生物修补网片及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种生物修补网片及其制备方法和应用。上述生物修补网片的制备方法包括如下步骤：将动物肌腱组织沿纤维轴向切片，然后进行反复冻融，复融后进行辊压、陈化，得到胶原纤维束；采用化学试剂对胶原纤维束进行脱细胞、去DNA、去α‑Gal抗原和除去可溶性杂蛋白，得到去除免疫原性后的胶原纤维束；将去除免疫原性后的胶原纤维束进行冷冻干燥，然后在真空条件下、100℃～115℃下进行交联，得到交联后的胶原纤维束；将交联后的胶原纤维束进行辊压展纤，然后编织，得到生物修补网片。上述生物修补网片的制备方法能够制备得到免疫安全性高且力学性能好的生物修补网片。

【技术实现步骤摘要】
生物修补网片及其制备方法和应用
本专利技术涉及生物材料领域，特别是涉及一种生物修补网片及其制备方法和应用。
技术介绍
传统的补片材料分为合成补片和生物补片。合成补片的原理是在缺损区域形成以补片为中心的牢固的类似疤痕的纤维组织复合体。但局部组织的弹性有所降低，如果疤痕样的纤维结缔组织形成过多的话患者术后常会有绷紧感、牵拉感或有人觉得是异物感。部分患者甚至可能会出现浆液肿、感染、慢性疼痛、补片皱缩、肠粘连、肠梗阻、肠瘘和复发等问题。生物补片是由胶原、弹性纤维、糖蛋白、黏连蛋白、蛋白多糖所构成的细胞外基质纤维状支架。主要特点是本身无血管及活细胞，植入后早期有新生血管长入，同时诱导宿主成纤维细胞进入，分泌胶原置换异体胶原实现与宿主组织无差别的整合，在局部形成一层物理屏障，防止创伤局部的组织黏连和病理性增生并最终实现对组织缺损及损伤的再生修复。目前国内生物补片市场中常见的有以下几种：猪小肠粘膜下层(如库克公司、大清生物公司)，主要应用领域：伴有污染或者潜在感染的腹股沟疝/腹壁疝、食道裂孔疝、肛瘘修补、阴道再生、脑膜修复。人尸真皮(如清源伟业公司)，主要应用领域：牙周补片、伴有污染或潜在感染的腹股沟疝或腹壁疝。交联补片：交联牛心包(如冠昊生物或佰仁医疗)，主要应用领域：脑膜补片、腹股沟疝/腹壁疝。但传统的生物补片植入体内后会与机体发生反应，开始降解而导致力学强度下降，从而导致机体复发。另外生物补片在机体内受力局部产生应力集中而破裂、存在免疫安全性问题也是复发的诱因。
技术实现思路
基于此，有必要提供一种能够使制备得到的生物修补网片的力学性能好、免疫安全性高的生物修补网片的制备方法。此外，还提供一种生物修补网片和生物修补网片的应用。一种生物修补网片的制备方法，包括如下步骤：将动物肌腱组织沿纤维轴向切片，然后进行反复冻融，复融后进行辊压、陈化，得到胶原纤维束；采用化学试剂对所述胶原纤维束进行脱细胞、去DNA、去α-Ga1抗原和除去可溶性杂蛋白，得到去除免疫原性后的胶原纤维束；将所述去除免疫原性后的胶原纤维束进行冷冻干燥，然后在真空条件下、100℃～115℃下进行交联，得到交联后的胶原纤维束；及将所述交联后的胶原纤维束进行辊压展纤，然后编织，得到生物修补网片。在其中一个实施例中，所述将动物肌腱组织沿纤维轴向切片的步骤中，切片的厚度为1mm～5mm。在其中一个实施例中，所述反复冻融的次数为3次～8次，且反复冻融的步骤中，冷冻的温度为-80℃～-60℃。在其中一个实施例中，所述复融后进行辊压、陈化的步骤包括：将复融后的所述胶原纤维束进行辊压1次～3次，每次辊压后，在2℃～8℃下进行陈化2h～4h。在其中一个实施例中，所述将动物肌腱组织沿纤维轴向切片，然后进行反复冻融，复融后进行辊压、陈化，得到胶原纤维束的步骤之后，还包括将所述胶原纤维束进行剥离，以除去断裂的纤维束的步骤。在其中一个实施例中，所述采用化学试剂对所述胶原纤维束进行脱细胞、去DNA、去α-Gal抗原和除去可溶性杂蛋白的步骤包括：依次采用碱溶液、去离子型去垢剂、酸溶液和tris碱液对所述胶原纤维束进行浸泡，以使胶原纤维束脱细胞、去DNA、去α-Gal抗原和除去可溶性杂蛋白。在其中一个实施例中，所述碱溶液的浓度为0.1mol/L～1.0mol/L，所述碱溶液浸泡所述胶原纤维束的时间为4h～8h。在其中一个实施例中，所述非离子型去垢剂为TritonX-100、吐温-60或吐温-80，且所述非离子型去垢剂的质量浓度为1％～2％，所述非离子型去垢剂浸泡所述胶原纤维束的时间为4h～8h。在其中一个实施例中，所述酸溶液的浓度为0.1mol/L～0.5mol/L，且所述酸溶液浸泡所述胶原纤维束的时间为4h～8h。在其中一个实施例中，采用tris碱液对所述胶原纤维束进行浸泡的步骤包括：使用浓度为0.1mol/L～2.0mol/L的tris碱液调节pH为7.5～10.0，反复浸泡1次～5次，每次浸泡2h～6h，然后用同体积的水清洗2次～6次。在其中一个实施例中，冷冻干燥的步骤包括：将所述去除免疫原性后的胶原纤维束在-80℃～-60℃下进行速冻4h～8h，然后进行冷冻干燥24h～36h。在其中一个实施例中，所述将所述交联后的胶原纤维束进行辊压展纤的步骤包括：将所述交联后的胶原纤维束置于辊压机中，调节辊间距离从厚至薄，最薄不超过0.3mm，进行辊压2次～10次，每次辊压后进行陈化2h～4h。由上述生物修补网片的制备方法制备得到的生物修补网片。上述生物修补网片在制备疝修复材料、腹壁缺损修复材料或盆底修复材料中的应用。上述生物修补网片的制备方法选用动物肌腱组织为原料，肌腱组织中I型胶原含量最高，且纤维束定向排列整齐，有利于提高最终得到的生物修补网片的力学性能，且依次采用碱溶液、非离子型去垢剂、酸溶液和tris碱液对胶原纤维束进行处理，能够去除免疫原性，提高生物修补网片在使用过程中的免疫安全性。然后进行冷冻干燥除去溶剂，且冷冻干燥过程中对胶原纤维束的影响较小。通过对胶原纤维束进行高温交联一方面能够封闭残留的抗原基团，使某些活性基团失活，另一方面高温交联过程中未添加任何交联剂，从而提高了免疫安全性。最后对胶原纤维束进行展纤和编织，提高了力学性能。因此，上述生物修补网片的制备方法能够制备得到免疫安全性高且力学性能好的生物修补网片。附图说明图1为一实施方式的生物修补网片的制备方法的工艺流程图；图2为实施例1的肌腱组织切片后进行苏木精-伊红染色后的微观结构图；图3为实施例1的肌腱组织在扫描电子显微镜下的微观结构图；图4为实施例1的步骤(1)中剥离后得到的胶原纤维束图；图5为实施例1的步骤(3)中冷冻干燥后的胶原纤维束的SEM图；图6为实施例1制备得到的生物修补网片植入大鼠皮下后大鼠的皮下组织的SEM图；图7为大鼠体内植入实施例1的生物修补网片后不同时间点的荧光强度图。具体实施方式为了便于理解本专利技术，下面将结合具体实施方式对本专利技术进行更全面的描述。具体实施方式中给出了本专利技术的较佳的实施例。但是，本专利技术可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本专利技术的公开内容的理解更加透彻全面。除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体地实施例的目的，不是旨在于限制本专利技术。请参阅图1，一实施方式的生物修补网片的制备方法，包括如下步骤：步骤S110：将动物肌腱组织沿纤维轴向切片，然后进行反复冻融，复融后进行辊压、陈化，得到胶原纤维束。其中，动物为哺乳动物。动物的肌腱组织中I型胶原含量最高，纤维束定向排列整齐，而其他组织如韧带或腹膜、真皮等含有弹性纤维、III型胶原等，且非定向、杂乱排列。而胶原本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种生物修补网片的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：/n将动物肌腱组织沿纤维轴向切片，然后进行反复冻融，复融后进行辊压、陈化，得到胶原纤维束；/n采用化学试剂对所述胶原纤维束进行脱细胞、去DNA、去α-Gal抗原和除去可溶性杂蛋白，得到去除免疫原性后的胶原纤维束；/n将所述去除免疫原性后的胶原纤维束进行冷冻干燥，然后在真空条件下、100℃～115℃下进行交联，得到交联后的胶原纤维束；及/n将所述交联后的胶原纤维束进行辊压展纤，然后编织，得到生物修补网片。/n

