【技术实现步骤摘要】
在线自由基清除法引导抗氧化活性蛋白组分分离纯化方法
本专利技术涉及生物化工领域，具体涉及一种从混合物质中高效且准确地分离纯化具有抗氧化活性的蛋白组分的方法。
技术介绍
氧化是一个自然现象，通常会导致人体衰老和食品品质劣化，为了减少氧化对人或者食品的影响，通常在食品中添加抗氧化剂，但是人工合成的抗氧化剂潜在风险，以茶多酚、多肽、蛋白和多糖等为代表的天然抗氧剂逐步成为抗氧化剂的首选。目前，从天然动植物产品中分离纯化具有抗氧化活力的蛋白成分的方法通常是先使用离子交换层析初步纯化获得馏分，然后采用各种试剂盒或者经典分析方法对馏分进行分析，找到具有抗氧化功能性的馏分后，对该馏分进行进一步的精细分离纯化，再对各个组分进行分析。由于天然动植物产品成分极其复杂，这种传统方法很难有效的辨别馏分中具有抗氧化功能性的具体组分(可能是蛋白、多糖、酚类或者小肽)，只能依靠经验和反复试验进行后续的精细分离纯化，这种传统的精细分离纯化过程中存在填料选择困难、试验流程长、试剂消耗量大和工作量大等问题，严重影响后续精细纯化的效率。
技术实现思路
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【技术保护点】
1.在线自由基清除法引导抗氧化活性蛋白组分分离纯化方法，其特征在于该方法包括以下步骤：/n一、水溶性或盐溶性蛋白提取：将待提取的材料脱脂后，根据蛋白性质加入水或者盐溶液进行混合，混合液加入到高速匀浆机中高速匀浆处理，然后离心分离，取上清液，过滤，得到水溶性或盐溶性蛋白提取物；/n二、采用离子交换填料对蛋白提取物进行用液相色谱初步分离纯化，用波长280nm的紫外检测器检测流出液，得到蛋白的洗脱图谱和馏分，将蛋白洗脱峰中峰尖处的馏分取出，进行下一步检测；/n三、使用在线抗氧化能力检测装置分别对步骤二得到的馏分进行检测，得到蛋白组分图谱和相应的蛋白组分自由基清除能力图谱，进行对比...
【技术特征摘要】
1.在线自由基清除法引导抗氧化活性蛋白组分分离纯化方法，其特征在于该方法包括以下步骤：
一、水溶性或盐溶性蛋白提取：将待提取的材料脱脂后，根据蛋白性质加入水或者盐溶液进行混合，混合液加入到高速匀浆机中高速匀浆处理，然后离心分离，取上清液，过滤，得到水溶性或盐溶性蛋白提取物；
二、采用离子交换填料对蛋白提取物进行用液相色谱初步分离纯化，用波长280nm的紫外检测器检测流出液，得到蛋白的洗脱图谱和馏分，将蛋白洗脱峰中峰尖处的馏分取出，进行下一步检测；
三、使用在线抗氧化能力检测装置分别对步骤二得到的馏分进行检测，得到蛋白组分图谱和相应的蛋白组分自由基清除能力图谱，进行对比，若蛋白组分图谱与自由基清除图谱中的峰位置相同，则判断该蛋白组分为具有抗氧化活力蛋白组分；再通过标准曲线确定该蛋白组分的分子量；
四、观察具有抗氧化活力的蛋白组分的蛋白组分图谱，如果具有活力的蛋白组分周围没有分子量相近的其他蛋白组分，则利用分离范围能将该蛋白分子量涵盖的分子筛为色谱柱填料进行精细分离纯化；如果具有活力的蛋白组分周围有分子量相近的蛋白组分，则选择分离范围能将该蛋白分子量涵盖的、粒径小于50μm的分子筛为色谱柱填料，同时高径比大于25的色谱柱进行精细分离纯化。
2.根据权利要求1所述的在线自由基清除法引导抗氧化活性蛋白组分分离纯化方法，其特征在于步骤一中，高速匀浆法提取蛋白的提取转速为5000～35000rpm，液料比为(20～5):1，提取温度为10～70℃，提取时间为30～300s。
3.根据权利要求1或2所述的在线自由基清除法引导抗氧化活性蛋白组分分离纯化方法，其特征在于步骤一中，对提取液使用离心机进行离心，转速为2000～10000rpm，分离时间为5～20min，分离温度为0～40℃。
4.根据权利要求1或2所述的在线自由基清除法引导抗氧化活性蛋白组分分离纯化方法，其特征在于步骤二中，用于初步分离纯化的离子交换填料的选择是根据蛋白溶液的电势选择来选择的；若蛋白溶液的电势为负电势，表示该蛋白混合物带有负电，则使用阴离子交换填料进行分离纯化；若蛋白溶液的电势为正电势，则使用阳离子交换填料进行分离纯化。
5.根据权利要求1或2所述的在线自由基清除法引导抗氧化活性蛋白组分分离纯化方法，其特征在于步骤三中所述的在线抗氧化能力检测装置包括流动相泵(1)、分离色谱柱(2)、紫外检测器Ⅰ(3)、自由基泵(4)...
【专利技术属性】
技术研发人员：包怡红，张宏伟，高铭坤，李德海，包洪涛，郭阳，骆嘉原，
申请(专利权)人：东北林业大学，
类型：发明
国别省市：黑龙;23
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