一种用于鉴定待测植物样品是否来源于SbSNAC1-382事件或其后代的方法技术

本发明专利技术公开了一种用于鉴定待测植物样品是否来源于SbSNAC1‑382事件或其后代的方法。本发明专利技术的发明专利技术人将SbSNAC1基因通过农杆菌介导的方法转入到玉米自交系郑58的基因组中，获得了一个转基因玉米事件SbSANC1‑382，简称SbSNAC1‑382事件。抗旱性鉴定显示，SbSNAC1‑382事件较玉米自交系郑58的抗旱性显著提高。此外，经检测，T

【技术实现步骤摘要】
一种用于鉴定待测植物样品是否来源于SbSNAC1-382事件或其后代的方法
本专利技术属于生物
，具体涉及一种用于鉴定待测植物样品是否来源于SbSNAC1-382事件或其后代的方法。
技术介绍
水资源短缺严重地影响了世界粮食生产，每年因水资源短缺造成的粮食减产占作物减产的50％以上，所带来的直接经济损失难以估计。我国干旱、半干旱地区面积约占全国国土面积二分之一以上。据统计，我国常年旱灾面积达到耕地总面积的20％左右，近40年来每年仅因干旱造成的粮食减产达就达1000亿公斤以上。玉米是世界上最重要的粮食、饲料和相关工业原料兼用作物之一。在我国，自2009年玉米已经成为第一大粮食作物。传统的玉米遗传育种对玉米抗旱性的改良起到了一定的作用，但很难突破种间的遗传限制而显著提高玉米的抗旱性。转基因技术可打破物种界限，对基因进行定向改造和重组转移，对现有品种的抗旱性进行改良，可以极大地提高玉米的抗旱性。发达国家，特别是美国培育、推广转基因玉米的实践也已经证明，转基因技术培育新品种可显著提高玉米抗旱能力，是大幅度提高产量和改善品质的最现实有效的途径，已经成为国际玉米育种发展的主要方向。2011年12月，美国农业部动植物卫生检疫局(APHIS)正式批准了孟山都转基因抗旱玉米MON87460，这意味着世界第一个转基因抗旱玉米可以在生产中大规模推广和利用。该抗旱玉米所转基因为CspB基因(CspB基因来自枯草芽孢杆菌，编码一种RNA伴侣蛋白)，在逆境条件下，该基因可以增强植物细胞的功能，在水分缺乏的条件下减少产量的损失。在干旱的情况下，转该基因的玉米自交系和杂交种可以显著地提高玉米的生物量和产量，在美国西部干旱地区的抗旱玉米田间试验已经达到甚至超过了6％至10％的增产目标。SbSNAC1基因是中国农业科学院作物科学研究所从新疆一个耐旱的地方高粱品种XGL-1中克隆出的NAC家族基因。该基因在拟南芥中过量表达可以显著提高转基因拟南芥植株的耐旱性(Luetal.，2013)。
技术实现思路
本专利技术的目的是鉴定植物样品是否来源于SbSNAC1-382事件或其后代，SbSNAC1-382事件为玉米ZeamaysSbSNAC1-382CGMCCNo.17493。植物样品可为植物叶片、种子等等。本专利技术首先保护用于鉴定植物样品是否来源于SbSNAC1-382事件或其后代的方法，可包括如下步骤：检测待测植物样品的基因组DNA中是否含有DNA片段A和/或DNA片段B；然后进行如下判断：如果待测植物样品的基因组DNA含有DNA片段A和/或DNA片段B，则待测植物样品来源于SbSNAC1-382事件或其后代；如果待测植物样品的基因组DNA不含有DNA片段A和/或DNA片段B，则待测植物样品不来源于SbSNAC1-382事件或其后代；DNA片段A的核苷酸序列如序列表中序列3所示；DNA片段B的核苷酸序列如序列表中序列4所示；SbSNAC1-382事件为玉米ZeamaysSbSNAC1-382CGMCCNo.17493。上述方法中，所述“检测待测植物样品的基因组DNA中是否含有DNA片段A和/或DNA片段B”的方法可为S1)或S2)或S3)。S1)直接测序。