一种高效的百香果花粉离体萌发液体培养基及培养方法技术

本发明专利技术提供一种高效的百香果花粉离体萌发液体培养基及培养方法，属于种子培养技术领域，所述液体培养基包括所述液体培养基中包含蔗糖、PEG4000、硼酸、Ca(NO

【技术实现步骤摘要】
一种高效的百香果花粉离体萌发液体培养基及培养方法
本专利技术属于种子培养
，具体是一种高效的百香果花粉离体萌发液体培养基及培养方法。
技术介绍
百香果花粉是百香果的雄配子体，是参与授粉受精过程的重要元件，萌发率高的花粉是授粉受精成功的前提，是获得百香果产量及杂交育种成功的基础。目前检测百香果花粉离体萌发的培养基及培养方法效率低，花粉的萌发率也较低，不能准确的反应花粉的真实活力。现有技术中百香果花粉在离体培养基中很难发芽，在适用于多数作物花粉的BK培养基(10％蔗糖，0.01％H3BO3，0.03％Ca(NO3)2·4H2O，0.02％MgSO4·7H2O，0.01％KNO3，其余为H2O)中，培养24小时，发芽率在6.1％以下。有研究表明在15％蔗糖，0.03％Ca(NO3).4H2O,0.02％Mg(SO4).7H2O,0.01％KNO3,0.01％H3BO3,+0.8％琼脂其余为H2O，pH7.0的培养基中，百香果花粉的发芽率也仅为32.92％。还有在BK培养基的基础上调整蔗糖的浓度，并添加的PEG3350，PH值调整为6.0，紫百香果(No.127)在20％蔗糖，10％PEG3350，0.01％H3BO3，0.03Ca(NO3)2·4H2O，0.02％MgSO4·7H2O,0.01％KNO3的培养基中萌发率最高为49.1％。台农一号自交代在20％蔗糖，15％PEG3350，0.01％H3BO3，0.03％Ca(NO3)2·4H2O，0.02％MgSO4·7H2O,0.01％KNO3的培养基中萌发率为32.0％；食用种百香果最适培养基组合浓度则为20％蔗糖，15％PEG3350，0.01％H3BO3，0.03％Ca(NO3)2·4H2O，0.02％MgSO4·7H2O,0.01％KNO3萌发率为54.0％。在培养基中添加百香果柱头组织，紫百香果(No.127)花粉的萌发率可达89％，但在食用种百香果中则有抑制作用，其花粉萌发率由54.0％降低为35.7％。究其原因，受到花粉萌发亲和性的影响，柱头中所含的物质对有的品种的花粉体外萌发具有促进作用，对有的品种花粉萌发反而起到抑制的作用。另外，由于聚乙二醇PEG和琼脂加热形成浑浊沉淀物，因此百香果花粉体外萌发实验只能通过液体培养基培养，但在使用凹槽载玻片培养花粉的过程中，随着时间的延长花粉聚集在凹槽载玻片的最低处，在显微镜观察花粉萌发情况时带来不便。现有百香果花粉离体萌发技术不能真实的反应百香果花粉的萌发率，因此，现需研究一种百香果花粉离体萌发的液体培养基及离体花粉的培养方法，以在较短时间下提高百香果花粉的离体培养萌发率。
技术实现思路
本专利技术提供一种高效的百香果花粉离体萌发液体培养基及培养方法，提供的液体培养基的组分简单、制作时无需调节pH值；所述百香果花粉离体萌发的培养方法，培养时间短，且培养后的花粉萌发率高。为实现上述目的提供如下技术方案：一种高效的百香果花粉离体萌发液体培养基，包含蔗糖、PEG4000、硼酸、Ca(NO3)2·4H2O、H2O。进一步地，所述液体培养基包括如下重量百分数的原料：12％-18％的蔗糖、12％-18％的PEG4000、0.0025％-0.005％的硼酸、0.025-0.03％的Ca(NO3)2·4H2O，余量为H2O。本专利技术提供了利用所述液体培养基进行百香果花粉离体萌发的培养方法，包括如下步骤：(1)在百香果花朵刚开裂时采集花朵，轻轻取下花药，将花药平铺在硫酸纸上，置于通风干燥处待花粉自然散粉后，轻轻扫下花粉备用；(2)取所述液体培养基置于培养皿中，摇晃使所述液体培养基均匀分布在培养皿中；(3)蘸取花粉均匀的播散在所述装有液体培养基的培养皿中，盖上培养皿盖子，置于恒温培养箱中，暗培养一定时间即可萌发。进一步地，所述花粉在液体培养基中的接种量为培养基质量的0.7-0.75％。进一步地，所述液体培养基的使用体积：培养皿直径为4ml:6-6.5cm。进一步地，所述恒温培养箱中的温度为22-25℃，相对湿度为85-90％。进一步地，所述暗培养时间为3.5-4小时。