一种活体脂肪量沉积的无损检测方法技术

本发明专利技术提供了一种活体脂肪量沉积的无损检测方法，通过活体动物的粪便中的菌群的丰富度来预测活体脂肪量的沉积，主要包括制备活体粪便悬浮液，菌群DNA的提取，将15f/806r引物扩增16S rDNA的V4区，回收PCR产物并测序，将测定的序列进行数据处理，获得Chao1指数、ACE指数，并构建线性模型，结果得到的菌群的多样性均与腹脂重、腹脂率呈显著的线性负相关。本发明专利技术的活体脂肪量沉积的无损检测方法能对活体脂肪沉积量以及腹部脂肪的沉积范围实现稳定可靠的预测和鉴定；又能有效避免传统的分子标记方法中需要采血等有创采样方式，从而避免鸡因采血导致的伤口感染、应激、生产性能下降等问题，总体上具有简便、稳定性高、操作性强、结果可靠的优点。

A nondestructive method for fat deposition in vivo

【技术实现步骤摘要】
一种活体脂肪量沉积的无损检测方法
本专利技术涉及活体检测
，具体而言，涉及一种活体脂肪量沉积的无损检测方法。
技术介绍
肉鸡体脂(尤其是腹脂)蓄积过多一直是困扰着世界范围内肉鸡育种工作者的重大问题，腹脂沉积过多明显降低饲料转化效率，脂肪丢弃也造成浪费，同时也污染环境，给生产者、加工者和消费者造成明显的经济损失。随着消费者消费水平的提升和消费需求的多样化发展，口感佳风味好销售价格高的优质鸡也逐渐受到大众的欢迎，但消费者对优质鸡的要求也会更高，腹脂沉积过多会降低消费者对优质鸡品质的认可，同时也会降低饲料转化率，提高优质鸡本来就很高的饲养成本，此外，种鸡过肥会严重影响产蛋率、受精率和孵化率，加大了产蛋期的死淘率，影响种群的繁殖性能。所以，如果能在优质鸡性成熟时进行腹脂沉积的活体鉴定，将会加快低脂品系的选育，改良腹脂性状，改善胴体品质，带来可观的经济价值。现有技术虽已经可以实现全自动检测，但因操作程序较复杂，容易产生污染和误差，从而影响结果。同时，获取鸡的基因组信息需要对鸡进行采血，采血过程对鸡会造成一定程度的外伤，会对鸡尤其是种鸡的生产性能产生一定影响。如专利号为CN104138249A的专利公开了活体活动检测方法、活体活动控制方法和涉及活体活动的信息的传送方法，测定或控制活体的活动状态或其变化的方法等。又如专利号为CN103558296B公开了一种基于脂肪酸检测的动物源性饲料原料鉴别方法。再如专利号为WO2007140433A3的专利公开了检测生物活性脂肪酸的方法和试剂。但是上述检测方法并不能为脂肪沉积做出参考意义。综合上，在脂肪预测鉴定领域，特别是活体脂肪沉积鉴定领域，其实际应用中的亟待处理的实际问题还有很多未提出具体的解决方案。
技术实现思路
本专利技术提出了一种活体脂肪量沉积的无损检测方法以解决所述问题。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种活体脂肪量沉积的无损检测方法，所述无损检测方法通过活体动物的粪便中的菌群的丰富度来预测活体脂肪量的沉积，所述的无损检测方法包括如下步骤：1).收集活体动物的粪便，去除活体动物的粪便中的杂质，将活体动物的粪便制备成悬浮液A并保存备用；2).将制备的悬浮液A超声处理后得到悬浮液B；3).采用第一试剂盒的方法提取经过超声处理的悬浮液B中的DNA；4).采用体外DNA扩增技术，将515f/806r引物扩增16SrDNA的V4区，用第二试剂盒纯化回收PCR产物，并检测PCR产物的序列；5).将测得的序列使用数据处理系统获得Chao1指数以及ACE指数；6).利用获得的Chao1指数以及ACE指数计算菌群的丰富度；7).对得到的Chao1指数以及ACE指数分别与腹脂量、腹脂率进行线性回归分析，构建线性模型得到二元一次方程：Y＝-0.0491X+165.94，Y为腹脂重，X为Chao1指数；Y＝-0.0039X+13.96，Y为腹脂率，X为Chao1指数；Y＝-0.0498X+164.75，Y为腹脂重，X为ACE指数；Y＝-0.004X+13.92，Y为腹脂率，X为ACE指数；可选地，所述悬浮液A的制备方法为：将体积比为1-3:2-5:1-3的生理盐水，蛋白酶以及溶菌酶混合，并添加至活体动物的粪便中，搅拌形成悬浮液A，且所述生理盐水的浓度为15-20mmol/L，所述蛋白酶的浓度为15-30mg/mL，所述溶菌酶的浓度为20-50mg/mL。可选地，所述悬浮液B的制备方法为：在温度为30-45℃，超声频率为15-45Hz的条件下进行超声处理10-20min，进行反复过滤，收集滤液并对滤液进行3-6次的离心操作，往离心得到沉淀物中加入适量的浓度为10-15mmol/L的生理盐水，得到悬浮液B。