S2)用引物对X和/或引物对Y对待测植物样品的基因组DNA进行PCR扩增，然后进行如下判断：如果得到目的扩增产物，则待测植物样品来源于SbSNAC1-382事件或其后代；如果没有得到目的扩增产物，则待测植物样品不来源于SbSNAC1-382事件或其后代；引物对X由上游引物FX和下游引物RX组成；上游引物FX为序列表中序列3自5’末端起第1-451位所示的DNA分子的一部分；下游引物RX为序列表中序列3自5’末端起第452-933位所示的DNA分子的一部分的反向互补序列；引物对X的目的扩增产物为DNA分子X；引物对Y由上游引物FY和下游引物RY组成；上游引物FY为序列表中序列4自5’末端起第1-352位所示的DNA分子的一部分；下游引物RY为序列表中序列4自5’末端起第353-547位所示的DNA分子的一部分的反向互补序列；引物对Y的目的扩增产物为DNA分子Y。S3)用能特异结合所述DNA分子X的探针甲和/或用能特异结合所述DNA分子Y的探针乙对待测植物样品的基因组DNA进行Southern杂交，然后进行如下判断：如果得到杂交片段，则待测植物样品来源于SbSNAC1-382事件或其后代；若不能得到杂交片段，则待测植物样品不来源于SbSNAC1-382事件或其后代。所述引物对X可为引物对X1、引物对X2和引物对X3中的至少一个。引物对X1可由引物P1和引物P2组成。引物对X2可由引物P3和引物P4组成。引物对X3可由引物P1和引物P4组成。引物P1的核苷酸序列可如序列表中序列5所示。引物P2的核苷酸序列可如序列表中序列6所示。引物P3的核苷酸序列可如序列表中序列7所示。引物P4的核苷酸序列可如序列表中序列8所示。所述引物对Y可为引物对Y1、引物对Y2、引物对Y3和引物对Y4中的至少一个。引物对Y1可由引物S1和引物S3组成。引物对Y2可由引物S2和引物S3组成。引物对Y3可由引物S1和引物S4组成。引物对Y4可由引物S2和引物S4组成。引物S1的核苷酸序列可如序列表中序列9所示。引物S2的核苷酸序列可如序列表中序列10所示。引物S3的核苷酸序列可如序列表中序列11所示。引物S4的核苷酸序列可如序列表中序列12所示。引物对X1的目的扩增产物(即DNA分子X)的核苷酸序列可如序列表中序列3自5’末端起第215-525位所示。引物对X2的目的扩增产物(即DNA分子X)的核苷酸序列可如序列表中序列3自5’末端起第323-564位所示。引物对X3的目的扩增产物(即DNA分子X)的核苷酸序列可如序列表中序列3自5’末端起第215-564位所示。引物对Y1的目的扩增产物(即DNA分子Y)的核苷酸序列可如序列表中序列4自5’末端起第45-547位所示。引物对Y2的目的扩增产物(即DNA分子Y)的核苷酸序列可如序列表中序列4自5’末端起第1-547位所示。引物对Y3的目的扩增产物(即DNA分子Y)的核苷酸序列可如序列表中序列4自5’末端起第215-436位所示。引物对Y4的目的扩增产物(即DNA分子Y)的核苷酸序列可如序列表中序列4自5’末端起第1-436位所示。本专利技术还保护用于鉴定待测植物样品是否来源于SbSNAC1-382事件或其后代的试剂盒。本专利技术所保护的用于鉴定待测植物样品是否来源于SbSNAC1-382事件或其后代的试剂盒具体可为试剂盒甲；所述试剂盒甲可包括上述任一所述引物对X和/或引物对Y；SbSNAC1-382事件可为玉米ZeamaysSbSNAC1-382CGMCCNo.17493。所述试剂盒甲具体可由上述任一所述引物本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于鉴定待测植物样品是否来源于SbSNAC1-382事件或其后代的方法，包括如下步骤：检测待测植物样品的基因组DNA中是否含有DNA片段A和/或DNA片段B；然后进行如下判断：如果待测植物样品的基因组DNA含有DNA片段A和/或DNA片段B，则待测植物样品来源于SbSNAC1-382事件或其后代；如果待测植物样品的基因组DNA不含有DNA片段A和/或DNA片段B，则待测植物样品不来源于SbSNAC1-382事件或其后代；/nDNA片段A的核苷酸序列如序列表中序列3所示；/nDNA片段B的核苷酸序列如序列表中序列4所示；/nSbSNAC1-382事件为玉米Zea mays SbSNAC1-382 CGMCC No.17493。/n

