一种大白菜的育种方法技术

本发明专利技术提供了一种大白菜的育种方法，属于作物育种技术领域。本发明专利技术的育种方法以黄芯春大白菜、山地王2号大白菜和CR‑福将大白菜为亲本，通过杂交、筛选，得到基因型为R

A breeding method of Chinese Cabbage

【技术实现步骤摘要】
一种大白菜的育种方法
本专利技术涉及作物育种
，尤其涉及一种大白菜的育种方法。
技术介绍
大白菜(Brassicarapasubsp.pekinensis)是十字花科芸薹属中的常见蔬菜，种植和分布面积广，是我国菜篮子中的重要蔬菜。近年来，由于芸薹根肿菌的侵染，大白菜根肿病频发，且在世界范围内的危害面积日益扩大，导致大白菜的品质和产量受到了极大影响。由于根肿菌在土壤中的存活时间长，携带休眠孢子的土壤很容易导致病害的持续发生，而且利用农业、化学和生物等防治手段不能从根本上解决根肿病的防治问题，所以，培育抗根肿病的大白菜新品种是防治该病的最佳方法。目前根肿病防治中最难克服的问题之一是在种植过程中根肿菌生理小种会发生变化，多年种植单一的抗病品种，最后会使得抗病品种抗性丧失，这主要是由于根肿菌大多混生，繁殖力超强，在繁殖过程变迅速积累了一些变异，随着某一抗病品种的长期种植，土壤中优势生理小种种群数量降低，而混生的其他生理小种或变异的生理小种则逐渐成为新的优势种群。由于抗病基因与不同生理小种存在对应关系，从而造成抗病品种抗病性丧失，给抗病育种带来了极大挑战。因此，目前需要一种对根肿菌具有持久抗性的大白菜新品种。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种大白菜的育种方法，本专利技术方法得到的大白菜对根肿菌具有持久抗性。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种大白菜的育种方法，包括以下步骤：1)对黄芯春大白菜进行游离小孢子培养，培育得到携带Crr1a纯合抗性基因的小孢子培养DH系，作为第一亲本；对山地王2号大白菜进行游离小孢子培养，培育得到携带Crr3纯合抗性基因的小孢子培养DH系，作为第二亲本；对CR-福将大白菜进行游离小孢子培养，培育得到携带CRc纯合抗性基因的小孢子培养DH系，作为第三亲本；2)以第一亲本为母本，第二亲本为父本进行杂交，得到第一F1代种子；3)将所述第一F1代种子种植后，进行自交，得到第一F2代种子，将所述第一F2代种子种植后，筛选基因型为RCrr1aRCrr1aRCrr3RCrr3的抗性位点纯合单株，得到第四亲本；4)以第四亲本为母本，第三亲本为父本进行杂交，得到第二F1代种子；5)将所述第二F1代种子种植后，进行自交，得到第二F2代种子，将所述第二F2代种子种植后，筛选基因型为RCrr1aCrr1aRCrr3Crr3RCRcCRc的抗性位点纯合单株，得到白菜新品种。优选的，步骤3)中利用PCR扩增对根肿病抗性位点检测和根肿病抗性鉴定，筛选得到基因型为RCrr1aRCrr1aRCrr3RCrr3的抗性位点纯合单株；所述根肿病抗性位点检测包括Crr1a抗性位点检测和Crr3抗性位点检测。优选的，步骤5)中利用PCR扩增对根肿病抗性位点检测和根肿病抗性鉴定，筛选得到基因型为RCrr1aCrr1aRCrr3Crr3RCRcCRc的抗性位点纯合单株；所述根肿病抗性位点检测包括Crr1a抗性位点检测、Crr3抗性位点检测和CRc抗性位点检测。优选的，所述Crr1a抗性位点检测包括以下步骤：以待检测大白菜的基因组DNA为模板，利用第一引物组进行第一PCR扩增，得到第一扩增产物；对第一扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，当PCR片段大小为950bp时，判断为抗性位点；当PCR片段大小为580bp时，判断为感病位点；所述第一引物组包括Crr1a-F和Crr1a-R；所述Crr1a-F的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示；所述Crr1a-R的核苷酸序列如SEQIDNo.2所示；所述第一PCR扩增的反应体系以20μL计，包括：12.6μLddH2O，2μL10×PCRBuffer，1.6μLdNTPs，Crr1a-F和Crr1a-R各0.8μL，0.2μLAceTaq酶，2μL模板；所述第一PCR扩增的程序为：94℃、5min；94℃、1min，55℃、2min，72℃、4min，35个循环；72℃、5min。优选的，所述Crr3抗性位点检测包括以下步骤：以待检测大白菜的基因组DNA为模板，利用第二引物组进行第二PCR扩增，得到第二扩增产物；对第二扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，当PCR片段大小为1500bp时，判断为抗性位点；当PCR片段大小为950bp时，判断为感病位点；所述第二引物组包括Crr3(OPC11-2F)-F和Crr3(OPC11-2R)-R；所述Crr3(OPC11-2F)-F的核苷酸序列如SEQIDNo.3所示；所述Crr3(OPC11-2R)-R的核苷酸序列如SEQIDNo.4所示；所述第二PCR扩增的反应体系以20μL计，包括：12.6μLddH2O，2μL10×PCRBuffer，1.6μLdNTPs，Crr3(OPC11-2F)-F和Crr3(OPC11-2R)-R各0.8μL，0.2μLAceTaq酶，2μL模板；所述第二PCR扩增的程序为：94℃、5min；94℃、1min，55℃、2min，72℃、3min，35个循环；72℃、5min。优选的，所述CRc抗性位点检测包括以下步骤：以待检测大白菜的基因组DNA为模板，利用第三引物组进行第三PCR扩增，得到第三扩增产物；对第三扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，当PCR片段大小为800bp时，判断为抗性位点；以待检测大白菜的基因组DNA为模板，利用第四引物组进行第四PCR扩增，得到第四扩增产物；对第四扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，当PCR片段大小为800bp时，判断为感病位点；所述第三引物组包括CRcB50-C9-FW和CRcB50-RV；所述CRcB50-C9-FW的核苷酸序列如SEQIDNo.5所示；所述CRcB50-RV的核苷酸序列如SEQIDNo.6所示；所述第四引物组包括CRcB50-6R-FW和CRcB50-RV；所述CRcB50-6R-FW的核苷酸序列如SEQIDNo.7所示；所述第三PCR扩增的反应体系和第四PCR扩增的反应体系分别以20μL计，包括：12.6μLddH2O，2μL10×PCRBuffer，1.6μLdNTPs，Crr1a-F和Crr1a-R各0.8μL，0.2μLAceTaq酶，2μL模板；所述第三PCR扩增的反应体系和第四PCR扩增的程序分别为：94℃、5min；94℃、1min，55℃、1.5min，72℃、2min，35个循环；72℃、7min。优选的，步骤2)得到第一F1代种子、步骤3)得到第一F2代种子、步骤4)得到第二F1代种子和步骤5)得到第二F2代种子后，分别包括对种子依次进行催芽和低温处理。优选的，所述低温处理包括以下步骤：将催芽后的种子置于4～8℃的条件下25～30d。本专利技术的有益效果：本专利技术提供了一种大白菜的育种方法，本专利技术的育种方法以黄芯春大白菜、山地王2号大白菜和CR-福将大白菜为亲本，通过杂交、筛选，得到基因型为RCrr1aCrr1aR本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种大白菜的育种方法，包括以下步骤：/n1)对黄芯春大白菜进行游离小孢子培养，培育得到携带Crr1a纯合抗性基因的小孢子培养DH系，作为第一亲本；/n对山地王2号大白菜进行游离小孢子培养，培育得到携带Crr3纯合抗性基因的小孢子培养DH系，作为第二亲本；/n对CR-福将大白菜进行游离小孢子培养，培育得到携带CRc纯合抗性基因的小孢子培养DH系，作为第三亲本；/n2)以第一亲本为母本，第二亲本为父本进行杂交，得到第一F1代种子；/n3)将所述第一F1代种子种植后，进行自交，得到第一F2代种子，将所述第一F2代种子种植后，筛选基因型为R

