一种同时检测人新型冠状病毒和甲型流感、乙型流感病毒的探针及引物组合物制造技术

本发明专利技术公开了一种同时检测人新型冠状病毒和甲型流感、乙型流感病毒的探针及引物组合物，主要是根据甲型流感病毒的M基因、乙型流感病毒的NS基因、新型冠状病毒（2019‑nCoV）的ORF1ab和N基因及内标基因RNaseP的基因组特异性设计10条特异性引物和5条探针，利用实时荧光PCR扩增技术，根据不同通道的扩增曲线来区分甲型流感病毒、乙型流感病毒和新型冠状病毒2019‑nCoV。

【技术实现步骤摘要】
一种同时检测人新型冠状病毒和甲型流感、乙型流感病毒的探针及引物组合物
：本专利技术属于体外诊断
，具体涉及生物检测
，特别涉及一种同时检测人新型冠状病毒和甲型流感、乙型流感病毒的探针及引物组合物。
技术介绍
：流行性感冒病毒(Influenzavirus)属于正粘病毒科(Orthomyxoviridae)，简称流感病毒，包括人流感病毒和动物流感病毒，人流感病毒分为甲(A)、乙(B)、丙(C)三型，是流行性感冒(流感)的病原体。其中甲型流感病毒可自然感染人和多种动物，常突然发生、传播迅速，多次引起世界性大流行；乙型流感病毒在自然情况下仅感染人，一般呈散发、爆发或小流行；丙型流感病毒常感染儿童，多呈散发、偶发或爆发，但不流行。甲型流感病毒的表面抗原血凝素(HA)个神经氨酸酶(NA)容易变异，已知HA有16个亚类(H1-H16)，NA有9个亚类(N1-N9)，它们之间的随意组合可形成多种亚型，各亚型之间无交叉免疫力。这种变异特性给流感的诊断和防控造成很大困难。冠状病毒属于单股正链RNA病毒，属于冠状病毒科冠状病毒属。截止2019年，已发现的人冠状病毒(humancoronavirus,HCoV)g共有6种，包括HcoV-229E、HcoV-OC43、SARS-CoV、HcoV-NL63、HcoV-HKU1和MERS-CoV，HcoV既可引起普通的感冒也可以引起急性呼吸道感染。其中HcoV-229E、HcoV-OC43、HcoV-NL63、HcoV-HKU1在人群中流行较为普遍，可以引起普通感冒，致病性较弱，但在多重病毒共感染的情况下，老人、儿童和免疫缺陷病人中也可引起严重急性呼吸道感染。SARS是一种呼吸道烈性传染性疾病，由SARS-CoV引起，该病传播快，病情凶险，死亡率高，2003年未再出现。MERS-CoV是2012年中东地区新发现的一种致死率较高的新型冠状病毒，可以引起严重急性呼吸道感染，多在中东几个国家流行。2019新型冠状病毒(2019-nCoV)于2019年被发现，随后在全球多个国家快速传播，患者主要表现有发热、肺炎影像学特征，发病早期白细胞总数正常或降低。传统的流感病毒和人冠状病毒的检测主要有血清学检测、抗原检测、病毒分离和电镜检测等方法，但是上述方法由于检测费时、方法复杂、特异性差、灵敏度不高等缺点，临床检测实用性不高。而目前，市面上缺乏针对同时检测人新型冠状病毒和甲型流感、乙型流感病毒的探针及引物组合物检测的试剂盒。
技术实现思路
：本专利技术的目的在于提供一组用于快速鉴定甲型流感病毒、乙型流感病毒、新型冠状病毒(2019-nCoV)和内标基因RNaseP的特异性引物和探针，及一种用实时荧光PCR技术快速鉴定甲型流感病毒、乙型流感病毒和人新型冠状病毒(2019-nCoV)的方法。本鉴定方法方便快捷、价格低廉，适于推广应用，为甲型流感病毒、乙型流感病毒和新型冠状病毒(2019-nCoV)提供临床辅助诊断。本专利技术的另一目的在于提供含有同时检测人新型冠状病毒和甲型流感、乙型流感病毒的探针及引物组合物的试剂盒。该试剂盒可特异快速地进行甲流、乙流和新冠病毒感染的检测与诊断，减低成本，快速检测，有效满足临床使用的需要。