测定治疗性细胞组合物的效力的方法和组合物技术

本公开提供了用于评估促进细胞和/或alpha beta TCR+T细胞的效力的效力测定法。

Methods and compositions for determining the efficacy of therapeutic cell compositions

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】测定治疗性细胞组合物的效力的方法和组合物对相关申请的交叉引用本申请要求2017年3月6日提交的美国临时申请序列号62/467,420的权益，其公开通过引用整体并入本文。
一般地，本公开涉及用于确定治疗性细胞组合物的效力的方法和组合物。专利技术背景效力测定法旨在通过检测或测量与一种或多种生理特性有关联的一种或多种生物标志物来预测细胞组合物的治疗活性。然而，由于作用的治疗机制在治疗性细胞组合物之间可以有所变化，因此可能难以鉴定与相关生物或生物物理特性可再现地关联的生物功能。另外，由于作用的治疗机制可以依赖于复杂的生物途径，因此确定哪些产物属性与确定效力最相关可能尤其具有挑战性。尽管如此，开发反映细胞组合物治疗特性并提供生产批次间一致性的可靠测量的效力测定法极其重要。本公开描述了用于评估移植促进细胞(FC)和/或alphabetaTCR+T细胞的治疗功效的新效力测定法。专利技术概述本文描述了用于评估促进细胞和/或alphabetaTCR+T细胞的效力的方法和组合物。在一方面，提供了确定包括促进细胞(FC)和/或alphabetaTCR+T细胞的样品的效力的方法。此类方法典型地包括使包括FC和/或alphabetaTCR+T细胞的样品与促有丝分裂刺激物接触；和确定样品中核糖体S6蛋白被磷酸化(pS6)的FC和/或alphabetaTCR+T细胞的数量。如本文所述，样品中pS6被磷酸化的FC和/或alphabetaTCR+T细胞的数量分别指示了样品中FC和/或alphabetaTCR+T细胞的效力。代表性的促有丝分裂刺激物包括但不限于，佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯(PMA)与离子霉素、植物血凝素(PHA)、伴刀豆球蛋白A(conA)和商陆有丝分裂原(pokeweedmitogen，PWM)。在一些实施方案中，使样品与促有丝分裂刺激物接触约5分钟至约60分钟(例如约20分钟至约30分钟)的时间段。在一些实施方案中，样品包括约100,000至约2,000,000个FC和/或alphabetaTCR+T细胞。在一些实施方案中，使用针对pS6的荧光标记的抗体确定样品中pS6被磷酸化的FC和/或alphabetaTCR+T细胞的数量。在一些实施方案中，使用FACS检测荧光标记的抗体的结合。在一些实施方案中，方法在冷冻FC和/或alphabetaTCR+T细胞之前进行。在一些实施方案中，方法在已冷冻的FC和/或alphabetaTCR+T细胞上进行。在一些实施方案中，样品中至少30％的FC是pS6+。在一些实施方案中，样品中至少30％的alphabetaTCR+T细胞是pS6+。在另一个方面，提供了确定FC和/或alphabetaTCR+T细胞的治疗剂量的方法。此类方法典型地包括提供包括FC和/或alphabetaTCR+T细胞的细胞样品；确定细胞样品的效力。如本文所述，细胞样品的效力可以是FC和/或alphabetaTCR+T细胞的治疗剂量的指示。在另一个方面，制品，其包括针对pS6的磷酸化形式的抗体和以下的至少一种：针对CD3的抗体、针对CD8的抗体和针对alphabetaTCR的抗体。在一些实施方案中，制品包括针对pS6的磷酸化形式的抗体、针对CD3的抗体和针对alphabetaT细胞受体(TCR)的抗体。在一些实施方案中，制品包括针对pS6的磷酸化形式的抗体和针对CD8的抗体。在一些实施方案中，制品包括针对pS6的磷酸化形式的抗体、针对CD3的抗体、针对CD8的抗体和针对alphabetaTCR的抗体。如本文所述的制品可以进一步包括促有丝分裂刺激物。如本文所述的制品可以进一步包括至少一种荧光标记。如本文所述的制品可以进一步包括用于每种抗体的至少一种荧光标记。在一些实施方案中，用于每种抗体的至少一种荧光标记中的每一种彼此可区分。除非另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语具有与方法和物质的组合物所属的领域中普通技术人员通常所理解的相同含义。尽管与本文描述的那些类似或等同的方法和材料可以用于该方法和物质的组合物的实践或测试中，但是合适的方法和材料如下所述。另外，材料、方法和实施例仅是说明性的，并不意图限制。本文提及的所有出版物、专利申请、专利和其他参考文献通过引用整体并入。附图说明图1显示FC(CD8+/TCR-)的门控。图2是显示pS6对FC的选择性的图。图3显示alphabetaTCR+细胞的门控。图4是显示pS6对alphabetaTCR+细胞的选择性的图。图5显示pS6+对FC的线性拟合。专利技术详述本公开提供了确定FC和/或alphabetaTCR+T细胞的效力的方法。FC和alphabetaTCR+T细胞是治疗性细胞组合物中三个主要成分中的两个，所述治疗性细胞组合物描述于美国专利号8,632,768和9,452,184中。考虑到该治疗性细胞组合物的当前治疗和临床用途，在制备后且在施用于患者前评估治疗性细胞组合物以及更具体地其中的FC和alphabetaTCR+T细胞的效力的快速且定量的方法将非常有用。在制备HSC、FC和alphabetaTCR+T细胞的治疗性组合物期间，或在已制备此类治疗性组合物之后，可以从组合物中取出细胞的样品，并使其与促有丝分裂刺激物接触。典型地，使FC和/或alphabetaTCR+T细胞(例如，约FC和/或alphabetaTCR+T细胞)与促有丝分裂刺激物接触。如本文所用，促有丝分裂刺激物或简称为促有丝分裂原是指触发细胞进行有丝分裂的化合物(例如蛋白质、小分子等)。代表性的促有丝分裂刺激物包括但不限于佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯(PMA；也称为12-O-十四烷酰佛波醇-13-乙酸酯(TPA))与离子霉素、植物血凝素(PHA)、伴刀豆球蛋白A(conA)或商陆有丝分裂原(PWM)。在一些情况下，可以在制造商的条件下使用市售的细胞刺激性混合物(例如，目录号00-4970，ThermoFisherScientific)。或者，可以进行稀释或滴定实验以确定特定促有丝分裂原的量和暴露的时间，所述特定促有丝分裂原在如本文所述的治疗性细胞组合物中产生最大量的刺激和/或指示效力的信号。典型地，使约100,000至约2,000,000个总细胞(即来自包括HSC、FC和alphabetaTCR+T细胞的治疗性细胞组合物)与促有丝分裂原接触，充分混合(例如涡旋振荡)，并维持在约37℃的温度约5分钟至约60分钟(即一小时)(例如约5分钟至约50分钟；约5分钟至约30分钟；约5分钟至约15分钟；约10分钟至约45分钟；约10分钟至约30分钟；约15分钟至约45分钟；约15分钟至约30分钟；约20分钟至约60分钟；约20分钟至约40分钟；约30分钟至约45分钟；约30分钟至约60分钟；约45分钟至约60分钟)。FC和/或alphabetaTCR+T细胞暴露于促有丝分裂刺激物的时间长度部分取决于所使用的特定促有丝分裂刺激物；在一些实施本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.确定包含促进细胞(FC)和/或alpha beta TCR+T细胞的样品的效力的方法，所述方法包括：/n使包含FC和/或alpha beta TCR+T细胞的样品与促有丝分裂刺激物接触；和/n确定所述样品中核糖体S6蛋白被磷酸化(pS6)的FC和/或alpha beta TCR+T细胞的数量；/n其中所述样品中所述pS6被磷酸化的FC和/或alpha beta TCR+T细胞的数量分别指示了所述样品中所述FC和/或alpha beta TCR+T细胞的效力。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170306 US 62/467,4201.确定包含促进细胞(FC)和/或alphabetaTCR+T细胞的样品的效力的方法，所述方法包括：
使包含FC和/或alphabetaTCR+T细胞的样品与促有丝分裂刺激物接触；和
确定所述样品中核糖体S6蛋白被磷酸化(pS6)的FC和/或alphabetaTCR+T细胞的数量；
其中所述样品中所述pS6被磷酸化的FC和/或alphabetaTCR+T细胞的数量分别指示了所述样品中所述FC和/或alphabetaTCR+T细胞的效力。