【技术特征摘要】
1.一种大白菜的育种方法，包括以下步骤：
1)对黄芯春大白菜进行游离小孢子培养，培育得到携带Crr1a纯合抗性基因的小孢子培养DH系，作为第一亲本；
对山地王2号大白菜进行游离小孢子培养，培育得到携带Crr3纯合抗性基因的小孢子培养DH系，作为第二亲本；
对CR-福将大白菜进行游离小孢子培养，培育得到携带CRc纯合抗性基因的小孢子培养DH系，作为第三亲本；
2)以第一亲本为母本，第二亲本为父本进行杂交，得到第一F1代种子；
3)将所述第一F1代种子种植后，进行自交，得到第一F2代种子，将所述第一F2代种子种植后，筛选基因型为RCrr1aRCrr1aRCrr3RCrr3的抗性位点纯合单株，得到第四亲本；
4)以第四亲本为母本，第三亲本为父本进行杂交，得到第二F1代种子；
5)将所述第二F1代种子种植后，进行自交，得到第二F2代种子，将所述第二F2代种子种植后，筛选基因型为RCrr1aCrr1aRCrr3Crr3RCRcCRc的抗性位点纯合单株，得到白菜新品种。


2.根据权利要求1所述的育种方法，其特征在于，步骤3)中利用PCR扩增对根肿病抗性位点检测和根肿病抗性鉴定，筛选得到基因型为RCrr1aRCrr1aRCrr3RCrr3的抗性位点纯合单株；所述根肿病抗性位点检测包括Crr1a抗性位点检测和Crr3抗性位点检测。


3.根据权利要求1所述的育种方法，其特征在于，步骤5)中利用PCR扩增对根肿病抗性位点检测和根肿病抗性鉴定，筛选得到基因型为RCrr1aCrr1aRCrr3Crr3RCRcCRc的抗性位点纯合单株；所述根肿病抗性位点检测包括Crr1a抗性位点检测、Crr3抗性位点检测和CRc抗性位点检测。


4.根据权利要求2或3所述的育种方法，其特征在于，所述Crr1a抗性位点检测包括以下步骤：
以待检测大白菜的基因组DNA为模板，利用第一引物组进行第一PCR扩增，得到第一扩增产物；对第一扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，当PCR片段大小为950bp时，判断为抗性位点；当PCR片段大小为580bp时，判断为感病位点；
所述第一引物组包括Crr1a-F和Crr1a-R；所述Crr1a-F的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示；所述Crr1a-R的核苷酸序列如SEQIDNo.2所示；
所述第一PCR扩增的反应体系以20μL计，包括：12.6μLddH2O，2μL10×PCRBuffer，1.6μLdNTPs，Crr1a-F和Crr1a-R各0.8μL，0.2μLAceTaq酶，2μL模板；
所述第一PCR扩增的程序为：94℃、5min；94℃、1min，55℃、2min，72℃、4min，35个循环；72℃、5min。


5.根据权利要求2或3所述的育种方法，其特征在于，所述Crr3抗性位点...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏小春，张晓伟，原玉香，王志勇，赵艳艳，杨双娟，
申请(专利权)人：河南省农业科学院园艺研究所，
类型：发明
国别省市：河南;41