【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】受试者特异性肿瘤抑制细胞及其用途
本公开内容涉及一种包含受试者特异性肿瘤抑制细胞(TIC)的药物组合物，以及用于治疗受试者的一种或多种肿瘤的用途。本公开内容还涉及一种通过修饰免疫细胞的一种或多种基因来产生受试者特异性肿瘤抑制细胞(TIC)的方法。
技术介绍
免疫疗法是一种治疗肿瘤的治疗方法，它利用宿主免疫系统的天然能力来特异性靶向和破坏肿瘤细胞。但是，肿瘤细胞有时可以逃逸宿主免疫系统的检测和破坏。肿瘤细胞可以具有多种逃逸宿主免疫系统的机制，例如在肿瘤细胞表面表达抑制性分子，其可以使宿主免疫细胞失活，或者使宿主免疫系统更难检测到肿瘤细胞。肿瘤细胞还可以产生因子或诱导周围细胞释放抑制宿主免疫应答并刺激肿瘤细胞增殖的物质。例如，由肿瘤细胞或周围细胞产生的TGFβ是可以抑制T细胞增殖并对肿瘤细胞产生细胞毒性的机制之一。已经开发了不同的免疫疗法方法来克服肿瘤细胞的免疫逃逸机制并增加免疫系统的功效以根除肿瘤细胞。一种方法是免疫细胞疗法，也称为过继细胞疗法(ACT)，即在体外扩增和修饰从患者中纯化的免疫细胞(如T细胞或自然杀伤细胞(NK细胞))。随后，将这些经修饰的免疫细胞转移至同一患者中以治疗疾病，例如癌症。已经报道获得了有限的成功，例如在涉及T细胞的美国专利7,446,190；8,399,645；8,637,307；9,161,971和9,328,156，以及涉及NK细胞的美国专利8,026,097和8,313,943中所述的那些。不幸的是，转移回患者的免疫细胞必须面对敌对的肿瘤环境，这可能会使它们失去肿瘤杀伤...
【技术保护点】
1.一种药物组合物，其包含由免疫细胞修饰而来的Cbl-b
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171214 US 62/598,9861.一种药物组合物，其包含由免疫细胞修饰而来的Cbl-b-/-肿瘤抑制细胞(Cbl-b-/-TIC)群，其中所述Cbl-b-/-TIC具有失活的Cbl-b基因组等位基因且不具有Cbl-b的生物功能，并且其中所述Cbl-b-/-TIC不含所述免疫细胞外源的脱氧核糖核酸且不含所述免疫细胞外源的病毒核酸。
2.权利要求1所述的药物组合物，其中所述Cbl-b-/-TIC包括Cbl-b-/-CD8+T细胞、Cbl-b-/-NK细胞或其组合。
3.权利要求1所述的药物组合物，其中所述Cbl-b-/-TIC包括Cbl-b-/-T细胞。
4.权利要求1所述的药物组合物，其中所述Cbl-b-/-TIC与受试者在组织学上相容。
5.权利要求4所述的药物组合物，其中所述免疫细胞来自受试者的外周血、受试者的淋巴器官、受试者的淋巴液、受试者的器官、受试者的组织或其组合。
6.权利要求4所述的药物组合物，其中所述免疫细胞是来自受试者的肿瘤、源自受试者的肿瘤的异种移植肿瘤或其组合的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)。
7.一种产生Cbl-b-/-肿瘤抑制细胞(TIC)的方法，该方法包括以下步骤：
a)使免疫细胞的基因组Cbl-b基因失活以产生Cbl-b-/-TIC，其中所述Cbl-b-/-TIC不具有Cbl-b生物功能、不含所述免疫细胞外源的脱氧核糖核酸且不含所述免疫细胞外源的病毒核酸。
8.权利要求7所述的方法，其中通过向所述免疫细胞中引入基因组修饰成分来使所述基因组Cbl-b基因失活，所述基因组修饰成分包含Cas9蛋白和靶向所述免疫细胞的基因组Cbl-b基因的sgRNACbl-b，并且其中所述基因组修饰成分不含所述免疫细胞外源的脱氧核糖核酸且不含病毒核酸。
9.权利要求8所述的方法，其中所述sgRNACbl-b包含核酸序列GAGGUCCACCAGAUUAGCUCUGG(SEQID.1)、与所述SEQID.1的序列具有80％至100％的同源性的核酸序列或其组合。
10.权利要求7所述的方法，其中所述免疫细胞包括未修饰的T细胞、未修饰的NK细胞或其组合。
11.权利要求7所述的方法，其中免疫细胞包括纯化的未修饰的T细胞。
12.权利要求7所述的方法，其中所述免疫细胞是来自受试者的肿瘤、源自受试者的肿瘤的异种移植肿瘤或其组合的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)。
13.权利要求12所述的方法，其中所述免疫细胞是从所述受试者的所述肿瘤分离的肿瘤浸润T细胞，并任选地扩增。
14.权利要求13所述的方法，其中所述受试者是人类受试者。
15.权利要求12所述的方法，其中所述异种移植肿瘤是通过将一部分肿瘤异种移植到哺乳动物中而产生。
16.权利要求7所述的方法，其中所述Cbl-b-/-TIC包括Cbl-b-/-CD8+T细胞、Cbl-b-/-NK细胞或其组合。
17.权利要求7所述的方法，其中所述Cbl-b-/-TIC包含10％至100％的Cbl-b-/-T细胞，百分比是基于总Cbl-b-/-TIC群计。