可选地，所述第一试剂盒包括DNA吸附柱以及工作液，且所述采用第一试剂盒的方法为：将经过超声处理的悬浮液B加入所述DNA吸附柱中，10000-15000r/min的转速下离心1-3min，弃废液，加入所述工作液，在10000-15000r/min的转速下离心1-3min，弃废液，将DNA吸附柱进行洗脱后，得到活体动物的粪便中菌群基因组的DNA。可选地，所述第二试剂盒包括DNA吸附柱以及工作液，且所述第二试剂盒的使用方法与第一试剂盒的使用方法相同。可选地，且所述工作液包括质量浓度为5-10％的十二烷基硫酸钠，质量浓度为1-5％的异戊醇，质量浓度为45-65％的乙醇。可选地，所述DNA吸附柱进行洗脱的方法为：往DNA吸附柱中加入体积比为1-5:1-3的生理盐水以及三羟甲基氨基甲烷，且所述生理盐水的质量浓度为1-3％，所述三羟甲基氨基甲烷的质量浓度为2-5％。与现有技术相比，本专利技术所取得的有益技术效果是：1、本专利技术的活体脂肪量沉积的无损检测方法通过对活体动物的粪便的微生物多样性进行分析，能使用Chao1指数和ACE指数作为预测和鉴定活体动物的腹部脂肪沉积的生物标志，并对活体脂肪沉积量以及腹部脂肪的沉积范围实现稳定可靠的预测和鉴定。2、本专利技术的活体脂肪量沉积的无损检测方法能得到微生物多样性作为预测腹脂的指标，既能实现活体预测鉴定，又能有效避免传统的分子标记方法中需要采血等有创采样方式，从而避免鸡因采血导致的伤口感染、应激、生产性能下降等问题。3、本专利技术的活体脂肪量沉积的无损检测方法具有简便，可以实现全自动检测，成本低廉，稳定性高，可操作性强，结果可靠。附图说明从以下结合附图的描述可以进一步理解本专利技术。图中的部件不一定按比例绘制，而是将重点放在示出实施例的原理上。在不同的视图中，相同的附图标记指定对应的部分。图1是本专利技术实施例之一中一种活体脂肪量沉积的无损检测方法的腹脂重、腹脂率的线性关系示意图；图2是是本专利技术实施例之一中一种活体脂肪量沉积的无损检测方法的腹脂重、腹脂率的线性关系示意图；图3是是本专利技术实施例之一中一种活体脂肪量沉积的无损检测方法的腹脂重、腹脂率的线性关系示意图；图4是是本专利技术实施例之一中一种活体脂肪量沉积的无损检测方法的腹脂重、腹脂率的线性关系示意图。具体实施方式为了使得本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合其实施例，对本专利技术进行进一步详细说明；应当理解，此处所描述的具体实施例仅用于解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。对于本领域技术人员而言，在查阅以下详细描述之后，本实施例的其它系统、方法和/或特征将变得显而易见。本实施例不能理解为对本专利的限制，对于本领域的普通技术人员而言，可以根据具体情况理解上述术语的具体含义。本专利技术为一种活体脂肪量沉积的无损检测方法，根据图1-4所示讲述以下实施例：实施例1：一种活体脂肪量沉积的无损检测方法，所述无损检测方法通过活体动物的粪便中的菌群的丰富度来预测活体脂肪量的沉积，所述的无损检测方法包括如下步骤：1).收集活体动物的粪便，去除活体动物的粪便中的杂本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种活体脂肪量沉积的无损检测方法，其特征在于，所述无损检测方法通过活体动物的粪便中的菌群的丰富度来预测活体脂肪量的沉积，所述的无损检测方法包括如下步骤：/n1).收集活体动物的粪便，去除活体动物的粪便中的杂质，将活体动物的粪便制备成悬浮液A并保存备用；/n2).将制备的悬浮液A超声处理后得到悬浮液B；/n3).采用第一试剂盒的方法提取经过超声处理的悬浮液B中的DNA；/n4).采用体外DNA扩增技术，将515f/806r引物扩增16S rDNA的V4区，用第二试剂盒纯化回收PCR产物，并检测PCR产物的序列；/n5).将测得的序列使用数据处理系统获得Chao1指数以及ACE指数；/n6).利用获得的Chao1指数以及ACE指数计算菌群的丰富度；/n7).对得到的Chao1指数以及ACE指数分别与腹脂量、腹脂率进行线性回归分析，构建线性模型得到二元一次方程：/nY＝-0.0491X+165.94，Y为腹脂重，X为Chao1指数；/nY＝-0.0039X+13.96，Y为腹脂率，X为Chao1指数；/nY＝-0.0498X+164.75，Y为腹脂重，X为ACE指数；/nY＝-0.004X+13.92，Y为腹脂率，X为ACE指数。/n...

