阿魏酸酯酶BpFae基因的重组表达载体和重组菌，及重组表达的方法技术

本发明专利技术公开一种阿魏酸酯酶BpFae基因的重组表达载体和重组菌，并提供优化的表达条件的重组表达所述酶的方法。以出发载体是pGEX‑4T‑1构建含有本发明专利技术的阿魏酸酯酶BpFae基因表达载体，当以IPTG为诱导剂时，最优条件是：采用SOB培养基；初始pH：5.0；接种量：0.8％(v/v)；诱导时机：4h；IPTG浓度：0.05mM；诱导温度：26℃；摇床转速：240rpm；诱导时间：24h，如此获得的BpFae活性最高可达2.54U/mL；当以乳糖为诱导剂，采用LB培养基；乳糖浓度：6g/L；初始pH：5.5；诱导时机：5h；诱导温度：23℃；摇床转速：240rpm；装液量：50mL/250mL；接种量：0.2％(v/v)；诱导时间：32h，如此获得的BpFae活性最高可达7.43U/mL。本发明专利技术的最优诱导表达条件，可以更高效的制备阿魏酸酯酶BpFae。

【技术实现步骤摘要】
阿魏酸酯酶BpFae基因的重组表达载体和重组菌，及重组表达的方法
本专利技术属于基因工程领域，具体涉及阿魏酸酯酶、其编码基因及其应用。
技术介绍
植物细胞壁中的碳水化合物组分是现存最大的可再生资源库，而每年在全球范围内会产生数百万吨的农业废弃物，这不仅造成了大量的资源浪费，同时给环境保护带来很大压力[Nieter,A.,etal.,FeruloylesterasesfromSchizophyllumcommunetotreatfoodindustryside-streams.BioresourceTechnology,2016.220:p.38-46；Nieter,A.,etal.,Ap-coumaroylesterasefromRhizoctoniasolaniwithapronouncedchlorogenicacidesteraseactivity.NBiotechnol,2017.37(PtB):p.153-161.]。随着社会的高速发展，人类对能源利用的需求持续增加，同时不可再生资源日益减少。因此，人们可持续发展的意识不断增强本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种阿魏酸酯酶BpFae基因的重组表达载体，其中所述基因编码的氨基酸序列如SEQID NO:2所示，优选地所述重组表达载体的出发载体是pGEX-4T-1。/n

【技术特征摘要】
1.一种阿魏酸酯酶BpFae基因的重组表达载体，其中所述基因编码的氨基酸序列如SEQIDNO:2所示，优选地所述重组表达载体的出发载体是pGEX-4T-1。


2.一种阿魏酸酯酶BpFae基因的重组表达载体的制备方法，其中所述基因编码的氨基酸序列如SEQIDNO:2所示，其特征在于：用引物扩增含有所述基因的模板获得所述基因的扩增产物，然后与用限制性内切酶酶切的表达载体(优选为pGEX-4T-1)相连接，获得重组表达载体；优选地，所述基因与标签蛋白融合，更具体例如与组氨酸标签融合。


3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，用如SEQIDNO.9和SEQIDNO.10所示引物X1和X2扩增含有所述基因的模板获得所述基因的扩增产物，然后用SaII和BamHI双酶切表达载体pGEX-4T-1，再将所述扩增产物与双酶切的表达载体pGEX-4T-1相连接，得到重组表达载体。


4.含有权利要求1所述的重组表达载体，或如权利要求2或3所述制备方法得到的重组载体的重组细胞，优选地重组细胞是大肠杆菌，更优选为大肠杆菌BL21。


5.一种重组表达阿魏酸酯酶BpFae基因的方法，其包括培养如权利要求4所述的重组细胞，用IPTG或乳糖作为诱导剂进行诱导表达，再收集表达的阿魏酸酯酶BpFae的步骤。

【专利技术属性】
技术研发人员：范光森，孙宝国，李秀婷，富志磊，朱宇婷，
申请(专利权)人：北京工商大学，
类型：发明
国别省市：北京;11