一种水牛属动物线粒体基因组捕获探针试剂盒制造技术

本发明专利技术提供了一种水牛属动物线粒体基因组捕获探针试剂盒，所述探针试剂盒包括用于水牛属动物线粒体基因检测的探针组，所述探针组包含能特异性捕获全部线粒体基因的探针。还提供水牛属动物线粒体基因组捕获的方法，包括长片段扩增引物的设计；线粒体基因组扩增以及Sanger测序；高通量测序文库构建；利用所述探针进行捕获测序的步骤。能有效实现水牛属动物线粒体基因组的跨物种、高通量、准确性获取，能提高检测的特异性，测序结果对线粒体基因的覆盖度可以达到100％，且解决了现有技术中扩增测序和序列拼接，分析费时费力且成本昂贵，数据浪费等缺点。

A probe kit for mitochondrial genome capture in Buffalo

【技术实现步骤摘要】
一种水牛属动物线粒体基因组捕获探针试剂盒
本专利技术涉及生物
，具体而言，涉及一种水牛属动物线粒体基因组捕获探针试剂盒。
技术介绍
随着现代科学技术的发展，生命科学的研究已经进入了组学时代。基因和基因组测序技术已经成为现代生命科学研究，特别是基因组学研究中不可或缺的手段。近年来新一代基因组测序技术突飞猛进的发展带来了基因组学研究的空前繁荣。动物线粒体基因组的信息被广泛应用于多个领域，如被开发成分子标记应用于动物源成分鉴定、海关检验检疫、法医司法鉴别，或被应用于物种系统发生关系确立、功能基因组进化分析以及核质基因互作等研究。在生物发育过程中，一个基因组可以衍生出许多不同类型的表观基因组，它们通过不同的基因组DNA修饰方式构成不同的表观遗传信息，使有不同表型的细胞可以将其表观遗传信息通过复制传递给后代细胞。水牛属的线粒体基因组全长约为16.4kb，不同种之间的线粒体基因组变异较大，且在公共数据库中目前仅有亚洲水牛和低地倭水牛的线粒体基因组参考序列，水牛属的跨种属分子鉴定或科学研究存在较大技术障碍。如专利号为CN109182328A公开本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种水牛属动物线粒体基因组捕获探针试剂盒，其特征在于，所述探针试剂盒包括用于水牛属动物线粒体基因检测的探针组，所述探针组包含能特异性捕获全部线粒体基因的探针。/n

【技术特征摘要】
1.一种水牛属动物线粒体基因组捕获探针试剂盒，其特征在于，所述探针试剂盒包括用于水牛属动物线粒体基因检测的探针组，所述探针组包含能特异性捕获全部线粒体基因的探针。


2.一种水牛属动物线粒体基因组捕获的方法，其特征在于，所述方法利用权利要求1所述的探针进行捕获和测序分析。


3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
1).长片段扩增引物的设计：
从NCBI数据库中收集水牛属动物的参考线粒体基因组序列，并通过多重比对筛选保守区域，在保守区域上设计特定的水牛属动物线粒体基因组通用长片段扩增引物，且扩增产物长度分别为8794bp和8082bp；
2).线粒体基因组扩增以及Sanger测序：
采用所述长片段扩增引物分别扩增不同牛属种的DNA，且PCR程序设置需要经过预变性、变性、退火、延伸、循环的操作，后将各扩增阳性产物使用不同的琼脂糖凝胶纯化回收试剂盒进行纯化，通过Sanger测序以获得线粒体基因组全序列；
3).高通量测序文库构建：
a)提取基因组DNA，确定DNA样品的起始添加量；
b)使用超声波破碎仪进行DNA样品打断处理，程序设置为间歇式循环打断；
c)对打断后的片段化的DNA样品于PCR管中进行末端修复和加A-Tailing；
d)对步骤c)中的后的产物引入接头连接以及连接后的清洗；
e)将引入接头连接的清洗后的产物进行溶解并进行文库扩增以及扩增后的清洗；
f)将扩增后完成清洗的PCR产物进行纯化和质控，构建的高通量测序文库用...

【专利技术属性】
技术研发人员：向海，赵兴波，张兴，
申请(专利权)人：佛山科学技术学院，
类型：发明
国别省市：广东;44