【技术特征摘要】
1.一种生物修补网片的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
将动物肌腱组织沿纤维轴向切片，然后进行反复冻融，复融后进行辊压、陈化，得到胶原纤维束；
采用化学试剂对所述胶原纤维束进行脱细胞、去DNA、去α-Gal抗原和除去可溶性杂蛋白，得到去除免疫原性后的胶原纤维束；
将所述去除免疫原性后的胶原纤维束进行冷冻干燥，然后在真空条件下、100℃～115℃下进行交联，得到交联后的胶原纤维束；及
将所述交联后的胶原纤维束进行辊压展纤，然后编织，得到生物修补网片。


2.根据权利要求1所述的生物修补网片的制备方法，其特征在于，所述将动物肌腱组织沿纤维轴向切片的步骤中，切片的厚度为1mm～5mm；及/或，
所述将动物肌腱组织沿纤维轴向切片，然后进行反复冻融，复融后进行辊压、陈化，得到胶原纤维束的步骤之后，还包括将所述胶原纤维束进行剥离，以除去断裂的胶原纤维束的步骤；及/或，
所述冷冻干燥的步骤包括：将所述去除免疫原性后的胶原纤维束在-80℃～-60℃下进行速冻4h～8h，然后进行冷冻干燥24h～36h。


3.根据权利要求1所述的生物修补网片的制备方法，其特征在于，所述反复冻融的次数为3次～8次，且反复冻融的步骤中，冷冻的温度为-80℃～-60℃。


4.根据权利要求1所述的生物修补网片的制备方法，其特征在于，所述复融后进行辊压、陈化的步骤包括：将复融后的所述胶原纤维束进行辊压1次～3次，每次辊压后，在2℃～8℃下进行陈化2h～4h。


5.根据权利要求1所述的生物修补网片的制备方法，其特征在于，所述采用化学试剂对所述胶原纤维束进行脱细胞、去DNA、去α-Gal抗原和除去可溶性杂蛋白的步骤包括：依次采用碱溶液、非离子...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏欣苗，佘振定，谭荣伟，
申请(专利权)人：深圳兰度生物材料有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44