用于诊断自身免疫性胃炎的方法技术

本发明专利技术涉及用于诊断AIG的方法，其包括检测在包含抗体的样品中是否存在针对胃H

Methods for the diagnosis of autoimmune gastritis

【技术实现步骤摘要】
用于诊断自身免疫性胃炎的方法本专利技术涉及用于诊断AIG的方法，其包括检测在包含抗体的样品中是否存在针对胃H+/K+-ATP酶的β-亚基的自身抗体的步骤，其中使用具有固相的在诊断上有用的承载体，在其上固定化有用于特异性地捕获所述自身抗体的工具；以及涉及具有固相的在诊断上有用的承载体，在其上固定化有用于特异性地捕获针对胃H+/K+-ATP酶的β-亚基的自身抗体的工具。公认的是，针对来自壁细胞的该H+/K+-ATP酶的循环自身抗体，也称为APCA(“抗壁细胞抗体(anti-parietalcellantibodies)”的缩写)，是关于自身免疫性胃炎(AIG)和恶性贫血的诊断标志物。AIG是一种慢性疾病，在总人口中具有大约2％的流行率。在罹患其他自身免疫疾病例如I型糖尿病的患者中，该流行率达到10％。在胃粘膜的粘膜固有层的壁细胞中的H+/K+-ATP酶具有泵抽质子并由此维持胃内的酸性环境的任务。它是异二聚体，其由包含催化中心并且实现离子运输的α-亚基(由ATP4A基因编码)和使α-亚基稳定并且对于酶促活性来说必需的β-亚基(由ATP4B编码)组成。在AIG的情况下，发生胃粘膜的损伤，其被称为萎缩性胃炎(Atrophicbodygastritis，ABG)。在该情况下，粘膜的分解导致减少的或缺乏的胃酸分泌。这也可以由于被幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)感染而引起。除了其他可能的原因外，自身免疫性胃炎可以引起恶性贫血(PA)，这是一种基于维生素B12缺乏的贫血。它由于内因子(intrinsicfactor)(一种结合所述维生素并使之稳定并且由壁细胞(APCA是针对其的)形成的蛋白质)的缺乏而引起。为了正确地治疗AIG或PA，必不可少的是区分由自身免疫引起的胃炎、由细菌引起的胃炎或由药物引起的胃炎。在治疗错误或没有治疗的情况下，可以发生胃溃疡或胃穿孔，而且胃癌的风险增加。因此，存在对于适合于高通量的诊断测试的需求，用其可以以尽可能高的诊断可靠性在容易可得的患者样品材料中检测在诊断上有用的抗体，特别地以尽可能高的灵敏度和/或特异性，特别是相对于基于检测针对胃H+/K+-ATP酶的α-亚基或包含α-亚基和β-亚基的异二聚体的自身抗体的测试而言。需要指出的是，单独的测试结果无法实现诊断，这尤其是因为具有很多其他疾病例如胰腺炎或糖尿病的患者的样品可能具有所述自身抗体。测试结果可以由主治医生与其他症状例如维生素B12缺乏、高色素性贫血、胃粘膜被淋巴细胞浸润一起进行解释并以此支持诊断，而本身不为最终的诊断提供足够的决定基础。为此，在现有技术中公开了ELISA测试和免疫荧光测试，用其可以检测针对具有ATP4A-亚基和ATP4B-亚基的异二聚体的自身抗体。自2011年以来，EUROIMMUNMedizinischeLabordiagnostikaAG销售一种基于经纯化的具有所述两个亚基的天然哺乳动物ATP4的ELISA。在测试说明书中，详细地陈述了特异性，并且接着指出，通过选择截止值可以优化该特异性(目录号：EA1361-9601G)。WO2011/150086公开了针对ATP4A-亚基的自身抗体的检测。Wenzlau等人公开了检测针对ATP4A的自身抗体以在遭受I型糖尿病之苦的患者中诊断自身免疫性胃炎。采用了放射结合测试(Wenzlau,J.M.,Gardner,T.J.,Frisch,L.M.,Davidson,H.W.和Hutton,J.C.(2011)DevelopmentofanovelautoantibodyassayforautoimmunegastritisinT1Dindividuals,DiabetesMetabResRev.,27(8):887-90)。Rusak等人公开，胃H+/K+-ATP酶的ATP4A-亚基是关于APCA的主要抗原(Rusak,E.,Chobot,A.,Krzywicka,A.和Wenzlau,J.(2016)Anti-parietalcellantibodies-diagnosticsignificance,AdvancesinMedicalSciences,61:175-179)。他们指出，用放射免疫测定法可以取得比用ELISA或IFT更好的结果。与神经学自身免疫疾病相关联地，Scharf等人公开，通过使用免疫荧光测试可以检测针对该ATP酶异二聚体的自身抗体，当使用表达ATP4A或ATP4B的细胞时(Scharf,M.,Miske,R.,Heidenreich,F.,Giess,R.,Landwehr,P.,I.,Begemann,N.,Denno,Y.,Tiede,S.,C.,Schlumberger,W.,Unger,M.,Teegen,B.,W.,Probst,C.,Komorowski,L.(2015)NeuronalNa+/K+ATPaseisanautoantibodytargetinparaneoplasticneurologicsyndrome,Neurology,84:1-7)。在具有神经学症状的患者的血清中，检测到针对ATP4B(而非针对ATP4A)的抗体。未公开确切使用了哪种类型的抗原和如何施行所述方法。Lahner等人公开了通过使用发光免疫沉淀系统(LIPS)来检测来自遭受萎缩性胃炎之苦的患者的样品的针对ATP4A和ATP4B的自身抗体。结果表明，可以几乎以相同的高的灵敏度和特异性检测针对ATP4A和ATP4B的自身抗体(Lahner,E.,Brigatti,C.,Marzinotto,I.,Carabotti,M.,Scalese,G.,Davidson,H.W.,Wenzlau,J.M.,Bosi,E.,Piemonti,L.,Annibale,B.和Lampasona,V.(2017)LuminescentImmunoprecipitationSystem(LIPS)forDetectionofAutoantibodiesAgainstATP4AandATP4BSubunitsofGastricProtonPumpH+/K+-ATPaseinAtrophicBodyGastritisPatients,ClinicalandTranslationalGastroenterology,8(1):e215)。Burbelo等人研究了在遭受I型糖尿病之苦的患者中针对ATP4B的抗体的出现(Burbelo,P.D.,Lebovitz,E.E.,Bren,K.E.,Bayat,A.,Paviol,S.,Wenzlau,J.M.,Barriga,K.J.,Rewers,M.,Harlan,D.M.和Iadarola,M.J.(2012)ExtrapancreaticAutoantibodyProfilesinTypeIDiabetes,PLOSONE,7(9):e45216)。Kontani等人通过使用小鼠的样品将α-亚基鉴定为在AIG中的主要抗原性蛋白质(Kontani,K.,Taguchi,D.和本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于诊断AIG的方法，其包括检测在包含抗体的样品中是否存在针对胃H

