一种快速定量细胞外囊泡样本浓缩方法技术

本发明专利技术涉及一种快速定量细胞外囊泡样本浓缩方法，包括以下步骤：步骤1,筛板分隔浓缩容器内空间为部分相通，且分别向外连通的两部分，一端为上开口，一端为下开口；步骤2,自上开口向筛板一侧加入待浓缩样本，并充满下开口一侧空间；步骤3,自上开口向容器加入高吸水材料；步骤4,给予待浓缩样本自上开口一侧向下开口一侧的持续的力，直至筛板吸水材料一侧可流动液体吸收完毕；步骤5,收集排出的剩余液体；本发明专利技术的浓缩速度快，20毫升浓缩至1ml，仅需3‑5分钟，充分利用了超吸水材料的快速吸水能力至浓缩过程；过量超吸水材料可以加速吸水能力，由于超吸水材料价格低，超量造成的使用成本上涨有限。

【技术实现步骤摘要】
一种快速定量细胞外囊泡样本浓缩方法
本专利技术属于建筑
，尤其涉及一种快速定量细胞外囊泡样本浓缩方法。
技术介绍
生物大分子在制备过程中，为了保存和鉴定的目的，往往需要进行浓缩。常用的浓缩方法的：1、减压加温蒸发浓缩：通过降低液面压力使液体沸点降低，减压的真空度愈高，液体沸点降得愈低，蒸发愈快，此法适用于一些不耐热的生物大分子的浓缩。缺点：不适用于不耐热细胞外囊泡。2、空气流动蒸发浓缩：空气的流动可使液体加速蒸发,铺成薄层的溶液，表面不断通过空气流；或将生物大分子溶液装入透析袋内置于冷室，用电扇对准吹风，使透过膜外的溶剂不沁蒸发，而达到浓缩目的。缺点：此法浓缩速度慢，不适于大量溶液的浓缩。3、冰冻法：生物大分子在低温结成冰，盐类及生物大分子不进入冰内而留在液相中，操作时先将待浓缩的溶液冷却使之变成固体，然后缓慢地融解，利用溶剂与溶质融点介点的差别而达到除去大部分溶剂的目的。如蛋白质和酶的盐溶液用此法浓缩时，不含蛋白质和酶的纯冰结晶浮于液面，蛋白质和酶则集中于下层溶液中，移去上层冰块，可得蛋白质和酶的浓缩液。缺点：浓缩物浓度受低共熔浓度和冰晶可分离程度的制约，成本高。4、吸收法：通过吸收剂直接收除去溶液中溶液分子使之浓缩。所用的吸收剂必需与溶液不起化学反应，对生物大分子不吸附，易与溶液分开。常用的吸收剂有聚乙二醇，聚乙稀吡咯酮、蔗糖和凝胶等，使用聚乙二醇吸收剂时，先将生物大分子溶液装入半透膜的袋里，外加聚乙二醇复盖置于4度下，袋内溶剂渗出即被聚乙二醇迅速吸去，聚乙二醇被水饱和后要更换新的直至达到所需要的体积。缺点：使用超滤膜或者透析膜包裹待浓缩，浓缩速度慢，浓缩量不易控制。5、超滤法：超滤法是使用一种特别的薄膜对溶液中各种溶质分子进行选择性过滤的方法，不液体在一定压力下(氮气压或真空泵压)通过膜时，溶剂和小分子透过，大分子受阻保留，这是近年来发展起来的新方法，最适于生物大分子尤其是蛋白质和酶的浓缩或脱盐，并具有成本低，操作方便，条件温和，能较好地保持生物大分子的活性，回收率高等优点。应用超滤法关键在于膜的选择，不同类型和规格的膜，水的流速，分子量截止值(即大体上能被膜保留分子最小分子量值)等参数均不同，必须根据工作需要来选用。另外，超滤装置形式，溶质成份及性质、溶液浓度等都对超滤效果的一定影响。缺点：使用成本高，生产技术由国外公司垄断。现有吸收浓缩法，相较于其他浓缩办法超滤材料成本低廉，一种办法是将超吸水材料直接投入待浓缩样本中；其缺点是：1)浓缩终点不易控制，2)难于浓缩至固定体积；3)超量超吸水材料投放会导致过度浓缩而损失样本，4)浓缩后吸水材料与浓缩液不易分离；5)对于含有盐的溶液浓缩速度慢；另一种办法是，将超吸水材料包裹于超滤膜袋中；其缺点是：1)由于在无压力条件下，超滤膜水通量低，导致浓缩过程缓慢，无法充分发挥超吸水材料快速吸水的性能，通常利用超吸水材料饱和吸水浓缩需要1小时以上，2)浓缩率有限，一般只能浓缩3-4倍，3)超滤膜包裹吸水材料，导致吸水材料吸水膨胀空间受限，从而限制了浓缩能力。针对以上问题，故，有必要对其进行改进。
技术实现思路
本专利技术是为了克服上述现有技术中的缺陷，提供一种快速定量细胞外囊泡样本浓缩方法。为了达到以上目的，本专利技术所采用的技术方案是：一种快速定量细胞外囊泡样本浓缩方法，包括以下步骤：步骤1,筛板分隔浓缩容器内空间为部分相通，且分别向外连通的两部分，一端为上开口，一端为下开口；步骤2,自上开口向筛板一侧加入待浓缩样本，并充满下开口一侧空间；步骤3,自上开口向容器加入高吸水材料；步骤4,给予待浓缩样本自上开口一侧向下开口一侧的持续的力，直至筛板吸水材料一侧可流动液体吸收完毕；步骤5,收集排出的剩余液体。作为本专利技术的一种优选方案，所述吸水材料相对于筛板的对侧剩余液体为浓缩后包含细胞外囊泡的液体。作为本专利技术的一种优选方案，所述步骤4中，给予待浓缩样本相向于吸水材料对侧空间的持续的力的加速度为40g～320g，持续时间1～3分钟。作为本专利技术的一种优选方案，所述待浓缩样本包括尿液小细胞外囊泡、体外培养细胞培养上清小细胞外囊泡、大肠杆菌外膜囊泡。作为本专利技术的一种优选方案，所述过滤筛板的间隔疏水筛板孔径大于2um，小于超吸水材料尺寸。作为本专利技术的一种优选方案，所述浓缩容器中内超吸水材料为超吸水树脂颗粒、超吸水纤维。作为本专利技术的一种优选方案，所述浓缩容器具有两个独立向外联通的且可控制开闭的上开口和下开口，上开口上可拆式装配有上盖，下开口上可拆式装配有下盖。作为本专利技术的一种优选方案，所述浓缩容器包括浓缩管体、上端口和上端口连接部；上端口连接部用于连接浓缩管体和上端口，上端口的外径大于浓缩管体的外径，上端口连接部呈喇叭状结构。作为本专利技术的一种优选方案，所述浓缩容器的体积为5ml～25ml。作为本专利技术的一种优选方案，所述浓缩容器中的吸水材料吸水量大于可加入的液体体积。本专利技术的有益效果是：1、浓缩速度快，20毫升浓缩至1ml，仅需3-5分钟，充分利用了超吸水材料的快速吸水能力至浓缩过程；过量超吸水材料可以加速吸水能力，由于超吸水材料价格低，超量造成的使用成本上涨有限；2、定量浓缩，浓缩终液体积可控；3、使用方便，无需配置专用昂贵设备，可以重力或者低速离心即可。附图说明图1为本专利技术实施例的浓缩容器结构示意图；图2为本专利技术实施例的浓缩容器结构分解图；图3为本专利技术实施例1的浓缩纯化后尿液小细胞外囊泡操作步骤图；图4为本专利技术实施例1的浓缩前尿液细胞外囊泡透射电镜形态图；图5为本专利技术实施例1的浓缩后尿液细胞外囊泡透射电镜形态图；图6为本专利技术实施例1的浓缩前尿液细胞外囊泡纳米颗粒追踪检测粒径分布图；图7为本专利技术实施例1的浓缩后尿液细胞外囊泡纳米颗粒追踪检测粒径分布图；图8为本专利技术实施例2的浓缩纯化后大鼠血浆小细胞外囊泡操作步骤图；图9为本专利技术实施例2的浓缩前大鼠血浆小细胞外囊泡透射电镜形态图；图10为本专利技术实施例2的浓缩后大鼠血浆小细胞外囊泡透射电镜形态图；图11为本专利技术实施例2的浓缩前大鼠血浆小细胞外囊泡纳米颗粒追踪检测粒径分布图；图12为本专利技术实施例2的浓缩后大鼠血浆小细胞外囊泡纳米颗粒追踪检测粒径分布图；图13为本专利技术实施例3的浓缩纯化后大鼠血浆小细胞外囊泡操作步骤图；图14为本专利技术实施例3的浓缩前大鼠血浆小细胞外囊泡透射电镜形态图；图15为本专利技术实施例3的浓缩后大鼠血浆小细胞外囊泡透射电镜形态图；图16为本专利技术实施例3的浓缩前大鼠血浆小细胞外囊泡纳米颗粒追踪检测粒径分布图；图17为本专利技术实施例3的浓缩后大鼠血浆小细胞外囊泡纳米颗粒追踪检测粒径分布图；图中附本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种快速定量细胞外囊泡样本浓缩方法，其特征在于：包括以下步骤：/n步骤1,筛板分隔浓缩容器内空间为部分相通，且分别向外连通的两部分，一端为上开口，一端为下开口；/n步骤2,自上开口向筛板一侧加入待浓缩样本，并充满下开口一侧空间；/n步骤3,自上开口向容器加入高吸水材料；/n步骤4,给予待浓缩样本自上开口一侧向下开口一侧的持续的力，直至筛板吸水材料一侧可流动液体吸收完毕；/n步骤5,收集排出的剩余液体。/n

