移植NSCs结合使用Nogo-A抗体在治疗创伤性脑损伤方面的应用制造技术

本发明专利技术提供一种实验性验证移植NSCs结合使用Nogo‑A抗体在治疗创伤性脑损伤（TBI）方面的应用，其特征在于，通过在体动物实验和离体细胞培养实验，在使用Nogo‑A抗体情况，检测Nogo‑A抗体与NSCs分化神经元突起生长相关性，与体内移植的NSCs分化神经元和宿主脑组织整合的相关性。本发明专利技术还提供一种Nogo‑A抗体在制备创伤性脑损伤的预后药物中的应用；本发明专利技术应用NSCs移植治疗TBI的同时，使用Nogo‑A抗体来拮抗脑损伤区Nogo‑A分子对神经再生的不利影响，以达到提高NSCs移植治疗的效果，从而恢复TBI患者的神经功能。

【技术实现步骤摘要】
移植NSCs结合使用Nogo-A抗体在治疗创伤性脑损伤方面的应用
本专利技术属于生物医疗研究
，具体涉及一种实验性验证移植NSCs结合使用Nogo-A抗体在治疗创伤性脑损伤方面的应用、一种实验性验证移植NSCs结合使用Nogo-A抗体在治疗创伤性脑损伤方面的应用。
技术介绍
随着国民经济的发展，交通事业日益发达，随之而来的交通事故也逐年增多，由此引起的创伤性脑损伤（TraumaticBrainInjury，TBI）亦十分常见，危及患者的生命，即使经抢救能挽回生命，但往往伴有肢体残废、癫痫或学习、记忆等功能障碍，甚至成为植物人丧失生活自理能力，给社会家庭带来沉重的负担。中枢神经系统（CNS）的再生和修复一直是神经科学领域的难点和热点。目前普遍认为CNS微弱的再生能力主要与内、外两方面因素有关：①CNS神经元自身缺乏足够的再生能力；②CNS神经元所生存的微环境中各种生长促进性和抑制性因子的影响。自从1992年神经干细胞(neuralstemcells，NSCs)被发现之后，为TBI的治疗提供了新的思路。NSCs是一种具有自我更新和多分化潜能的前体细胞，目前发现广泛存在于大鼠、人的胚脑或成年脑的室下带、纹状体、海马等部位。一方面，可以施加某些因素使患者脑内原本存在的NSCs增殖、分化；另一方面，可以将体外扩增培养的NSCs移植至患者的损伤脑区。目前国内外的一些医疗科研人员就此开展了研究，发现移植的NSCs能在损伤区存活、增殖、分化，但NSCs在损伤区附近增殖和分化的数量有限，与宿主脑组织整合情况较差，修复的力度也有限。目前，人们已经从CNS鞘磷脂中分离出了多种抑制神经再生的因子，在诸多抑制因素中，Nogo-A引人注目，其发现是中枢神经创伤性损伤修复分子机制研究的重大突破。Nogo-A是目前发现的最为强烈的神经纤维再生抑制因子，在神经功能恢复过程中起着重要作用，Nogo-A通过与其受体结合而发挥抑制神经再生的作用。有关Nogo的研究多是在2000年以后进行的，Chen和PrInjha以及Grandpre课题组在2000年成功地克隆到Nogo基因。Nogo分子有A、B、C三个异构体，Nogo-A蛋白是由神经胶质细胞表达的整合膜蛋白，在体内外都表现出强烈的抑制轴突生长的作用。第三军医大学叶剑等报道，大鼠皮质、基底神经节等处都有Nogo-AmRNA分布。大鼠的Nogo-A转录体编码1163个氨基酸，Nogo-A的活性部位可能有两个：位于两个疏水区的Nogo-66和N末端到第一个疏水区结构域间部分肽链即N-Nog。Nogo-A可能通过以下几种机制来抑制神经元轴突的再生：完整少突胶质细胞表面Nogo-66与神经元表面Nogo受体（Nogo-R）结合；受损少突胶质细胞脱落下来的Nogo-66膜片段与神经元表面Nogo-R结合；完全溶解的少突胶质细胞释放Nogo-A的N端和Nogo-66的可溶性蛋白水解片段与其受体结合，其抑制作用更强。另有研究表明神经元在生长过程中对Nogo基因表达变化特别敏感，因此Nogo在高度可塑性脑区的神经元回路塑型过程中发挥重要作用。在以往利用组织工程学方法治疗TBI的研究中观察到，TBI后即时移植NSCs1个月后，体内移植NSCs分化的神经元较体外培养时突起较少、较短，且只有较少突起延伸至宿主脑组织。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种移植NSCs结合使用Nogo-A抗体在治疗创伤性脑损伤方面的应用，以解决
技术介绍
中的问题。为解决上述技术问题，本专利技术的实施例提供一种实验性验证移植NSCs结合使用Nogo-A抗体在治疗创伤性脑损伤方面的应用。进一步的，一种实验性验证移植NSCs结合使用Nogo-A抗体在治疗创伤性脑损伤方面的应用，其特征在于，包括以下步骤：通过在体动物实验和离体细胞培养实验，检测Nogo-A抗体与NSCs分化神经元突起生长的相关性，与体内移植的NSCs分化神经元和宿主脑组织整合的相关性。其中，所述在体动物实验，具体包括以下步骤：（1-1）采用颅脑液压损伤装置制备大鼠TBI模型；（1-2）取孕SD大鼠胚鼠皮层，进行NSCs的分离、扩增；（1-3）将NSCs接种壳聚糖支架移植于创伤性脑损伤区，其中，一组在壳聚糖支架中加入Nogo-A抗体作为实验组，一组不加抗体作为对照组；（1-4）移植11周后，在移植区注射BDA神经元轴突示踪剂；（1-5）移植12周后，用Morris水迷宫试验检测大鼠的学习记忆功能；（1-6）Morris水迷宫试验结束后，大鼠灌注取脑组织，冰冻切片，BDA免疫组化染色观察Nogo-A抗体对移植的NSCs分化神经元与宿主整合情况的影响；（1-7）对行为学指标结果用SPSS21.0统计软件进行统计学分析。其中，所述离体细胞培养实验，具体包括以下步骤：（2-1）取孕SD大鼠胚鼠皮层，进行NSCs的分离、克隆、传代和增殖；（2-2）在体外24孔培养板中分别涂布创伤性脑组织提取液，然后加或不加Nogo-A抗体接种NSCs球；1W后，应用NF-200免疫荧光检测Nogo-A抗体对NSCs分化神经元突起的影响；（2-3）结果用SPSS21.0统计软件进行统计学分析。本专利技术的实施例还一种Nogo-A抗体在制备创伤性脑损伤的预后药物中的应用。其中，所述药物中至少包括Nogo-A抗体。本专利技术的上述技术方案的有益效果如下：（1）本专利技术应用NSCs移植治疗TBI的同时，使用Nogo-A抗体来拮抗脑损伤区Nogo-A分子对神经再生的不利影响，以达到提高NSCs移植治疗的效果，从而恢复TBI患者的神经功能。（2）本专利技术通过体内动物实验和离体细胞培养实验两个方面进行研究，使用了Nogo-A抗体后对NSCs分化神经元突起生长以及与宿主脑组织整合的影响。附图说明图1为本专利技术的壳聚糖支架制备情况图（×40倍）。图2为本专利技术的动物实验中大鼠学习记忆检测的情况图；其中，图2A为大鼠定位巡航试验结果图；图2B为大鼠空间探索试验结果图。图3为本专利技术的动物实验中NSCs分化神经元与宿主脑组织整合的情况图（×400倍）；其中，图3A为NSCs+支架移植组的情况图；图3B为NSCs+支架+Nogo-A抗体移植组的情况图。图4为本专利技术的细胞实验中NSCs分化神经元突起长度情况图；其中，图4A为对照组NF-200，免疫荧光结果图；图4B为Nogo-A抗体组NF-200，免疫荧光结果图；图4C神经元长突起的长度统计分析结果图。具体实施方式为使本专利技术要解决的技术问题、技术方案和优点更加清楚，下面将结合具体实施例进行详细描述。一种实验性验证移植NSCs结合使用Nogo-A抗体在治疗创伤性脑损伤方面的应用，包括以下步骤：通过在体动物实验和离体细胞培养实验，检测Nogo-A抗体与NSCs分化神经元突起生长的相关性，与体内移植的NSCs分化神经元和宿主脑组织整合的相关性。其中，所本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种实验性验证移植NSCs结合使用Nogo-A抗体在治疗创伤性脑损伤方面的应用。/n