【技术特征摘要】
20181218 EP 18213659.8;20190430 EP 19171829.51.用于诊断AIG的方法，其包括检测在包含抗体的样品中是否存在针对胃H+/K+-ATP酶的β-亚基的自身抗体的步骤，其中使用具有固相的在诊断上有用的承载体，在其上固定化有用于特异性地捕获所述自身抗体的工具。


2.根据权利要求1的方法，其中所述承载体选自包括下列各项的组：微量滴定板，珠粒，印迹，优选地Western印迹、线印迹或斑点印迹，具有经固定的细胞的免疫荧光测试承载体，其优选地用于显微镜分析，侧流装置，纤维素基聚合物，生物芯片，微阵列，和色谱柱材料。


3.根据权利要求2的方法，其中所述在诊断上有用的承载体为用于ELISA的微量滴定板。


4.根据权利要求1至3之一的方法，其中所述样品选自包括下列各项的组：血清、全血、血浆、CSF。


5.根据权利要求1至4之一的方法，其进一步包括检测在样品中是否存在针对内因子的自身抗体。


6.根据权利要求1至5之一的方法，其中所述自身抗体为IgG类别的抗体。


7.具有固相的在诊断上有用的承载体，在其上固定化有用于特异性地捕获针对胃H+/K+-ATP酶的β-亚基的自身抗体的工具。


8.根据权利要求7的承载体，其选自包括下列各项的组：微量滴定板，珠粒，印迹，优选地Western印迹、线印迹或斑点印迹，具有经固定的细胞的免疫荧光测试承载体，其优选地用于显微镜分析，侧流装置，纤维素基聚合物，生物芯片，微阵列，和色谱柱材料。


9.根据权利要求8的承载体，其中所述承载体为用于ELISA的微量滴定板。


10.特异性地结合胃H+/K+-ATP酶的β-亚基的单克隆抗体或经分离的自身抗体，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：C·戴恩里奇，C·普罗伯斯特，L·科莫罗思奇，
申请(专利权)人：欧蒙医学实验诊断股份公司，
类型：发明
国别省市：德国;DE