一种中药的多中心切割分离方法技术

本发明专利技术涉及中药有效成分分离技术领域，为解决传统石斛属植物中痕量化合物分析灵敏度及分辨率低的问题，提供了一种中药的多中心切割分离方法，包括以下步骤：(1)将原料中药材粉碎，过三号筛，得中药粉末；(2)将中药粉末与分散剂混合研磨，得混合物；(3)将混合物填充入固相萃取小柱，经洗脱、离心，进样分析分离效果。本发明专利技术在多中心切割模式下，利用2D‑LC‑QTOF‑MS分离鉴定铁皮石斛、金钗石斛、鼓槌石斛中有效成分巧妙结合，能便捷高效地分离中药中的痕量成分。

【技术实现步骤摘要】
一种中药的多中心切割分离方法
本专利技术涉及中药有效成分分离
，尤其涉及一种中药的多中心切割分离方法。
技术介绍
二维超高效液相色谱是一种理想的、功能强大的分析工具，引起了人们巨大的兴趣。在二维超高效液相色谱体系中，多中心切割模式占据主要地位。在多中心切割模式下，只将来自一维色谱柱分离之后的样品的特定部分转移到二维色谱柱进项二次分离及检测。通常，在多中心切割模式下，二维的总运行时间比一维的收集时间长。同时，在此基础上将二维超高效液相色谱与四极杆飞行时间质谱联用(Q-TOF-MS)，旨在大幅度提高复杂样品的分离能力，获取互补信息。此外，多中心切割模式与Q-TOF-MS联用可实现分离复杂化合物，如多肽、蛋白和中药等。此外，各种色谱技术被用来分析和分离石斛属植物中的有效成分，例如，高效液相色谱，近红外光谱，高效液相色谱-光电二极管阵列检测-高分辨质谱，高性能薄层色谱，气相色谱与质谱联用等。然而，在这些色谱技术及检测器中，由于石斛属植物及其近缘植物的有效成分具有高度的相似性，因此鉴定它们仍然困难重重。此外，这些技术会导致消耗大量有机试剂，延长分析时间，浪费巨大的成本和获得较差的灵敏度及分辨率。因此，利用高灵敏度的色谱技术对石斛属植物中痕量化合物进行分析是十分必要和迫切的。
技术实现思路
本专利技术为了克服传统石斛属植物中痕量化合物分析灵敏度及分辨率低的问题，提供了一种高灵敏度的中药的多中心切割分离方法。为了实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：一种中药的多中心切割分离方法，包括以下步骤：(1)将原料中药材粉碎，过三号筛，得中药粉末；(2)将中药粉末与分散剂混合研磨，得混合物；(3)将混合物填充入固相萃取小柱，经洗脱、离心，进样分析分离效果。本专利技术的分离方法检测环节创意新颖，思路巧妙，成功采用在多中心切割模式下二维高效液相与质谱联用作为分离方法用于中药中有效成分提取和分离的领域，并成功鉴定铁皮石斛、金钗石斛、鼓槌石斛中的痕量成分。经过改良的提取方法处理之后，实验的灵敏度和重现性大大提高，使得在鉴定石斛属中药中的有效痕量成分更加精准有效。该分离检测体系具备一系列优异突出的特性：操作步骤简洁明了、化合物分离度高、仪器稳定性和灵敏度良好本专利技术的要点在于在多中心切割模式下采用2D-LC-QTOF-MS分离鉴定铁皮石斛、金钗石斛、鼓槌石斛中有效成分巧妙结合，充分发挥了其分离度高、灵敏度高、重现性好的优点，用这技术分离中药中的成分，可以取得前所未有、立竿见影的效果。本专利技术技术的简单适用性以及它便捷可重复性使其成为中药分离研究中的有用工具，采用的分散剂以及提取方法，不仅稳定，而且具备一系列优异突出的性质：提高分辨率；增加提取效率；消耗较少的有机试剂、样品量和提取时间，较为环保绿色。作为优选，步骤(2)中，所述分散剂与中药粉末的质量比为(1～2):1。作为优选，步骤(3)中，洗脱工艺为：以0.3～0.5mL/min流速用200μL纯甲醇洗脱。作为优选，步骤(3)中，离心工艺为：在12000～13500rpm转速下离心5～10min。作为优选，步骤(3)中，进样分析的工艺为：通过两个Agilent1290超高效液相与Agilent6545质谱联用测定中药中有效成分来表征该分离方法的有效性。作为优选，所述中药为石斛属植物，所述石斛属植物中包括以下有效成分：香草酸、丁香酸、芹菜素-6,8-二-c-β-d-葡萄糖苷、对羟基肉桂酸、阿魏酸、牡荆素葡萄糖苷、牡荆素鼠李糖苷、牡荆素、芦丁、柚皮苷、柚皮素、木犀草素、毛兰素、石斛酚、石斛碱、滨篙内酯、石斛醚碱、对羟基苯丙酸、金圣草素、小檗碱、壬二酸、圣草酚、豆甾醇、谷甾醇、鼓槌菲、十六烷酸、腺苷酸、尿苷、鸟嘌呤核苷、软木三萜酮和丁香醛。作为优选，所述石斛属植物包括铁皮石斛、金钗石斛和鼓槌石斛。本方法应用范围广泛，无论是铁皮石斛还是金钗石斛、鼓槌石斛，均能用本专利技术方法进行分离。本专利技术所述的测定铁皮石斛、金钗石斛和鼓槌石斛这三方面的应用亦属首例。