芳香丁烯酸内酯二聚体制备方法及其在制抗菌药物中的应用技术

本发明专利技术公开了一种芳香丁烯酸内酯二聚体及其制备方法和在抗菌药物中的应用。本发明专利技术从一株曲霉属真菌

Dimerization of aromatic butenolide and its application in the preparation of antibacterial agents

【技术实现步骤摘要】
芳香丁烯酸内酯二聚体制备方法及其在制抗菌药物中的应用
本专利技术属于海洋天然药物领域，具体涉及一种芳香丁烯酸内酯二聚体及其在制备抗菌药物中的应用。
技术介绍
金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)是临床上的常见细菌，属于革兰氏阳性病原菌，可以引起人类和动物的多种疾病如肠胃炎、乳腺炎、伤口感染、菌血症、肺炎、心内膜炎、败血症等，严重的可以危及生命。S.aureus对生长环境要求较低，因此，在自然界中广泛存在，据报道，金葡菌长期宿主占人口的20％-25％，主要存在于人的鼻腔与皮肤上。在上世纪40年代，青霉素在治疗金黄色葡萄球菌引起的感染性疾病方面取得了良好的疗效，但是由于抗生素的大量使用，出现了S.aureus耐药性，特别是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的出现，使得金葡菌感染的治疗变得复杂和困难，因此，开发具有金黄色葡萄球菌抑制活性的药物迫在眉睫。近年来水产养殖业快速发展，水产养殖动物病害问题也日益突出。弧菌病是水产养殖动物出现的最为常见、危害较严重的一种疾病，感染的动物涉及鱼类、虾类、贝类及其它棘皮动物门生物如刺参等，对水产养殖业造成了巨大经济损失。灿烂弧菌（Vibriosplendidus）属于革兰氏阴性细菌，兼性厌氧，是主要的致病弧菌之一，能引起被感染的鱼体两侧特别是靠近尾部出现出血点，皮肤腐烂，严重的形成溃疡，背鳍、胸鳍、尾鳍的鳍条基部充血，肾脏、肝脏糜烂等症状，引起扇贝幼苗、大菱鲆、牡蛎、刺参等水产养殖动物的大量死亡。但是，目前并没有致病弧菌的专用抑制剂，因此，开发灿烂弧菌抑制剂，对于水产养殖业具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术提供一种曲霉属真菌及其发酵物中分离的具有抑制金黄色葡萄球菌（S.aureus）和灿烂弧菌（V.splendidus）生长的芳香丁烯酸内酯二聚体化合物及其制备方法。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案。一种曲霉属真菌AspergillusterreusSCAU011，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心（CGMCC），地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号：CGMCCNo.19270，保藏日期：2019年12月27日。一种曲霉属真菌AspergillusterreusSCAU011及其发酵产物在生产抗菌药物中的应用。所述曲霉属真菌AspergillusterreusSCAU011培养后可产生发酵产物，所述发酵产物中含有抑制S.aureus和V.splendidus生长的活性物质，其发酵液可用于生产具有抗菌活性的药物或添加剂。一种曲霉属真菌AspergillusterreusSCAU011产生的芳香丁烯酸内酯二聚体化合物，其结构式如图1所示。一种上述芳香丁烯酸内酯二聚体化合物的制备方法，包括以下步骤：（1）曲霉属真菌AspergillusterreusSCAU011的发酵；（2）从步骤（1）所得发酵物中经提取得到发酵提取物；（3）步骤（2）中的提取物通过正相硅胶柱、快速中压层析柱、反相C18柱高效液相等方法进行分离。本专利技术提供一种含有步骤（2）中提取物，或图1所示化合物或其盐在制备抗菌药物、药物中间体的用途。本专利技术提供一种含有含有步骤（2）中提取物，或图1所示化合物或其盐的抗菌药物。所述抗菌药物还包括医学上可接受的辅料。所述抗菌药物还可以包括其他有效成分，以增强抑菌效果。本专利技术具有以下优点：本专利技术的芳香丁烯酸内酯二聚体可以通过AspergillusterreusSCAU011的发酵提取分离获得，具有抑制S.aureus和V.splendidus生长的活性，在制备抗菌药物发面具有应用潜力。