低聚糖阿魏酸酯的新应用制造技术

本申请属于微生物的技术领域，尤其涉及低聚糖阿魏酸酯的新应用。本申请第一方面提供了低聚糖阿魏酸酯和乳杆菌的混合体系在抑制艰难梭菌生长中的应用。本申请第二方面提供了一种抑制艰难梭菌生长的组合物，包括低聚糖阿魏酸酯和乳杆菌。本申请发现了低聚糖阿魏酸酯的新应用，丰富了能抑制艰难梭菌生长药物的种类，从而提供了一种治疗艰难梭菌感染的新药物。

New application of oligosaccharide ferulic acid ester

【技术实现步骤摘要】
低聚糖阿魏酸酯的新应用
本申请属于微生物的
，尤其涉及低聚糖阿魏酸酯的新应用。
技术介绍
梭菌属是革兰氏阳性专性产孢厌氧菌，包含100余种。其中多数可以水解食物中的碳水化合物和蛋白质，受宿主饮食影响较大，是与食品代谢吸收密切相关的微生物类别，并且与宿主的多种疾病密切相关。艰难梭菌为梭菌属代表菌种，是人类肠道中的正常菌群。当肠道菌群稳态被破坏，艰难梭菌就会大量繁殖并产生肠毒素及细胞毒素，从而破坏肠黏膜屏障，并引发腹泻、伪膜性肠炎等致命性疾病。临床上约10％～20％抗生素相关性腹泻、75％抗生素相关性肠炎及近100％伪膜性肠炎与此菌有关。艰难梭菌感染(Clostridiumdifficileinfection,CDI)引起了世界范围的关注。在一些亚洲国家，近20年来随着广谱抗生素的大量使用，CDI率呈上升趋势。研究显示，由CDI引起的死亡率是2％～7％。CDI不仅会导致患者住院时间延长，还会造成艰难梭菌在病人之间的传播。目前甲硝唑与万古霉素是治疗CDI的首选药物。但有研究表明，CDI患者在接受万古霉素、甲硝唑治疗后早期复发率高达15％～35％，且复发的患者较难治疗且治疗费用较高。目前已发现了对甲硝唑和万古霉素敏感性下降的艰难梭菌菌株，艰难梭菌对甲硝唑耐药率也在逐步增高，给临床治疗CDI带来了困难。还有研究发现万古霉素治疗可使人体正常专性厌氧菌在整个肠道菌群所占比例减少，兼性厌氧菌和微需氧菌群所占比例增多。因此，研究能够抑制艰难梭菌生长的功能成分具有重要的意义。
技术实现思路
有鉴于此，本申请发现了低聚糖阿魏酸酯的新应用，丰富了抑制艰难梭菌生长的药物种类。本申请第一方面提供了低聚糖阿魏酸酯和乳杆菌的混合体系在抑制艰难梭菌生长中的应用。需要说明的是，低聚糖阿魏酸酯是由阿魏酸与低聚糖酯化而形成的一种水溶性化合物，低聚糖阿魏酸酯既含有阿魏酰基，又含有亲水性的低聚糖基团的结构特征，使它具有了阿魏酸和低聚糖的双重活性，是一类兼具阿魏酸和低聚糖生理功能的活性物质。作为优选，所述乳杆菌与所述艰难梭菌的比例为1:1。作为优选，所述低聚糖阿魏酸酯的浓度为5mg/mL～20mg/mL。作为优选，所述乳杆菌选自植物乳杆菌。作为优选，所述低聚糖阿魏酸酯的制备方法，包括以下步骤：将纤维质原料经酶解或酸解后，得到低聚糖阿魏酸酯。具体的，纤维质原料选自蔗渣、玉米麸皮、麦麸和米糠中的一种或多种。其中，从玉米麸皮提取的低聚糖阿魏酸酯已经得到结构确认的有：(5-O-FA--L-Ara)-1,3-Xyl-1,4-D-Xyl)；O--D-Xyl-1,2-(O-5-O-FA-L-Ara)-O--D-Xyl-1,3--D-Xyl-1,2-O-(5-O-FA-L-Ara)；O-L-Gal-1,4-O-D-Xyl-1.2-(5-O-FA-L-Ara)-O-4-O-FA--D-Xyl-1,6-D-Gluc；-D-Xyl-1,3--L-Gal-1,2--D-Xyl-1,2–5-O-FA-L-Ara；-D-Gal-1,3--L-Gal-1,2--D-Xyl-1,2–5-O-FA-L-Ara。(其中FA代表阿魏酸，Xyl代表木糖残基，Ara代表阿拉伯糖残基，Gal代表半乳糖残基)。其中，本申请提供第一种低聚糖阿魏酸酯的制备方法，具体包括：将玉米麸皮烘干，粉碎，过40目筛；先以耐高温α-淀粉酶脱除残留淀粉，然后以蛋白酶除去蛋白质，煮沸灭酶，过滤后留下不溶的残渣，烘干；以料液比1:10，草酸浓度0.6％(w/v)，121℃下蒸煮30min提取低聚糖阿魏酸酯，过滤得酸解液；酸解液先后通过分子量5ku的超滤膜和分子量150u的纳滤膜过滤，去除大分子杂质及草酸等小分子杂质。经过超滤和纳滤处理后的提取液再进一步通过树脂进行纯化，然后浓缩、冷冻干燥得到粉状提取物。经过超滤纳滤后酸解提取液中还含有大量的未与阿魏酸酯化的单糖、低聚糖及游离阿魏酸。利用树脂对低聚糖阿魏酸酯进一步纯化除去这些杂质。