【技术特征摘要】
1.一种活体脂肪量沉积的无损检测方法，其特征在于，所述无损检测方法通过活体动物的粪便中的菌群的丰富度来预测活体脂肪量的沉积，所述的无损检测方法包括如下步骤：
1).收集活体动物的粪便，去除活体动物的粪便中的杂质，将活体动物的粪便制备成悬浮液A并保存备用；
2).将制备的悬浮液A超声处理后得到悬浮液B；
3).采用第一试剂盒的方法提取经过超声处理的悬浮液B中的DNA；
4).采用体外DNA扩增技术，将515f/806r引物扩增16SrDNA的V4区，用第二试剂盒纯化回收PCR产物，并检测PCR产物的序列；
5).将测得的序列使用数据处理系统获得Chao1指数以及ACE指数；
6).利用获得的Chao1指数以及ACE指数计算菌群的丰富度；
7).对得到的Chao1指数以及ACE指数分别与腹脂量、腹脂率进行线性回归分析，构建线性模型得到二元一次方程：
Y＝-0.0491X+165.94，Y为腹脂重，X为Chao1指数；
Y＝-0.0039X+13.96，Y为腹脂率，X为Chao1指数；
Y＝-0.0498X+164.75，Y为腹脂重，X为ACE指数；
Y＝-0.004X+13.92，Y为腹脂率，X为ACE指数。


2.根据权利要求1所述的活体脂肪量沉积的无损检测方法，其特征在于，所述悬浮液A的制备方法为：将体积比为1-3:2-5:1-3的生理盐水，蛋白酶以及溶菌酶混合，并添加至活体动物的粪便中，搅拌形成悬浮液A，且所述生理盐水的浓度为15-20mmol/L，所述蛋白酶的浓度为15-30mg/mL，所述溶菌酶的浓度为20-50mg/...

【专利技术属性】
技术研发人员：向海，李华，于辉，谢卓君，
申请(专利权)人：佛山科学技术学院，
类型：发明
国别省市：广东;44