基于双位点基因组编辑获得高油酸油菜的方法技术

本发明专利技术公开了一种基于双位点基因组编辑获得高油酸油菜的方法，包括以下步骤：选取能同时作用A5 FAD2和C5 FAD2的靶位点T1、T2和T3、组装gRNA表达盒、完成A5 FAD2和C5 FAD2双位点编辑载体的构建、转入农杆菌GV3101、转化油菜，经过筛选获得A5 FAD2和C5 FAD2同时发生突变的转基因植株。本发明专利技术利用CRISPR/Cas9 system以高含油量的半冬性材料B57为受体，同时针对A5和C5上的FAD2基因同时进行编辑，获得了A5 FAD2和C5 FAD2双位点同时突变的油菜高油酸材料，其油酸含量在86.4％‑89.6％之间。

The method of obtaining high oleic acid rape based on double site genome editing

【技术实现步骤摘要】
基于双位点基因组编辑获得高油酸油菜的方法
本专利技术属于植物基因工程领域，具体涉及利用CRISPR/Cas9系统对甘蓝型油菜FAD2基因进行双位点编辑以获得高油酸含量的油菜的方法。
技术介绍
在油菜不饱和脂肪酸组分中，研究者在油酸对人类健康促进作用的认识深度和广度上是最为深刻的。研究表明，地中海地区的人们患有心血管疾病的概率要远低于欧洲其他国家，其主要原因是长期食用含高油酸的橄榄油(Martínez-GonzálezandSánchez-Villegas,2004)。已有证据表明，橄榄油中的油酸含量是降低血压的关键因子之一(Terésetal.,2008)，其不仅有利于降低血压，在止血系统中也有重要作用，如减少血小板凝聚的敏感性，降低血管性血友病和质膜血栓素B2含量以及溶纤蛋白活性等(Lopez-Mirandaetal.，2007)。另一方面，高油酸菜籽油化学性质稳定，较耐贮藏，可延长货架期，并且高油酸菜籽油能有效进行甲酯化，利于生物柴油的生产。由此可见，高油酸菜籽油不仅仅在健康保健和食品加工方面非常重要，同时在工业应用上也具有重要的作用。因此本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.基于双位点基因组编辑获得高油酸油菜的方法，其特征在于：包括以下步骤：/n(1)选取能同时作用A5 FAD2和C5 FAD2的靶位点T1、T2和T3，其序列如下：/nT1序列：5’-CCGCCCTTCACTGTCGGAGAACT-3’；/nT2序列：5’-CGACGCCACCATTCCAACACTGG-3’；/nT3序列：5’-TACTTAGCCTTCAACGTCTCGGG-3’；/n(2)合成gRNA接头引物，进行gRNA表达盒的组装，将组装好的gRNA表达盒连入pYLCRISPR/Cas9P35S-H载体中，完成A5 FAD2和C5 FAD2双位点编辑载体的构建，载体命名为P

【技术特征摘要】
1.基于双位点基因组编辑获得高油酸油菜的方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)选取能同时作用A5FAD2和C5FAD2的靶位点T1、T2和T3，其序列如下：
T1序列：5’-CCGCCCTTCACTGTCGGAGAACT-3’；
T2序列：5’-CGACGCCACCATTCCAACACTGG-3’；
T3序列：5’-TACTTAGCCTTCAACGTCTCGGG-3’；
(2)合成gRNA接头引物，进行gRNA表达盒的组装，将组装好的gRNA表达盒连入pYLCRISPR/Cas9P35S-H载体中，完成A5FAD2和C5FAD2双位点编辑载体的构建，载体命名为P35S：BnFAD2；
(3)将构建好的P35S：BnFAD2载体转入农杆菌GV3101电转感受态细胞；
(4)通过农杆菌介导的油菜下...

【专利技术属性】
技术研发人员：柳寒，华水金，林宝刚，朱建方，任韵，
申请(专利权)人：浙江省农业科学院，湖州市农业科学研究院，
类型：发明
国别省市：浙江;33