作为优选，步骤(3)中，进样分析的质谱条件为：离子源为DualAJS源，质量范围设定为m/z100-700,采样频率，6spectra/s。雾化器气压，45psig；鞘气流速，11L/min；skimmer电压，65V；鞘气温度，350℃；毛细管电压，3500V；碰撞能，175V；八级杆RF，750V；喷嘴电压1000V；干燥气流速，12L/min；干燥气温度，350℃。多中心切割模式所获得的数据是用2DChromCreator和MassHunter软件处理的。作为优选，一维液相条件为：色谱柱：SBC18(2.1×100mm,1.8μm)，柱温：50℃，进样量：2.0μL，检测波长：270nm，采样频率：40Hz，流速：0.07mL/min,流动相：A：0.05％甲酸水，B：甲醇。梯度洗脱：0-3min，20-40％B；3-22min，40-50％B；22-25min，50-90％B；25-29min，90-100％B；29-40min，100-100％B。作为优选，2D-LC色谱条件为：色谱柱：Poroshell120Bonus(3.0×50mm，1.8μm)，检测波长，270nm；采样频率，80Hz；柱温，50℃；流动相：A：0.05％甲酸水，B：乙腈。在多中心切割模式下，梯度停止时间为1.5min，梯度周期为2.0min，二维流速为1.0mL/min。梯度洗脱：初始梯度：0min，10％B；1.5min，60％B。因此，本专利技术具有如下有益效果：本专利技术提供了一种新的分离技术，该技术在多中心切割模式下，利用2D-LC-QTOF-MS分离鉴定铁皮石斛、金钗石斛、鼓槌石斛中有效成分巧妙结合，能便捷高效地分离中药中的痕量成分。附图说明图1是本专利技术的工艺流程图。图2是多中心切割模式下的二维色谱图。图2中，1-16分别代表石斛属植物中不同的有效成分：1，香草酸；2，丁香酸；3，芹菜素-6,8-二-c-β-d-葡萄糖苷；4，对羟基肉桂酸；5，阿魏酸；6，牡荆素葡萄糖苷；7，牡荆素鼠李糖苷；8，牡荆素；9，芦丁；10，柚皮苷；11，柚皮素；12，木犀草素；13，毛兰素；14，石斛酚；15，石斛碱；16，滨篙内酯。图3是不同石斛属植物的有效成分提取图。图3中：A1、A2、B1、B2、C1、C2分别代表质谱的正负离子模式下不同的石斛样品：A1，铁皮石斛的负离子模式；A2，铁皮石斛的正离子模式；B1，金钗石斛的负离子模式；B2，金钗石斛的正离子模式；C1，鼓槌石斛的负离子模式；C2，鼓槌石斛的正离子模式。图中，1-31分别代表石斛属植物中不同的有效成分，分别为：1，香草酸；2，丁香酸；3，芹菜素-6,8-二-c-β-d-葡萄糖苷；4，对羟基肉桂酸；5，阿魏酸；6，牡荆素葡萄糖苷；7，牡荆素鼠李糖苷；8，牡荆素；9，芦丁；10，柚皮苷；11，柚皮素；12，木犀草素；13，毛兰素；14，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种中药的多中心切割分离方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)将原料中药材粉碎，过三号筛，得中药粉末；/n(2)将中药粉末与分散剂混合研磨，得混合物；/n(3)将混合物填充入固相萃取小柱，经洗脱、离心，进样分析分离效果。/n

【技术特征摘要】
1.一种中药的多中心切割分离方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将原料中药材粉碎，过三号筛，得中药粉末；
(2)将中药粉末与分散剂混合研磨，得混合物；
(3)将混合物填充入固相萃取小柱，经洗脱、离心，进样分析分离效果。


2.根据权利要求1所述的一种中药的多中心切割分离方法，其特征在于，步骤(2)中，所述分散剂与中药粉末的质量比为(1～2):1。


3.根据权利要求1所述的一种中药的多中心切割分离方法，其特征在于，步骤(3)中，洗脱工艺为：以0.3～0.5mL/min流速用200μL纯甲醇洗脱。


4.根据权利要求1所述的一种中药的多中心切割分离方法，其特征在于，步骤(3)中，离心工艺为：在12000～13500rpm转速下离心5～10min。


5.根据权利要求1所述的一种中药的多...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹君，王秋燕，胡雨涵，杨娟，
申请(专利权)人：杭州师范大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33