一种用连续流动法测定烟草或烟草制品中α-氨基氮的检测方法技术

本发明专利技术涉及烟草的技术领域，特别涉及一种用连续流动法测定烟草或烟草制品中α‑氨基氮的检测方法。本发明专利技术的检测方法为在PH值为5.4‑5.6条件下，采用茚三酮与烟草或烟草制品的α‑氨基氮反应，生成稳定化合物，在570nm测定稳定化合物的吸光度，通过预定的标准曲线计算得到烟草或烟草制品的萃取液中α‑氨基氮的浓度。本发明专利技术的检测方法可以填补现有没有连续流动法测定烟草或烟草制品中α‑氨基氮的检测方法的空缺。

A continuous flow method for the determination of \u03b1 - amino nitrogen in tobacco or tobacco products

【技术实现步骤摘要】
一种用连续流动法测定烟草或烟草制品中α-氨基氮的检测方法
本专利技术涉及烟草的
，特别涉及一种用连续流动法测定烟草或烟草制品中α-氨基氮的检测方法。
技术介绍
烟草化学研究已经对烟叶和烟气的几千种化合物进行了定性分析，在对烟草和烟草制品中的化学成分的定量分析方面也提出了越来越多的要求，包括分析方法的更新和改进，分析效率的提高，分析手段的逐步现代化。这是卷烟稳定和发展的重要基础工作。烟草或烟草制品的化学成分对烟叶质量、卷烟感官质量等有很大影响。目前，烟草或烟草制品中已有的常规化学指标的定量分析包括总糖、还原糖、总氮、烟碱、氯化物等，很多非常规化学指标还未开展定量分析。烟草中的含氮化合物对烟草的感官评吸质量有着重要的影响，历来受到人们的重视。其中，组成蛋白质的氨基酸其氨基大都在羧基一侧的α位碳原子上，称之为α-氨基酸，常将氨基酸类的低分子含氮物质称为α-氨基氮。在发酵或醇化的烟叶中，挥发碱类和α-氨基酸量大为减少，蛋白质和氨基酸含量的增加对卷烟香气会产生不利影响。根据文献，α-氨基氮已被作为十一项指标之一用于建立云南烤烟主产区烟叶质量评价指标体系，但仅作为企业内部成果。因此对于烟草和烟草制品中α-氨基氮的准确、快速测定对卷烟制品的研发和产品质量控制有重要意义。目前，烟草或烟草制品中α-氨基氮的测定方法未见报道。用于其他食品中α-氨基氮的检测方法主要包括：甲醛滴定法，电位滴定法，茚三酮比色法，2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)法等，这些方法操作复杂，人为或操作引起的误差较大，测定结果重现性差，效率低，无法实现批量检测。近年来有文献采用流动分析法进行测定，但未有针对烟草或烟草制品中α-氨基氮的流动分析检测报道。因烟草样品性状、性质以及基体影响的差异较大，现有的流动分析法测定α-氨基氮的适用性有待考察。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种使用连续流动法测定烟草或烟草制品中α-氨基氮的检测方法，以填补现有没有连续流动法测定烟草或烟草制品中α-氨基氮的检测方法的空缺。为达到上述目的，本专利技术提供以下技术方案：一种用连续流动法测定烟草或烟草制品中α-氨基氮的检测方法，所述检测方法为在PH值为5.4-5.6条件下，采用茚三酮与烟草或烟草制品的α-氨基氮反应，生成稳定化合物，在570nm测定所述稳定化合物吸光度，通过预定的标准曲线计算得到烟草或烟草制品的萃取液中α-氨基氮的浓度，所述连续流动分析仪的检测方法如下：1)、将烟草或烟草制品的萃取滤液输进进样管，R1溶液输进第一管道，所述烟草或烟草制品的萃取滤液与所述R1溶液混合，得到混合液1；2)、所述混合液1经过第一线圈后，R2溶液输进第二管道，所述混合液1与所述R2溶液反应，得到反应液1；3)、所述反应液1经过第二线圈后，R3溶液输进第三管道，所述反应液1与所述R3溶液反应，得到反应液2；4)、所述反应液2经过第三线圈后，对所述反应液2加热，然后依次经过第四线圈、第五线圈和第六线圈后得到反应液3，所述反应液3输进检测器在570nm处测定吸光度；5)、根据预定的标准曲线和所述烟草或烟草制品的萃取滤液的反应产物的吸光度，得到所述烟草或烟草制品的萃取液中的α-氨基氮浓度；其中，所述R1溶液的配制方法为250g的Brij-35溶解于1000mL水中而得；所述R2溶液的配制方法为10g的茚三酮溶解于500mL乙二醇甲醚，再加入250mL缓冲液，用水定容至1000mL而得；所述R3溶液的配制方法为0.5g的抗坏血酸溶解于100mL水中而得；所述缓冲液的配制方法为328g的无水醋酸钠溶解于700ml水中，再加入100mL纯乙酸，然后用水定容至1000mL而得。需要说明的是，在PH值为5.4-5.6条件下，采用茚三酮与烟草或烟草制品的α-氨基氮反应，生成稳定化合物，在570nm测定所述稳定化合物吸光度，将所述吸光度的数值代入标准曲线，通过标准曲线得到烟草或烟草制品的萃取液中α-氨基氮的浓度。