一种核酸扩增纸基可视化检测平台制造技术

本发明专利技术提供了一种核酸扩增纸基可视化检测平台，将扩增产物和核酸染料直接加到纸基材料上，仅仅使用一个小小的紫外灯就能实现阴阳性结果的判断。通过本发明专利技术的技术方案，基于硅胶膜内的扩增反应加入SYBRGreen I染料，利用简单的紫外光，进行可视化判断，可以方便直观地得到“是与否”的答案。硅胶膜是DNA和SYBRGreen I信号显示的相容性基质，能够为核酸扩增检测提供了一个有效的平台，使用硅胶膜不会对扩增过程产生干扰，该扩增平台的检测灵敏度和使用荧光定量PCR的检测灵敏度一直，且扩增产物的大小不受影响。硅胶膜不仅提供了结果判读平台，其多孔径性质为反应提供更多的空间，使得反应组分充分混合和扩散，为扩增反应提供良好的容器。

A paper-based visual detection platform for nucleic acid amplification

【技术实现步骤摘要】
一种核酸扩增纸基可视化检测平台
本专利技术涉及核酸检测
，具体而言，特别涉及一种核酸扩增纸基可视化检测平台。
技术介绍
各种病原菌的存在是全世界最严重的健康问题之一。为了防止大规模的暴发，早期发现病原菌和诊断疾病至关重要。核酸扩增与实时荧光检测在分子诊断领域发挥着重要的作用。然而，这种检测方法往往需要大型的荧光扩增仪，不能满足现场或即时检测（POCT）的需求。SYBRGreenI染料已广泛应用于实时定量核酸检测方法的开发，如实时荧光定量PCR（RT-PCR）或实时荧光环介导等温扩增反应（RT-LAMP）等，在分析和诊断应用中表现出良好的性能。尽管SYBRGreenI染料具有良好的性能，但在POCT中却很少使用。近年来，纸基材料因其价格便宜、方便携带、材料容易得到且具有良好的生物相容性而被广泛应用于分子诊断领域。然而，基于纸基材料的扩增和检测一体化平台却鲜有报道。
技术实现思路
为了弥补现有技术的不足，本专利技术提供了一种核酸扩增纸基可视化检测平台。本专利技术是通过如下技术方案实现的：一种核酸扩增纸基可视化检测平本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种核酸扩增纸基可视化检测平台，其特征在于,所述检测平台包括以下步骤：/n步骤（1）：将纸基材料用打孔器裁成直径3 mm的大小的圆片，并置于0.2 mL离心管盖上；/n步骤（2）：将等温扩增扩增反应液直接加步骤（1）中纸基材料圆片上，分别置于金属浴上加热反应；/n步骤（3）：向步骤（2）中的反应中加入10倍梯度稀释的副溶血性弧菌基因组DNA作为靶标；/n步骤（4）：将等温扩增反应液也直接加入0.2 mL PCR管里，并置于金属浴上加热；/n步骤（5）：待步骤（4）反应结束后，往不同的纸基材料圆片或者管里加入1µL的SYBRGreen I染料，得到的扩增产物直接置于紫外灯下激发并拍照记录；/...

【技术特征摘要】
1.一种核酸扩增纸基可视化检测平台，其特征在于,所述检测平台包括以下步骤：
步骤（1）：将纸基材料用打孔器裁成直径3mm的大小的圆片，并置于0.2mL离心管盖上；
步骤（2）：将等温扩增扩增反应液直接加步骤（1）中纸基材料圆片上，分别置于金属浴上加热反应；
步骤（3）：向步骤（2）中的反应中加入10倍梯度稀释的副溶血性弧菌基因组DNA作为靶标；
步骤（4）：将等温扩增反应液也直接加入0.2mLPCR管里，并置于金属浴上加热；
步骤（5）：待步骤（4）反应结束后，往不同的纸基材料圆片或者管里加入1µL的SYBRGreenI染料，得到的扩增产物直接置于紫外灯下激发并拍照记录；
步骤（6）：另取步骤（1）中纸基材料圆片，加入15µL2倍梯度稀释的pMD18-T载体DNA和1µL的SYBRGreenI染料加到材料表面，将圆片直接置于紫外灯下激发并拍照记录；
步骤（7）：将步骤（5）和步骤（6）得到的图像进行灰度化处理，并用ImageJ软件进行分析，记录平均像素值作为信号强度；<...

【专利技术属性】
技术研发人员：王秀丹，马翠萍，焉春雨，
申请(专利权)人：青岛科技大学，
类型：发明
国别省市：山东;37