附图说明图1为芳香丁烯酸内酯二聚体化合物的结构式。图2为菌种SCAU011平板培养图片。图3为图1所示化合物的氢谱（600MHz）和碳谱（150MHz）数据（CDCl3）。图4为图1所示化合物主要的1H-1HCOSY、HMBC信息。图5为图1所示化合物的ECD谱图。图6为图1所示化合物的Mosher试剂衍生物结构及其δH(Δδ=δS−δR)差值。具体实施方式下面结合实施例和附图对本专利技术做进一步说明，但本专利技术不受下述实施例的限制。实施例中的实验方法，如无特别说明，均采用本领域常规技术，实验试剂均为商业购买。本专利技术的菌种AspergillusterreusSCAU011保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心（CGMCC），地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号：CGMCCNo.19270，保藏日期：2019年12月27日。实施例1菌种的分离纯化与鉴定。从湛江特呈岛红树林保护区沉积物中，经分离纯化获得菌种AspergillusterreusSCAU011，其典型培养物图片如图2所示：菌落呈圆形，菌丝白色，孢子土黄色。经ITSrDNA检测，与GeneBank数据进行比较，鉴定为Aspergillusterreus真菌。实施例2发酵物的制备。种子培养基的配制方法：土豆浸出液200mL，葡萄糖20g，海盐30g，用水定容到1L。将PDB培养基装入20个500mL的三角烧瓶中，每瓶约150mL，在121℃高压蒸汽灭菌25分钟，备用。大米培养基配置方法：将市售大米80g，酵母浸膏0.4g，葡萄糖0.4g，无菌水120mL，海盐3.6g置于1L三角瓶中，共60瓶。121℃高压蒸汽灭菌25分钟，备用。用无菌竹签挑取适量的真菌AspergillusterreusSCAU011菌种接种入种子培养基中，28℃摇床（180rpm）培养3天得到种子液，然后用移液枪接种10mL种子液到1L的装有大米培养基的三角烧瓶中，于28℃静置培养30天后，收取发酵的培养基。将发酵的大米培养基用95%乙醇浸泡，浸取液回收乙醇后剩余水相，再用乙酸乙酯进行萃取，减压浓缩得到乙酸乙酯提取物作为粗提物。实施例3芳香丁烯酸内酯二聚体的制备。按照实施例2的方法获得4.0kg发酵大米培养基，将大米培养基用95%乙醇浸泡、浸取液回收乙醇后剩余水相再用乙酸乙酯进行萃取，减压浓缩得到乙酸乙酯提取物60g。乙酸乙酯提取物用正相硅胶（100-200目）进行柱层析，以二氯甲烷-甲醇作为洗脱剂，从体积比100:0到0:100进行梯度洗脱，根据薄层层析情况合并各个流份，回收洗脱溶剂，获得7个馏分（Fr.1-Fr.7）。Fr.5进一步以二氯甲烷-丙酮作为洗脱剂进行正相硅胶（200-300目）柱层析，根据薄层层析情况合并各个流份，回收洗脱溶剂，获得6个馏分（Fr.5-1-Fr.5-6）。组分Fr.5-4以甲醇-水作为洗脱剂进行快速中压（反向C-18）层析分离，根据薄层层析情况合并各个流份，回收洗脱溶剂，获得9个馏分（Fr.5-4-1-Fr.5-4-9）。组分Fr.5-4-9采用高效液相半制备（色谱柱为YMC-Pac本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种曲霉属真菌

【技术特征摘要】
1.一种曲霉属真菌AspergillusterreusSCAU011，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏号为CGMCCNo:19270。


2.一种如权利要求1所述的曲霉属真菌产生的芳香丁烯酸内酯二聚体，其结构式如图1所示。


3.一种如权利要求1所述的曲霉属真菌AspergillusterreusSCAU011在制备权利要求2所述的图1所示化合物中的应用，其特征在于，包括以下步骤：
（1）曲霉属真菌AspergillusterreusSCAU011的发酵；
（2）从步骤（1）所得发酵物中经提取得到发酵提取...

【专利技术属性】
技术研发人员：张华，鲍洁，贺菲，刘海珊，
申请(专利权)人：济南大学，
类型：发明
国别省市：山东;37