一种对脾气虚动物模型的评价方法技术

本发明专利技术涉及动物模型评价技术领域，公开了一种对脾气虚动物模型的评价方法。本发明专利技术所述方法依据造模小鼠的皮肤生理数据及皮肤组织结构数据与脾气虚状态具有稳定且准确的关联性，利用皮肤表征观察、皮肤水分含量、光泽度和油脂、皮肤组织切片等指标结果进行对比，通过客观手段采集数据进行量化评价，弱化体征变化的主观评价误差。本发明专利技术所述评价方法在原有体征变化基础上结合其他可量化指标使评价结果更为精准，对脾气虚模型建模成功与否提供有据可依的评价结论，精准造模有利于后续脾气虚药品和化妆品的研发。

An evaluation method for animal model of spleen qi deficiency

【技术实现步骤摘要】
一种对脾气虚动物模型的评价方法
本专利技术涉及动物模型评价
，具体涉及一种对脾气虚动物模型的评价方法。
技术介绍
脾气虚为中医基础术语，又称脾气不足、脾胃虚弱。脾气虚证的病因病机为：多因饮食失调，或劳累过度，或思虑伤神，或禀赋不足、素体虚弱，及他脏病变的影响，致脾气耗伤，运化失常而成。其临床表现为：腹胀食少，食后胀甚，大便溏薄，肢体倦怠，神疲乏力，气短懒言，形体消瘦，或肥胖、浮肿，面色萎黄，舌淡苔白，脉缓弱等。由于临床脾气虚病例数量有限，所检查的指标不可能很多，且人体不宜进行损伤性检查，尤其是组织形态学观察，因此，在中医理论指导下制备符合脾气虚中医证候特点的中医动物模型是实现中医药现代化的关键。随着现代科学技术的发展，中医证候动物模型可以有效的应用于对症药物的研发，使药物研发更为快速精准，研发成本降低，药物安全性提升。现有的脾气虚模型的建立方法主要有：(1)服用苦寒药物模型，利用生大黄、厚朴、枳实等药物制成煎剂，依实验程序灌胃实验动物；(2)饮食失节模型，造模方法主要有给与造模组小鼠饲喂甘蓝和猪脂，使造模小鼠出现脾气虚症状。(3)劳倦过度模型，将造模动物饲养笼在震荡器上震荡，每日震荡10小时，震荡实验周期一般为30-40天。现有脾气虚模型建立成功与否的评价方法主要通过对生理指标进行评价，如症状体征的观察对脾气虚状态或其改善情况进行评价，如造模动物是否出现精神倦怠，嗜卧、懒动、拱背、扎堆、眼眯。造模动物是否毛色枯黄，甚至稀少。大便是否出现便软、泄泻。体重增长减慢或体重下降等。现有评价方法得到的评价结果受主观影响较大，是否构建成功往往需要多人和多次的进行评价，无法做到量化的精准评价，脾气虚模型评价结果的准确性直接影响后续对应药物的研发。且现有评价方法和评价结果的应用领域具有一定局限性，如针对改善脾气虚面容的化妆品研究，并没有适用的评价指标和评价方法。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种对脾气虚动物模型的评价方法，使得所述评价方法能够客观、准确判断脾气虚动物模型构建方法是否能够获得预期的脾气虚动物模型。为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种对脾气虚动物模型的评价方法，建脾气虚动物模型，同时设立正常对照动物，动物模型以及正常对照动物分别处死并检测其如下指标：(1)脾指数和胸腺指数；(2)皮肤生理数据；(3)皮肤组织结构病理结果；(4)体征状态；利用统计学方法对动物模型以及正常对照动物的(1)-(2)项指标数据进行差异性分析，同时记录动物模型以及正常对照动物的体征状态变化；若动物模型(1)-(2)项指标数据和正常对照动物相比具备显著性差异，并且动物模型和正常对照动物相比皮肤组织结构病理结果和体征状态发生变化，则认为脾气虚动物模型构建成功。其中，所述动物模型在建模前与正常对照动物为同品系同性别试验动物，且在相同的饲喂环境下饲喂，各生理指标无明显差异。在本专利技术具体实施方式中，所述皮肤生理数据为动物模型的皮肤水分含量、皮肤光泽度和皮肤油脂含量。其采集方法如下：将尾根部以上长3cm、宽2cm长方形皮肤上被毛除去，脱毛，用清水清洗后棉球擦拭掉水分。使用皮肤生物量化仪器测定皮肤指标。在本专利技术具体实施方式中，所述皮肤生理数据和正常对照动物相比具备显著性差异具体为皮肤水分含量显著下降、皮肤光泽度显著下降、皮肤油脂含量显著上升。在本专利技术具体实施方式，所述脾指数和胸腺指数与正常对照动物相比具备显著性差异具体为脾指数和胸腺指数均显著下降。脾指数和胸腺指数通过公式脾指数＝小鼠脾重量/小鼠体重(处死后)，胸腺指数＝小鼠胸腺质量/小鼠体重(处死后)计算，然后用统计学方法进行分析。在本专利技术具体实施方式，所述皮肤组织结构病理结果通过皮肤组织切片的HR染色进行。具体方法为，小鼠解剖后取背部皮肤组织，固定于4％多聚甲醛溶液中，48小时后取出流水冲洗，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，浸蜡包埋，切片，HE染色，中性树胶封片，显微镜下观察小鼠皮肤组织有无病理形态学改变，进行组间比较和照相。其观察要点有以下几点：①角质层，是否角化过度或角化不全；②毛囊发育情况；③皮脂腺油脂分泌情况；④真皮层单一核及多核细胞浸润；⑤毛细血管扩张。更为具体地，所述动物模型和正常对照动物相比皮肤组织结构病理结果发生变化具体为角质细胞增生，毛囊发育不全，毛囊油脂较多，真皮层增厚，嗜酸性粒细胞侵入，血管内皮细胞较少。在本专利技术具体实施方式中，所述体征状态为神态、皮肤表象、毛色、大便、舌、食量和体重。所述动物模型和正常对照动物相比体征状态发生变化具体为：神态：精神倦怠，嗜卧，懒动，弓背，扎堆，眼咪；严重时出现受惊动时无神，抓取时挣扎无力，憔悴；皮肤表象：干燥，皱缩，无光泽；毛色：毛色枯黄，甚至稀少，耳尾色白；大便：软便、便溏、泄泻；舌：舌淡苔少；食量：食量减少；体重：体重增长减慢或体重下降。在本专利技术具体实施方式中，所述动物为试验用鼠，所述统计学分析方法采用统计软件包SPSSStatistics25版统计，计量资料数值用均数±标准差(x±s)表示。在验证试验中，本专利技术首先进行脾气虚动物模型的建立，利用现有评价方法多次和多人对脾气虚模型进行评价，确认建模成功后与皮肤表征观察、皮肤水分含量、光泽度和油脂、皮肤组织切片等指标结果进行对比，即将传统脾气虚生理指标，如：体重、脾胸腺指数、表征观察，与皮肤指标测试结果相比对，判定脾气虚症状与皮肤指标的关联性。然后，根据所建立的皮肤测试指标与脾气虚状态的关联性，将皮肤指标的测试应用于脾气虚状态的观察和判定，脾气虚状态的评价方法更加科学、准确和全面。通过验证试验证实，造模小鼠的皮肤生理数据及皮肤组织结构数据与脾气虚状态具有稳定且准确的关联性，各指标均可通过客观手段采集数据进行量化评价的同时可弱化体征变化的主观评价误差，造模小鼠体征只要发生变化即可记录为合格，结合其他可量化指标使评价结果更为精准，对脾气虚模型建模成功与否提供有据可依的评价结论，精准造模有利于后续脾气虚药品和化妆品的研发。附图说明图1所示为动物模型组小鼠的皮肤结构切片图；图2所示为正常对照组小鼠的皮肤结构切片图。具体实施方式本专利技术公开了一种对脾气虚动物模型的评价方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本专利技术。本专利技术所述评价方法已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
技术实现思路
、精神和范围内对本文所述的评价方法进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本专利技术技术。以下就本专利技术所提供的一种对脾气虚动物模型的评价方法做进一步说明。实施例1：本专利技术评价方法评价指标与气虚状态的关联性一、脾气虚动物模型的建立1、动物分组将健康小鼠饲养4天以适应环境后，随机将小鼠分为6组，每组10只本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种对脾气虚动物模型的评价方法，其特征在于，构建脾气虚动物模型，同时设立正常对照动物，动物模型以及正常对照动物分别处死并检测其如下指标：/n(1)脾指数和胸腺指数；/n(2)皮肤生理数据；/n(3)皮肤组织结构病理结果；/n(4)体征状态；/n利用统计学方法对动物模型以及正常对照动物的(1)-(2)项指标数据进行差异性分析，同时记录动物模型以及正常对照动物的体征状态变化；若动物模型(1)-(2)项指标数据和正常对照动物相比具备显著性差异，并且动物模型和正常对照动物相比皮肤组织结构病理结果和体征状态发生变化，则认为脾气虚动物模型构建成功。/n

