一种微生物菌剂及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及农业生物技术领域，具体地说是一种微生物菌剂的制备方法和应用。菌剂的活性成分为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)。该菌剂对玉米茎腐病有较好的防治效果，可以用于玉米茎腐病的生物防治。该菌剂制备工艺简单，且高效、无毒、环境友好。

【技术实现步骤摘要】
一种微生物菌剂及其制备方法和应用
本专利技术涉及农业生物
，特别是涉及一种微生物菌剂及其制备方法和应用。
技术介绍
玉米茎腐病又称玉米茎基腐病、青枯病，是世界玉米产区发生较为普遍的一种系统侵染的土传病害，主要危害玉米植株的茎基部和根系。一般年份的发病率15％-20％，严重时可达70％以上，由此病害导致的产量损失一般在20％左右，严重的减产50％左右。近年来，随着玉米重迎茬面积不断增加，密植技术以及不抗病品种的应用等使得玉米茎腐病呈加重趋势，已成为制约玉米持续增产的重要限制因素之一。因此，迫切需要对这种病害进行科学防治。研究表明，引起玉米茎腐病的病原菌种类比较多，主要包括不等鞭毛菌门(Heterokontophyta)的腐霉菌、半知菌亚门(Derteromycotina)的镰刀菌、干腐菌和部分细菌等。禾谷镰刀菌(Fusariumgraminearum)是我国报道较多的玉米茎腐菌主要致病菌之一。防治方法主要由以下几种：(1)合理施肥，生态防控；(2)加强田间管理；(3)因地制宜选择种植抗病、耐病优良品种；(4)化学防治：一些化学种衣剂进行种子包衣处理可以用来防治茎腐病；(5)生物防治：筛选对茎腐病有良好抑制效果且定殖力强的微生物，在生产种植过程中施用，达到抑制茎腐病发生的作用。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种微生物菌剂及其制备方法和应用。为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案为：一种微生物菌剂含贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)。<br>所述微生物菌剂含贝莱斯芽孢杆菌株的培养物、培养浓缩物、培养菌悬液、发酵液或发酵分离上清液。所述的微生物菌剂的制备方法，将贝莱斯芽孢杆菌活化后接种于LB培养基中培养，得贝莱斯芽孢杆菌株的培养物、培养浓缩物、培养菌悬液、发酵液或发酵分离上清液。将贝莱斯芽孢杆菌活化后接种于LB培养基中，于180r/min，37℃振荡培养2天，即得发酵液；所述培养菌悬液为将上述发酵液经12000r/min离心1min后，弃上清液，沉淀悬浮于同体积的无菌水中，即得培养菌悬液。具体为1)LB培养基(g/L)制备：水1L，胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl10g，摇动容器直至溶质溶解，用5mol/LNaOH调pH至7.0-7.2；固体培养基加入15-20g琼脂；2)贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)在LB固体培养基上活化3次；3)取1环于50mlLB液体培养基，于150-180r/min，35-37℃摇床培养2天；4)发酵液经12000r/min离心1-2min后，弃上清液，沉淀悬浮于同体积的无菌水中，制备培养菌悬液。所述微生物菌剂用于防治玉米茎腐病。所述微生物菌剂用于防治由禾谷镰刀菌引起的玉米茎腐病。本专利技术的微生物菌剂通过对禾谷镰刀菌(Fusariumgraminearum)的抑菌实验，发现其能良好的抑制病原菌的生长，能对玉米茎腐病起到有效的防治作用。本专利技术的微生物菌剂具有以下优点：1)本专利技术的微生物菌剂采用以菌抑菌的方式发挥作用，对人体无害，在很大程度上保护了生态环境和农产品的安全。2)本专利技术菌剂使用灵活、简单、高效。3)本专利技术的微生物菌剂可以有效防治玉米茎腐病。附图说明图1为对禾谷镰刀菌(Fusariumgraminearum)的抑菌效果图；其中，图中A为贝莱斯芽孢杆菌；B为对照(LB液体培养基)；12为禾谷镰刀菌。具体实施方式实施例1微生物菌剂的制备1)LB培养基(g/L)制备：水1L，胰蛋白胨10g酵母提取物5gNaCl10g，摇动容器直至溶质溶解.用5mol/LNaOH调pH至7.0-7.2；固体培养基加入20g琼脂；2)贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)在LB固体培养基上活化3次；3)取1环于50mlLB液体培养基，于180r/min，37℃摇床培养2天；4)发酵液经12000r/min离心1min后，弃上清液，沉淀悬浮于同体积的无菌水中，制备培养菌悬液。贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)为市售产品。实施例2抑菌实验将禾谷镰刀菌(Fusariumgraminearum)接种在马铃薯培养基(g/L)(马铃薯浸取液1L，葡萄糖20g，pH自然，固体培养基加入15g琼脂)上，28℃，培养4-5天，将活化的禾谷镰刀菌用打孔器在菌落边缘打出直径8.5mm的病原菌菌饼。将禾谷镰刀菌(Fusariumgraminearum)菌饼放置于马铃薯平板中央，在距离平皿边缘1.5cm处打2个直径为7mm的孔，接种贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)菌液和LB液体培养基(对照)，28℃恒温培养，7天以后观察，结果见图1。由图1可见，贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)对病原菌具有较好的抑制效果。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种微生物菌剂，其特征在于：微生物菌剂含贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)。/n

【技术特征摘要】
1.一种微生物菌剂，其特征在于：微生物菌剂含贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)。


2.按权利要求1所述的微生物菌剂，其特征在于：所述微生物菌剂含贝莱斯芽孢杆菌株的培养物、培养浓缩物、培养菌悬液、发酵液或发酵分离上清液。


3.一种权利要求1或2所述的微生物菌剂的制备方法，其特征在于：
将贝莱斯芽孢杆菌活化后接种于LB培养基中培养，即得贝莱斯芽孢杆菌株的培养物、培养浓缩物、培养菌悬液、发酵液或发酵分离上清液。


4.按权利要求3所...

【专利技术属性】
技术研发人员：李新宇，李想，王欢欢，李旭，张惠文，
申请(专利权)人：中国科学院沈阳应用生态研究所，
类型：发明
国别省市：辽宁;21