短小蛇根草OpWRKY2转录因子的编码序列及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种短小蛇根草OpWRKY2转录因子的编码序列及其应用，从短小蛇根草中分离克隆了1071bp的OpWRKY2转录因子的编码框序列；构建了含OpWRKY2基因的植物表达载体并遗传转化短小蛇根草茎段外植体，获得过量表达OpWRKY2基因的短小蛇根草毛状根；利用高效液相色谱法分析转基因毛状根中喜树碱的含量，结果表明过量表达OpWRKY2基因可以促进短小蛇根草毛状根中喜树碱的积累；通过qRT‑PCR分析、凝胶阻滞实验和双荧光素酶报告基因实验，发现OpWRKY2转录因子可以结合和瞬时激活喜树碱合成基因OpTDC1的表达，从而提高喜树碱的积累。本发明专利技术方法为生产具有广谱抗癌疗效的喜树碱提供了一种新型优质药源，具有重要的理论意义和潜在的应用价值。

Coding sequence and application of opwrky2 transcription factor from Ophiopogon japonicus

【技术实现步骤摘要】
短小蛇根草OpWRKY2转录因子的编码序列及其应用
本专利技术属于基因工程
，涉及一种利用OpWRKY2转录因子提高短小蛇根草毛状根中喜树碱含量的方法。
技术介绍
短小蛇根草(Ophiorrhizapumila)隶属于茜草科(Rubiaceae)蛇根草属(Ophiorrhiza)，为双子叶多年生草本植物。全草均可入药，性味苦寒，具清热解毒之效，民间用来治疗高热、百日咳和外伤感染等。短小蛇根草是继喜树和青脆枝之后发现的喜树碱(Camptothecin，CPT)药源植物。喜树碱类化合物是DNA拓扑异构酶I(TopoI)的特异性抑制剂，能够抑制细胞的复制、生长与繁殖，是一类广谱的抗癌药物。临床上被用来治疗结肠癌、直肠癌、卵巢癌等。然而单一的种植模式及匮乏的种质资源严重制约了喜树碱类抗癌药物的供应，无法满足逐年增长的市场需求。所以，提高喜树碱的产量成为了近些年的研究热点，通过代谢工程技术提高植物中次级代谢产物的含量是一个行之有效的方法。近些年来转录因子作为研究热点，被广泛的报道能够参与调控植物次级代谢。WRKY转录因子是植物中最大的转录因本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种短小蛇根草OpWRKY2转录因子的编码序列，其特征在于，所述OpWRKY2转录因子的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。所述OpWRKY2转录因子的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种短小蛇根草OpWRKY2转录因子的编码序列，其特征在于，所述OpWRKY2转录因子的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。所述OpWRKY2转录因子的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。


2.一种多肽，其特征在于，所述多肽的基酸序列如SEQIDNO.2所示。


3.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体包含如SEQIDNO.1所示的核苷酸序列。


4.一种重组表达转化菌株，其特征在于，所述重组表达转化菌株包含如SEQIDNO.1所示的核苷酸序列。


5.根据权利要求1或2所述的短小蛇根草OpWRKY2转录因子的编码序列在提高短小蛇根草中喜树碱含量的应用。


6.一种利用OpWRKY2提高短小蛇根草毛状根中喜树碱含量的方法，其特征在于，包括以下步...

【专利技术属性】
技术研发人员：开国银，张锡晨，武超，郝小龙，
申请(专利权)人：浙江中医药大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33