【技术特征摘要】
1.一种对脾气虚动物模型的评价方法，其特征在于，构建脾气虚动物模型，同时设立正常对照动物，动物模型以及正常对照动物分别处死并检测其如下指标：
(1)脾指数和胸腺指数；
(2)皮肤生理数据；
(3)皮肤组织结构病理结果；
(4)体征状态；
利用统计学方法对动物模型以及正常对照动物的(1)-(2)项指标数据进行差异性分析，同时记录动物模型以及正常对照动物的体征状态变化；若动物模型(1)-(2)项指标数据和正常对照动物相比具备显著性差异，并且动物模型和正常对照动物相比皮肤组织结构病理结果和体征状态发生变化，则认为脾气虚动物模型构建成功。


2.根据权利要求1所述评价方法，其特征在于，所述皮肤生理数据为动物模型的皮肤水分含量、皮肤光泽度和皮肤油脂含量。


3.根据权利要求2所述评价方法，其特征在于，所述皮肤生理数据和正常对照动物相比具备显著性差异具体为皮肤水分含量显著下降、皮肤光泽度显著下降、皮肤油脂含量显著上升。


4.根据权利要求1所述评价方法，其特征在于，所述脾指数和胸腺指数与正常对照动物相比具备显著性差异具...

【专利技术属性】
技术研发人员：李莉楠，刘光荣，
申请(专利权)人：无限极中国有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44