【技术特征摘要】
1.用于鉴定待测植物样品是否来源于SbSNAC1-382事件或其后代的方法，包括如下步骤：检测待测植物样品的基因组DNA中是否含有DNA片段A和/或DNA片段B；然后进行如下判断：如果待测植物样品的基因组DNA含有DNA片段A和/或DNA片段B，则待测植物样品来源于SbSNAC1-382事件或其后代；如果待测植物样品的基因组DNA不含有DNA片段A和/或DNA片段B，则待测植物样品不来源于SbSNAC1-382事件或其后代；
DNA片段A的核苷酸序列如序列表中序列3所示；
DNA片段B的核苷酸序列如序列表中序列4所示；
SbSNAC1-382事件为玉米ZeamaysSbSNAC1-382CGMCCNo.17493。


2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述“检测待测植物样品的基因组DNA中是否含有DNA片段A和/或DNA片段B”的方法为S1)或S2)或S3)：
S1)直接测序；
S2)用引物对X和/或引物对Y对待测植物样品的基因组DNA进行PCR扩增，然后进行如下判断：如果得到目的扩增产物，则待测植物样品来源于SbSNAC1-382事件或其后代；如果没有得到目的扩增产物，则待测植物样品不来源于SbSNAC1-382事件或其后代；
引物对X由上游引物FX和下游引物RX组成；上游引物FX为序列表中序列3自5’末端起第1-451位所示的DNA分子的一部分；下游引物RX为序列表中序列3自5’末端起第452-933位所示的DNA分子的一部分的反向互补序列；引物对X的目的扩增产物为DNA分子X；
引物对Y由上游引物FY和下游引物RY组成；上游引物FY为序列表中序列4自5’末端起第1-352位所示的DNA分子的一部分；下游引物RY为序列表中序列4自5’末端起第353-547位所示的DNA分子的一部分的反向互补序列；引物对Y的目的扩增产物为DNA分子Y；
S3)用能特异结合DNA分子X的探针甲和/或能特异结合DNA分子Y的探针乙对待测植物样品的基因组DNA进行Southern杂交，然后进行如下判断：如果得到杂交片段，则待测植物样品来源于SbSNAC1-382事件或其后代；若不能得到杂交片段，则待测植物样品不来源于SbSNAC1-382事件或其后代。


3.如权利要求2所述的方法，其特征在于：
所述引物对X为引物对X1、引物对X2和引物对X3中的至少一个；
引物对X1由引物P1和引物P2组成；
引物对X2由引物P3和引物P4组成；
引物对X3由引物P1和引物P4组成；
引物P1的核苷酸序列如序列表中序列5所示；
引物P2的核苷酸序列如序列表中序列6所示；
引物P3的核苷酸序列如序列表中序列7所示；
引物P4的核苷酸序列如序列表中序列8所示；
所述引物对Y为引物对Y1、引物对Y2、引物对Y3和引物对Y4中的至少一个；
引物对Y1由引物S1和引物S3组成；
引物对Y2由引物S2和引物S3组成；
引物...

【专利技术属性】
技术研发人员：王天宇，张登峰，曾廷儒，李永祥，李春辉，宋燕春，石云素，黎裕，
申请(专利权)人：中国农业科学院作物科学研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11