本实施例选取了常见的D301和HP-20树脂对低聚糖阿魏酸酯进行纯化，然后采用乙醇对D301和HP-20树脂吸附的低聚糖阿魏酸酯进行洗脱，将乙醇洗脱液真空浓缩，然后进行喷雾干燥，得到高纯度固体的低聚糖阿魏酸酯。优选的，上述的制备方法中，乙醇的体积百分比为70％，本申请发现随着乙醇浓度的升高，洗脱率也随之升高，当乙醇浓度为70％时洗脱率达到最高，当乙醇浓度继续升高时低聚糖阿魏酸酯的洗脱率反而开始下降。优选的，上述的制备方法中，采用的树脂为HP-20树脂，本申请发现HP-20对阿魏酸和低聚糖阿魏酸酯的吸附性能比D301更强，在使用乙醇洗脱时也更容易洗脱出来。需要说明的是，采用上述方法制得的玉米麸皮低聚糖阿魏酸酯的指标分别为：总糖含量734.33mg/g，还原糖含量178.94mg/g，总阿魏酸含量93.58mg/g，游离阿魏酸含量5.79mg/g，低聚糖平均聚合度为4.1。可见，本实施例制得的低聚糖阿魏酸酯中总阿魏酸中只有6.19％是游离的阿魏酸，93.81％的阿魏酸是与低聚糖结合的。其中，本申请提供第二种低聚糖阿魏酸酯的制备方法，具体包括：将经预处理的纤维质原料与质量浓度为1～2％的酸液混合，在加热条件下混合，过滤，得到滤液和滤渣；将滤液采用超滤去除未酸解的可溶性大分子，得到透过液；所述经预处理的纤维质原料与酸液的质量体积比为0.05～0.1kg/L。具体的，上述的预处理步骤包括：对纤维质原料进行粉碎、去淀粉和去蛋白；所述粉碎是将纤维质原料在105℃下灭酶干燥4h，粉碎至80～120目；所述去淀粉是将粉碎后的纤维质原料和水按质量体积比为0.1kg/L的比例混合均匀，得到混合液；将混合液在90℃下糊化30min后，加入耐高温α-淀粉酶，耐高温α-淀粉酶的添加量为混合液质量的0.2～0.3％，在90℃下酶解2～3h；所述去蛋白是将去淀粉后的纤维质原料的温度降低到65℃，加入蛋白酶，蛋白酶的添加量为去淀粉后的纤维质原料质量的1％，反应30min后过滤，水洗滤渣3～5遍，获得预处理后的纤维质原料。具体的，酸液中的酸选自草酸、盐酸、硫酸、硝酸或磷酸。具体的，所述加热的温度为60～100℃，搅拌的时间为2～3小时；所述超滤的截留分子量是3000～10000。作为优选，将纤维质原料经酶解或酸解后还包括将产物经离子交换树脂吸附处理，经洗脱后的得到低聚糖阿魏酸酯。具体的，所述离子交换树脂吸附处理具体包括：将纤维质原料经酶解或酸解后所得透过液经树脂吸附后，用水洗树脂去除低聚糖；再用体积百分比浓度为50％～60％的乙醇水溶液洗脱，得到乙醇洗脱液；将乙醇洗脱液浓缩，得到浓缩液；将浓缩液干燥，得到低聚糖阿魏酸酯；所述树脂是D301大孔弱碱性阴离子交换树脂。具体的，所述树脂与透过液的固液体积比是(3～4)∶1。具体的，所述水洗树脂是水洗至水洗液达8倍树脂体积时止；所述乙醇洗脱液为5倍树脂体积；所述浓缩液的体积为乙醇洗脱液体本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.低聚糖阿魏酸酯和乳杆菌的混合体系在抑制艰难梭菌生长中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.低聚糖阿魏酸酯和乳杆菌的混合体系在抑制艰难梭菌生长中的应用。


2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述乳杆菌与所述艰难梭菌的比例为1:1。


3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述低聚糖阿魏酸酯的浓度为5mg/mL～20mg/mL。


4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述乳杆菌选自植物乳杆菌。


5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述低聚糖阿魏酸酯的制备方法包括以下步骤：
将纤维质原料经酶解或酸解后，得到低聚糖阿魏酸酯。


6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，将纤维质原料经酶解或酸解后...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄俊卿，欧隽滢，郑洁，吕慕雯，邓丽娟，吴曼斯，廖永翠，
申请(专利权)人：暨南大学，
类型：发明
国别省市：广东;44