为实现上述目的，本专利技术提供了一种同时检测人新型冠状病毒和甲型流感、乙型流感病毒的探针及引物组合物,其特征在于,包括以下组分：包含1种探针及包含2种引物的第一引物组，其中所述一种探针具有如SEQIDNO.3所示的核苷酸序列，所述2种引物分别具有如SEQIDNO.1-2所示的核苷酸序列；包含1种探针及包含2种引物的第二引物组，其中所述一种探针具有如SEQIDNO.6所示的核苷酸序列，所述2种引物分别具有如SEQIDNO.4-5所示的核苷酸序列；包含1种探针及包含2种引物的第三引物组，其中所述一种探针具有如SEQIDNO.9所示的核苷酸序列，所述2种引物分别具有如SEQIDNO.7-8所示的核苷酸序列；包含1种探针及包含2种引物的第四引物组，其中所述一种探针具有如SEQIDNO.12所示的核苷酸序列，所述2种引物分别具有如SEQIDNO.10-11所示的核苷酸序列；本专利技术根据甲型流感病毒的M基因、乙型流感病毒的NS基因、新型冠状病毒(2019-nCoV)的ORF1ab和N基因及内标基因RNaseP的基因组特异性设计10条特异性引物和5条探针，利用实时荧光PCR扩增技术，根据不同通道的扩增曲线来区分甲型流感病毒、乙型流感病毒和新型冠状病毒(2019-nCoV)。核酸检测因其快速、准确、灵敏度高、特异性强等优点而成为最主要手段的临床诊断方法。优选地，上述技术方案中，还具有包含1种探针及包含2种引物的第五引物组，其中所述一种探针具有如SEQIDNO.156所示的核苷酸序列，所述2种引物分别具有如SEQIDNO.13-14所示的核苷酸序列。优选地，上述技术方案中，第一引物组-第五引物组中所述探针均带有标记物。优选地，上述技术方案中，第一引物组-第五引物组中标记物为荧光标记物。优选地，上述技术方案中，第一引物组-第五引物组中的荧光标记物分别是不同的。优选地，上述技术方案中，第一引物组用于检测甲型流感病毒；第二引物组用于检测乙型流感病毒；第三引物组和第四引物组用于检测新型冠状病毒2019-nCoV；第五引物组用于检测内标基因RNaseP。一种同时检测人新型冠状病毒和甲型流感、乙型流感病毒的检测试剂盒，包含如下组分：第一检测组，包含针对甲型流感病毒的引物和探针，所述探针具有如SEQIDNO.3所示的核苷酸序列，所述引物分别具有如SEQIDNO.1-2所示的核苷酸序列；第二检测组，包含针对乙型流感病毒的引物和探针，所述探针具有如SEQIDNO.6所示的核苷酸序列，所述引物分别具有如SEQIDNO.4-5所示的核苷酸序列；第三检测组，包含针对新型冠状病毒2019-nCoV中N基因的引物和探针，所述探针具有如SEQIDNO.9所示的核苷酸序列，所述引物分别具有如SEQIDNO.7-8所示的核苷酸序列；第四检测组，包含针对新型冠状病毒2019-nCoV中ORF1ab基因的引物和探针，所述探针具有如SEQIDNO.12所示的核苷酸序列，所述引物分别具有如SEQIDNO.10-11所示的核苷酸序列；第五检测组，包含针对内标基因RNaseP的引物和探针，所述探针具有如SEQIDNO.15所示的核苷酸序列，所述引物分别具有如SEQIDNO.13-14所示的核苷酸序列。本设计建立的基于实时荧光PCR技术(TaqMan探针法)的同时检测甲型流感、乙型流感和人冠状病毒(2019-nCoV)的核酸检测试剂盒弥补了这一不足。优选地，上述技术方案中，还包括RT-PCR反应液、酶混合液、阴性对照和阳性对照；所述RT-PCR反应液包括缓冲液、Mg2+和dNTPs；所述酶混合液包括RNA酶抑制剂、DNA聚合酶、逆转录酶；所述阳性对照为人工合成的基因；所述空白对照为灭菌的去RNA酶水本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种同时检测人新型冠状病毒和甲型流感、乙型流感病毒的探针及引物组合物,其特征在于,包括以下组分：/n包含1种探针及包含2种引物的第一引物组，其中所述一种探针具有如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列，所述2种引物分别具有如SEQ ID NO.1-2所示的核苷酸序列；/n包含1种探针及包含2种引物的第二引物组，其中所述一种探针具有如SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列，所述2种引物分别具有如SEQ ID NO.4-5所示的核苷酸序列；/n包含1种探针及包含2种引物的第三引物组，其中所述一种探针具有如SEQ ID NO.9所示的核苷酸序列，所述2种引物分别具有如SEQ ID NO.7-8所示的核苷酸序列；/n包含1种探针及包含2种引物的第四引物组，其中所述一种探针具有如SEQ ID NO.12所示的核苷酸序列，所述2种引物分别具有如SEQ ID NO.10-11所示的核苷酸序列。/n