进一步地，所述百香果花粉的萌发率达到96％以上。本专利技术所用的蔗糖、PEG4000、硼酸、Ca(NO3)2·4H2O均购自国内外原料公司，可直接使用。本专利技术具有以下有益效果：1.本专利技术培养基的组分中只含有蔗糖、PEG4000、硼酸、及Ca(NO3).4H2O，培养基组分简单，且无需调节培养基的pH值、不受百香果自花授粉亲和性的影响；通过加入PEG4000，调节培养基中的蔗糖、PEG4000及硼酸浓度，PEG4000与蔗糖起到协力作用，再在硼酸和Ca(NO3).4H2O的作用下调节花粉膜的渗透压，刺激芽内激素调节，促进发芽；使台农一号自交代百香果的花粉离体萌发率提高到96.5％，紫百香果的花粉离体萌发率提高到90.6％，黄百香果的花粉离体萌发率提高到91.8％。紫百香果、黄百香果及台农一号花粉在该培养基中萌发率均较高。2.本专利技术通过液体薄层培养的方法，于暗处培养，可将培养时间由原来的24小时缩短为3-4小时，大大提高培养效率。附图说明图1为本专利技术实施例3的台农一号百香果花粉在显微镜4倍目镜下的萌发图。图2为专利技术实施例2-3的紫百香果花粉在显微镜4倍目镜下的萌发图。图3为专利技术实施例3的黄百香果花粉在显微镜4倍目镜下的萌发图。图4为本专利技术实施例3中pH＝3.5下培养的台农一号百香果花粉在显微镜4倍目镜下的萌发图。图5为本专利技术实施例3中pH＝4.5下培养的台农一号百香果花粉显微镜4倍目镜下的萌发图。图6为本专利技术实施例3中pH＝5.5下培养的台农一号百香果花粉显微镜4倍目镜下的萌发图。图7为本专利技术实施例3中pH＝6.0下培养的台农一号百香果花粉显微镜4倍目镜下的萌发图。图8为本专利技术实施例3中pH＝6.5下培养的台农一号百香果花粉显微镜4倍目镜下的萌发图。图9为本专利技术实施例3中pH＝7.5下培养的台农一号百香果花粉显微镜4倍目镜下的萌发图。图10为本专利技术实施例3中PEG400下培养的台农一号百香果花粉显微镜4倍目镜下的萌发图。图11为本专利技术实施例3中PEG800下培养的台农一号百香果花粉显微镜4倍目镜下的萌发图。图12为本专利技术实施例3中PEG2000下培养的台农一号百香果花粉显微镜4倍目镜下的萌发图。图13为本专利技术实施例3中PEG3350下培养的台农一号百香果花粉显微镜4倍目镜下的萌发图。图14为本专利技术实施例3中PEG4000下培养的台农一号百香果花粉显微镜4倍目镜下的萌发图。图15为本专利技术实施例3中PEG6000下培养的台农一号百香果花粉显微镜4倍目镜下的萌发图。图16为本专利技术实施例3中PEG8000下培养的台农一号百香果花粉显微镜4倍目镜下的萌发图。图17为本专利技术实施例3中硼酸浓度＝0％下培养的台农一号百香果花粉显微镜4本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高效的百香果花粉离体萌发液体培养基，其特征在于，所述液体培养基中包含蔗糖、PEG4000、硼酸、Ca(NO

【技术特征摘要】
1.一种高效的百香果花粉离体萌发液体培养基，其特征在于，所述液体培养基中包含蔗糖、PEG4000、硼酸、Ca(NO3)2·4H2O、H2O。


2.根据权利要求1所述高效的百香果花粉离体萌发液体培养基，其特征在于，包括如下重量百分数的原料：12％-18％的蔗糖、12％-18％的PEG4000、0.0025％-0.005％的硼酸、0.025-0.03％的Ca(NO3)2·4H2O，余量为H2O。


3.利用如权利要求1或2所述的高效的百香果花粉离体萌发液体培养基进行百香果花粉离体萌发的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)在百香果花朵刚开裂时采集花朵，轻轻取下花药，将花药平铺在硫酸纸上，置于通风干燥处待花粉自然散粉后，用毛笔轻轻扫下花粉备用；
(2)配制所述液体培养基置于培养皿中，摇晃使所述液体培养基均匀分布在培养皿中；
(3)用毛笔蘸取百香...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡昭艳，王小媚，董龙，邱文武，苏伟强，任惠，黄章保，刘业强，方位宽，
申请(专利权)人：广西壮族自治区农业科学院，
类型：发明
国别省市：广西;45