2.权利要求1的方法，其中所述样品包含约100,000至约2,000,000个FC和/或alphabetaTCR+T细胞。


3.权利要求1的方法，其中所述促有丝分裂刺激物选自下组：佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯(PMA)与离子霉素、植物血凝素(PHA)、伴刀豆球蛋白A(conA)和商陆有丝分裂原(PWM)。


4.权利要求1的方法，其中使所述样品与所述促有丝分裂刺激物接触约5分钟至约60分钟的时间段。


5.权利要求1的方法，其中使所述样品与所述促有丝分裂刺激物接触约20分钟至约30分钟的时间段。


6.权利要求1的方法，其中使用针对pS6的荧光标记的抗体确定所述样品中所述pS6被磷酸化的FC和/或alphabetaTCR+T细胞的数量。


7.权利要求6的方法，其中使用FACS检测所述荧光标记的抗体的结合。


8.权利要求1的方法，其中所述样品中至少30％的所述FC是pS6+。


9.权利要求1的方法，其中所述样品中至少30％的所述alphabetaTC...

【专利技术属性】
技术研发人员：ST伊尔德斯塔德，A卡托波迪斯，V塞纽科夫，M杰什科，
申请(专利权)人：塔拉里斯治疗股份有限公司，路易斯维尔大学研究基金会，
类型：发明
国别省市：美国;US