【技术特征摘要】
1.一种同时检测人新型冠状病毒和甲型流感、乙型流感病毒的探针及引物组合物,其特征在于,包括以下组分：
包含1种探针及包含2种引物的第一引物组，其中所述一种探针具有如SEQIDNO.3所示的核苷酸序列，所述2种引物分别具有如SEQIDNO.1-2所示的核苷酸序列；
包含1种探针及包含2种引物的第二引物组，其中所述一种探针具有如SEQIDNO.6所示的核苷酸序列，所述2种引物分别具有如SEQIDNO.4-5所示的核苷酸序列；
包含1种探针及包含2种引物的第三引物组，其中所述一种探针具有如SEQIDNO.9所示的核苷酸序列，所述2种引物分别具有如SEQIDNO.7-8所示的核苷酸序列；
包含1种探针及包含2种引物的第四引物组，其中所述一种探针具有如SEQIDNO.12所示的核苷酸序列，所述2种引物分别具有如SEQIDNO.10-11所示的核苷酸序列。


2.根据权利要求1所述的同时检测人新型冠状病毒和甲型流感、乙型流感病毒的探针及引物组合物,其特征在于：还具有包含1种探针及包含2种引物的第五引物组，其中所述一种探针具有如SEQIDNO.156所示的核苷酸序列，所述2种引物分别具有如SEQIDNO.13-14所示的核苷酸序列。


3.根据权利要求2所述的同时检测人新型冠状病毒和甲型流感、乙型流感病毒的探针及引物组合物,其特征在于：第一引物组-第五引物组中探针均带有标记物。


4.根据权利要求3所述的同时检测人新型冠状病毒和甲型流感、乙型流感病毒的探针及引物组合物,其特征在于：第一引物组-第五引物组中标记物为荧光标记物。


5.根据权利要求4所述的同时检测人新型冠状病毒和甲型流感、乙型流感病毒的探针及引物组合物,其特征在于：第一引物组-第五引物组中的荧光标记物分别是不同的。


6.根据权利要求2-5任一权利要求所述的同时检测人新型冠状病毒和甲型流感、乙型流感病毒的探针及引物组合物,其特征在于：第一引物组用于检测甲型流感病毒；第二引物组用于检测乙型流感病毒；第三引物组和第四引物组用于检测新型冠状病毒2019-nCoV；第五引物组用于检测内标基因RNaseP。


7.一种同时检测人新型冠状病毒和甲型流感、乙型流感病毒的检测试剂盒，其特征在于：包含如下组分：第一检测组，包含针对甲型流感病毒的引物和探针，所述探针具有如SEQIDNO.3所示的核苷酸序列，所述引物分别具有如SEQIDNO.1-2所示...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹新文，杨静，李秀林，王政峰，赵西浩，崔东明，李青，范东颖，张蓉，刘中华，王国强，
申请(专利权)人：江苏硕世生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32