需要说明的是，所述R2溶液的用缓冲液精确配置茚三酮溶液，用于控制反应适宜的酸碱环境，更为稳定。缓冲系统对显色有影响。同一浓度的氨基酸在不同pH条件下的颜色深浅不同，不同浓度的氨基酸检测对PH要求也不相同，条件不好甚至不会显色。本专利技术利用醋酸钠缓冲液配置茚三酮溶液以控制反应条件为PH5.4-5.6。用乙二醇甲醚配置R2溶液的作用：1、提供反应溶液的沸点，因反应温度95℃，在海拔高的地方水已沸腾变成气体，无法保持液体状态下进行分析，加乙二醇甲醚后沸点高于100℃，保证在高海拔地区95℃也能不沸腾；2、防止微生物生成，增加试剂保存有效期。需要说明的是，所述R3溶液的抗坏血酸用于将茚三酮还原成还原型茚三酮，再参与生成显色物质用于测定，是本专利技术优化后的分析条件。抗坏血酸反应温和，还原性更稳定。若使用硫酸肼做还原剂，硫酸肼还原性太强，如果加入量控制不好，会导致还原过渡，而抗坏血酸就不存在这个问题，使用抗坏血酸的基线比硫酸肼的基线更稳定。需要说明的是，3)中，R3溶液与反应液1中的R2溶液发生氧化还原反应，将茚三酮还原成还原型茚三酮。反应液2进行加热，使得R2溶液、还原性茚三酮和烟草或烟草制品的萃取滤液中氨基氮被R2溶液氧化后生成的NH3反应生产显色物质。作为优选，所述烟草或烟草制品的萃取滤液为预先按照YC/T31测定烟草或烟草制品的水分质量百分含量，然后将已知质量的所述烟草或烟草制品与萃取液进行萃取反应，然后过滤得到烟草或烟草制品的萃取滤液；其中，所述萃取液为1％-10％体积百分比的醋酸溶液。更为优选，所述萃取液为5％体积百分比的醋酸溶液。所述萃取液的体积为10mL-200mL，优选为50mL。作为优选，所述预先按照YC/T31测定烟草或烟草制品的水分质量百分含量之前还包括：对所述烟草或烟草制品进行研磨过筛，所述过筛的目数为40目。本方法的烟草或烟草制品的前处理，参考了YC/T31《烟草或烟草制品试样的制备和水分测定烘箱法》中试样的制备。作为优选，所述萃取液的体积为10mL-200mL；所述萃取时间为0.1h-24h。更为优选，所述萃取时间为0.5h。具体的，烟草或烟草制品的萃取滤液的具体制备方法为：1)制备样品：如研磨样品水分含量过高，可预先在不超过40℃的温度下干燥一定时间，将样品研磨并过0.45mm筛(40目)；2)按照YC/T31测定样品水分质量百分含量；3)准确称取一定量烟草或烟草制品(精确至0.1mg)，置于100mL干燥的具塞三角瓶中，加入萃取液。盖上塞子，室温下机械振荡萃取，静置后取萃取液用滤纸过滤，收集滤液用于分析。更为优选，所述滤纸为WhatmanNo.40同规格滤纸，优选为WhatmanNo.40滤纸。作为优选，在4)中，对所述反应液2加热的温度为95℃。作为优选，所述烟草或烟草制品的萃取滤液的流速为0.32mL/min；所述R1溶液的流速为1.2mL/min；所述R2溶液的流速为0.8mL本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用连续流动法测定烟草或烟草制品中α-氨基氮的检测方法，其特征在于，所述检测方法为在PH值为5.4-5.6条件下，采用茚三酮与烟草或烟草制品的α-氨基氮反应，生成稳定化合物，在570nm测定所述稳定化合物吸光度，通过预定的标准曲线计算得到烟草或烟草制品的萃取液中α-氨基氮的浓度，所述连续流动分析仪的检测方法如下：/n1)、将烟草或烟草制品的萃取滤液输进进样管，R1溶液输进第一管道，所述烟草或烟草制品的萃取滤液与所述R1溶液混合，得到混合液1；/n2)、所述混合液1经过第一线圈后，R2溶液输进第二管道，所述混合液1与所述R2溶液反应，得到反应液1；/n3)、所述反应液1经过第二线圈后，R3溶液输进第三管道，所述反应液1与所述R3溶液反应，得到反应液2；/n4)、所述反应液2经过第三线圈后，对所述反应液2加热，然后依次经过第四线圈、第五线圈和第六线圈后得到反应液3，所述反应液3输进检测器在570nm处测定吸光度；/n5)、根据预定的标准曲线和所述烟草或烟草制品的萃取滤液的反应产物的吸光度，得到所述烟草或烟草制品的萃取液中的α-氨基氮浓度；/n其中，所述R1溶液的配制方法为250g的Brij-35溶解于1000mL水中得到；所述R2溶液的配制方法为10g的茚三酮溶解于500mL乙二醇甲醚，再加入250mL缓冲液，用水定容至1000mL得到；所述R3溶液的配制方法为0.5g的抗坏血酸溶解于100mL水中得到；所述缓冲液的配制方法为328g的无水醋酸钠溶解于700ml水中，再加入100mL纯乙酸，然后用水定容至1000mL得到。/n...