18.权利要求7至17中任一项所述的方法，其还包括以下步骤：
b)在体外细胞培养物中增殖Cbl-b-/-TIC；和
c)从体外细胞培养物中收获Cbl-b-/-TIC。
19.一种用于治疗有此需要的受试者的肿瘤病症的方法，所述方法包括以下步骤：
a)使受试者的免疫细胞的基因组Cbl-b基因失活以产生Cbl-b-/-肿瘤抑制细胞(TIC)，其中所述Cbl-b-/-TIC具有失活的Cbl-b基因等位基因且不含Cbl-b生物功能，并且其中所述Cbl-b-/-TIC不含所述免疫细胞外源的脱氧核糖核酸且不含所述免疫细胞外源的病毒核酸；
b)任选地，在体外细胞培养物中增殖所述Cbl-b-/-TIC；和
c)将所述Cbl-b-/-TIC给予所述受试者。
20.权利要求19所述的方法，其中通过向所述免疫细胞中引入基因组修饰成分来使所述基因组Cbl-b基因失活，所述基因组修饰成分包含Cas9蛋白和靶向所述免疫细胞的基因组Cbl-b基因的sgRNACbl-b，并且其中所述基因组修饰成分不含所述免疫细胞外源的脱氧核糖核酸且不含病毒核酸。
21.权利要求19-20中任一项所述的方法，其中所述Cas9蛋白是修饰的重组Cas9蛋白，其包含来自未修饰的Cas9蛋白的C末端核定位信号区域。
22.权利要求19-21中任一项所述的方法，其中所述Cbl-b-/-TIC包括Cbl-b-/-CD8+T细胞、Cbl-b-/-NK细胞或其组合。
23.权利要求19-22中任一项所述的方法，其中所述免疫细胞来自受试者的外周血、受试者的淋巴器官、受试者的淋巴液或其组合。
24.权利要求19-23中任一项所述的方法，其中所述受试者是人类受试者。
25.权利要求19-24中任一项所述的方法，其中所述受试者患有两种或更多种不同的肿瘤。
26.权利要求19-25中任一项所述的方法，其中给予所述受试者的Cbl-b-/-TIC的数量为约1×105至约5×107细胞/kg。
27.权利要求19-26中任一项所述的方法，其中所述Cbl-b-/-TIC是通过注射、输注或其组合给予所述受试者。
28.权利要求19-27中任一项所述的方法，其中所述免疫细胞是来自受试者的肿瘤、源自受试者的肿瘤的异种移植肿瘤或其组合的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)。
29.权利要求28所述的方法，其中所述异种移植肿瘤是通过将一部分肿瘤异种移植到哺乳动物中而产生。
30.权利要求19-29中任一项所述的方法，其还包括将癌症药物、检查点抑制剂或其组合给予所述受试者。
31.一种产生Cbl-b-/-肿瘤抑制细胞(TIC)的方法，该方法包括以下步骤：
a)通过以下步骤产生异种移植肿瘤：将受试者的一部分肿瘤分散到肿瘤细胞悬液中，任选地用一种或多种选择标记物从肿瘤细胞悬液中纯化肿瘤细胞以产生纯化的肿瘤细胞，并将肿瘤细胞悬液或纯化的肿瘤细胞移植到哺乳动物中以形成异种移植肿瘤；
b)从所述异种移植肿瘤获得肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)；
c)使TIL的基因组Cbl-b基因失活以产生Cbl-b-/-TIC，其中所述Cbl-b-/-TIC不具有Cbl-b的生物功能、不含肿瘤浸润淋巴细胞外源的脱氧核糖核酸且不含肿瘤浸润淋巴细胞外源的病毒核酸，其中通过将基因组修饰成分引入所述TIL中而使基因组Cbl-b基因失活，所述基因组修饰成分包含Cas9蛋白和靶向所述TIL的基因组Cbl-b基因的sgRNACbl-b，并且其中所述基因组修饰成分不含所述TIL外源的脱氧核糖核酸且不含病毒核酸。
32.权利要求31所述的方法，其中所述受试者是人类受试者。
33.一种药物组合物，其包含由免疫细胞修饰而来的肿瘤抑制细胞(TIC)群，其中所述TIC包含至少一种靶基因的至少一个失活的基因组等位基因且不具有所述靶基因的生物功能，并且其中所述TIC不含所述免疫细胞外源的脱氧核糖核酸且不含所述免疫细胞外源的病毒核酸。
34.权利要求33所述的药物组合物，其中所述至少一种靶基因包括Cbl-b、CTLA4、PD-1、LAG3、TIM3、CD73、KIR(杀伤细胞抑制受体)、Fas、AHR(芳烃受体)、Smad2、Smad4、TGFBR(TGFβ受体)、ILT-3或其组合。
35.权利要求33-34中任一项所述的药物组合物，其中所述TIC包括T细胞、B细胞、NK细胞或其组合。
36.权利要求33-35中任一项所述的药物组合物，其中所述TIC包括Cbl-b-/-CD4+T细胞、Cbl-b-/-CD8+T细胞、Cbl-b-/-NK...
【专利技术属性】
技术研发人员：顾华，岗·G·徐，A·加津斯基，童海骏，
申请(专利权)人：EZY生物科技有限公司，阿达拉塔合伙有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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