【技术实现步骤摘要】
一种获得具有生物学活性的RANKL重组蛋白的方法及其应用
本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种获得具有生物学活性的RANKL重组蛋白的方法及其应用。
技术介绍
目前传统药物或显微外科手术对于骨硬化症及尖周肉牙肿的治疗已取得一定效果，但对于常染色体异常引起的骨硬化症严重的病人治疗效果不佳，其主要是由于骨代谢过程中破骨细胞的骨吸收功能受到抑制。研究表明RANKL能够促进破骨细胞分化，增强骨吸收功能。骨代谢疾病的发生大多由于成骨细胞介导的骨形成过程和破骨细胞介导的骨吸收过程异常密切相关，因此，如何获得生物学活性的RANKL重组蛋白是本专利技术所需要解决的问题。
技术实现思路
专利技术目的：针对现有技术中存在的不足，本专利技术的目的是提供一种获得具有生物学活性的RANKL重组蛋白的方法及其应用。为解决上述技术问题，本专利技术的实施例提供一种获得具有生物学活性的RANKL重组蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）RANKL重组蛋白通过体外诱导大量表达；（2）通过纯化获得具有生物学活性的RANK...
【技术保护点】
1.一种获得具有生物学活性的RANKL重组蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）RANKL重组蛋白通过体外诱导大量表达；（2）通过纯化获得具有生物学活性的RANKL重组蛋白；（3）通过RANKL 重组蛋白在体外促进破骨细胞的分化，对其生物学活性进行鉴定的过程。/n
【技术特征摘要】
1.一种获得具有生物学活性的RANKL重组蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）RANKL重组蛋白通过体外诱导大量表达；（2）通过纯化获得具有生物学活性的RANKL重组蛋白；（3）通过RANKL重组蛋白在体外促进破骨细胞的分化，对其生物学活性进行鉴定的过程。
2.根据权利要求1所述的一种获得具有生物学活性的RANKL重组蛋白的方法，其特征在于，所述步骤（1）中的RANKL重组蛋白通过体外诱导大量表达，具体包括以下过程：
（1-1）RANKL重组蛋白的诱导表达
（1-1-1）将含有pET-32a-mRANKL重组质粒的BL21感受态细胞进行复苏，接种于0.5ml含有Amp抗性的LB培养基中；37℃，150rpm摇菌培养过夜，取10ul菌液均匀铺板于LB固态培养板中，37℃培养过夜；
（1-1-2）选择单克隆菌落进行平板挑菌，接种于5ml含有Amp抗性的LB培养基中37℃，150rpm摇菌，培养过夜，按照1:100接种于500ml含有Amp抗性的LB培养基中，37℃，250rpm摇菌至OD在0.4-0.6之间，加入IPTG诱导5h，提取菌液蛋白；
（1-2）RANKL重组蛋白的提取
（1-2-1）3000rpm离心5min，收集细菌，弃上清，加入PBS重悬后，3000rpm离心5min，收集细菌，弃上清，加入200ulPBS，超声裂解细菌，12000rpm离心10min，将上清转移至另一个新的1.5ml离心管中；
（1-2-2）用200ulPBS重悬沉淀，用Nanodrop测定菌液上清与沉淀的蛋白浓度，调整一致后，加入6×SDS-PAGEloadingbuffer沸水浴中10min，-80℃保存；
（1-3）SDS-PAGE鉴定RANKL重组蛋白
（1-3-1）通过10%的SDS-PAGE胶进行电泳，按照对照上清蛋白样本，对照沉淀蛋白样本，RANKL重组蛋白上清样本及RANKL重组蛋白沉淀样本的顺序上样，每个泳道40ug蛋白；
（1-3-2）120V，90min后，进行考马斯亮蓝G-250染色，摄片。
3.根据权利要求1所述的一种获得具有生物学活性的RANKL重组蛋白的方法，其特征在于，所述步骤（2）中通过纯化获得具有生物学活性的RANKL重组蛋白，具体包括以下过程：
（2-1）RANKL重组蛋白的纯化
（2-1-1）将提取的RANKL重组蛋白通过His标签进行纯化，即RANKL重组蛋白在设计时加入了一段含有6个组氨酸的肽段；
（2-2）SDS-PAGE鉴定纯化后的RANKL重组蛋白
（2-2-1）通过10%的SDS-PAGE胶进行电泳，按照纯化后对照上清蛋白样本，纯化后对照沉淀蛋白样本...
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