【技术特征摘要】
1.一种用连续流动法测定烟草或烟草制品中α-氨基氮的检测方法，其特征在于，所述检测方法为在PH值为5.4-5.6条件下，采用茚三酮与烟草或烟草制品的α-氨基氮反应，生成稳定化合物，在570nm测定所述稳定化合物吸光度，通过预定的标准曲线计算得到烟草或烟草制品的萃取液中α-氨基氮的浓度，所述连续流动分析仪的检测方法如下：
1)、将烟草或烟草制品的萃取滤液输进进样管，R1溶液输进第一管道，所述烟草或烟草制品的萃取滤液与所述R1溶液混合，得到混合液1；
2)、所述混合液1经过第一线圈后，R2溶液输进第二管道，所述混合液1与所述R2溶液反应，得到反应液1；
3)、所述反应液1经过第二线圈后，R3溶液输进第三管道，所述反应液1与所述R3溶液反应，得到反应液2；
4)、所述反应液2经过第三线圈后，对所述反应液2加热，然后依次经过第四线圈、第五线圈和第六线圈后得到反应液3，所述反应液3输进检测器在570nm处测定吸光度；
5)、根据预定的标准曲线和所述烟草或烟草制品的萃取滤液的反应产物的吸光度，得到所述烟草或烟草制品的萃取液中的α-氨基氮浓度；
其中，所述R1溶液的配制方法为250g的Brij-35溶解于1000mL水中得到；所述R2溶液的配制方法为10g的茚三酮溶解于500mL乙二醇甲醚，再加入250mL缓冲液，用水定容至1000mL得到；所述R3溶液的配制方法为0.5g的抗坏血酸溶解于100mL水中得到；所述缓冲液的配制方法为328g的无水醋酸钠溶解于700ml水中，再加入100mL纯乙酸，然后用水定容至1000mL得到。


2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述烟草或烟草制品的萃取滤液为预先按照YC/T31测定烟草或烟草制品的水分质量百分含量，然后将已知质量的所述烟草或烟草制品与萃取液进行萃取反应，然后过滤得到烟草或烟草制品的萃取滤液；
其中，所述萃取液为1％-10％体积百分比的醋酸溶液。


3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述预先按照YC/T31测定烟草或烟草制品的水分质量百分含量之前还包括：对所述烟草或烟...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶冲，赵杨，毛寒冰，黄锡娟，韩伟，
申请(专利权)人：贵州中烟工业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：贵州;52