来越多，但是干细胞外泌体的表达效率较低、蛋白表达量较低，应用于美容护肤的效果一般，且干细胞外泌体长期储存会导致定向分泌的不足、活性降低等缺点。
技术实现思路
针对上述问题中的至少之一，本专利技术提供了一种干细胞高效表达外泌体用于皮肤美容的制备方法和产品，通过电转染方式将重组表达载体转移至干细胞中，从而提取得到目的蛋白外泌体，在此基础上利用冻干技术制备用于皮肤美容的产品，有效保护了干细胞高效表达外泌体的活性成分，所制备的外泌体冻干缓释片剂能够在室温条件下长期储存，弥补了干细胞外泌体定向分泌的不足、长时间储存活性降低等缺点。此外，采用人源启动子EF1A，在寡肽-1和碱性成纤维蛋白或其他蛋...
【技术保护点】
1.一种干细胞高效表达外泌体用于皮肤美容的制备方法，其特征在于，包括：/n从人体组织中分离干细胞并进行培养；/n结合PB转座子、EF1A启动子序列、KOZAK序列、所要表达的目的蛋白序列、T2A序列、所要表达目的蛋白序列、CD33信号肽序列、IRES序列、PURO序列和附加体系统，构建重组表达载体；/n将所述重组表达载体加入所述干细胞的培养悬液，采用电转染方式获得能够表达所述目的蛋白的干细胞；/n由电转染后的干细胞上清液中无菌提取出外泌体，按重量份计，添加50份的所述外泌体、1-5份的甘油、1-5份的透明质酸、0.01-0.02份的丁二醇、0.1-5份的北美金缕梅提取物、0...
【技术特征摘要】
1.一种干细胞高效表达外泌体用于皮肤美容的制备方法，其特征在于，包括：
从人体组织中分离干细胞并进行培养；
结合PB转座子、EF1A启动子序列、KOZAK序列、所要表达的目的蛋白序列、T2A序列、所要表达目的蛋白序列、CD33信号肽序列、IRES序列、PURO序列和附加体系统，构建重组表达载体；
将所述重组表达载体加入所述干细胞的培养悬液，采用电转染方式获得能够表达所述目的蛋白的干细胞；
由电转染后的干细胞上清液中无菌提取出外泌体，按重量份计，添加50份的所述外泌体、1-5份的甘油、1-5份的透明质酸、0.01-0.02份的丁二醇、0.1-5份的北美金缕梅提取物、0.1-2份的尿囊素、0.1-2份的银耳提取物、0.1-5份的甘露糖醇、1-5份的β-葡萄糖、0.9份的氯化钠、1-10份的普鲁兰、1-10份的海藻糖、0.5-5份的甘露醇、1-10份的右旋糖酐、1-5份的葡萄糖、0.5-10份的乳酸钠、0.5-2份的氯化钾、5-10份的白蛋白以及适量的去离子水，进行混合搅拌；
采用液氮对混合后的物料进行三秒瞬间冻干休眠，并在真空环境下干燥以将冻干获得片剂中的冰结晶升华排出。
2.根据权利要求1所述的干细胞高效表达外泌体用于皮肤美容的制备方法，其特征在于，所述重组表达载体中包括两种目的蛋白的序列，两种目的蛋白的序列分别设置于所述T2A序列的前后两侧。
3.根据权利要求1或2所述的干细胞高效表达外泌体用于皮肤美容的制备方法，其特征在于，所述目的蛋白包括寡肽-1、碱性成纤维蛋白、角质蛋白、胶原蛋白、纤维连接蛋白、原纤蛋白、再生蛋白、转化因子、胰岛素样生长因子和转化因子。
4.根据权利要求1所述的干细胞高效表达外泌体用于皮肤美容的制备方法，其特征在于，所述人体组织中分离出的所述干细胞包括间充质干细胞、脂肪干细胞和上皮干细胞，所述人体组织包括人脐带组织和脂肪组织。
5.根据权利要求1所述的干细胞高效表达外泌体用于皮肤美容的制备方法，其特征在于，所述电转染方式的实施步骤包括：
在电转染实施前1-2天，将所述干细胞转移至细胞培养瓶，使得电转染前所述干细胞的细胞汇合度为50％-70％；
采用PBS缓慢冲洗所述干细胞，再吸出所述PBS，采用胰酶蛋白酶消化所述干细胞，再加入含血清的培养基中和胰酶；
离心收集所述干细胞，采用PBS、hepes和无血清培养基重悬细胞，使之密度为1×106～5×106cell/ml；
设置电转染参数为2.0kV、25uFD；
将线性化的所述重组表达载体的质粒加入电转杯，根据所述干细胞种类设置所述质粒的起始浓度为10～50μg/ml；
向电击杯中...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘荣坤，刘芳，岳绪娥，
申请(专利权)人：北京本真工坊生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11
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