【技术特征摘要】
1.一种实验性验证移植NSCs结合使用Nogo-A抗体在治疗创伤性脑损伤方面的应用。


2.根据权利要求1所述的一种实验性验证移植NSCs结合使用Nogo-A抗体在治疗创伤性脑损伤方面的应用，其特征在于，通过在体动物实验和离体细胞培养实验，检测Nogo-A抗体与NSCs分化神经元突起生长的相关性，与体内移植的NSCs分化神经元和宿主脑组织整合的相关性。


3.根据权利要求1所述的一种实验性验证移植NSCs结合使用Nogo-A抗体在治疗创伤性脑损伤方面的应用，其特征在于，所述在体动物实验，具体包括以下步骤：
（1-1）采用颅脑液压损伤装置制备大鼠TBI模型；
（1-2）取孕SD大鼠胚鼠皮层，进行NSCs的分离、扩增；
（1-3）将NSCs接种壳聚糖支架移植于创伤性脑损伤区，其中，一组在壳聚糖支架中加入Nogo-A抗体作为实验组，一组不加抗体作为对照组；
（1-4）移植11周后，在移植区注射BDA神经元轴突示踪剂；
（1-5）移植12周后，用Morris水迷宫试验检测大鼠的学习记忆功能；
（...

【专利技术属性】
技术研发人员：衣昕，陆健花，金国华，
申请(专利权)人：南通大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32