【技术特征摘要】
1.一种快速定量细胞外囊泡样本浓缩方法，其特征在于：包括以下步骤：
步骤1,筛板分隔浓缩容器内空间为部分相通，且分别向外连通的两部分，一端为上开口，一端为下开口；
步骤2,自上开口向筛板一侧加入待浓缩样本，并充满下开口一侧空间；
步骤3,自上开口向容器加入高吸水材料；
步骤4,给予待浓缩样本自上开口一侧向下开口一侧的持续的力，直至筛板吸水材料一侧可流动液体吸收完毕；
步骤5,收集排出的剩余液体。


2.根据权利要求1所述的一种快速定量细胞外囊泡样本浓缩方法，其特征在于：所述吸水材料相对于筛板的对侧剩余液体为浓缩后包含细胞外囊泡的液体。


3.根据权利要求1所述的一种快速定量细胞外囊泡样本浓缩方法，其特征在于：所述步骤4中，给予待浓缩样本相向于吸水材料对侧空间的持续的力的加速度为40g～320g，持续时间1～3分钟。


4.根据权利要求1所述的一种快速定量细胞外囊泡样本浓缩方法，其特征在于：所述待浓缩样本包括尿液小细胞外囊泡、动物血浆小细胞外囊泡、大肠杆菌外膜囊泡。


5.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：陆路，
申请(专利权)人：易春，方国伟，陆路，
类型：发明
国别省市：江苏;32