一种重组蛋白swHO1的制备方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种重组蛋白swHO1的制备方法，提取黄鳝肝脏组织总RNA，通过反转录和PCR扩增，将黄鳝血红素氧化酶1的编码基因克隆到表达载体上，获得重组表达载体pET‑HO1；将所述重组表达载体pET‑HO1转化到大肠杆菌BL21(DE3)细胞中进行表达，纯化，得到重组蛋白swHO1。一种重组蛋白swHO1在病原细菌诱导的黄鳝氧化应激调控中的应用、及黄鳝免疫相关基因表达调控中的应用。本发明专利技术构建了黄鳝血红素氧化酶1基因的原核表达载体，诱导表达，亲和层析获得纯化的重组蛋白swHO1。本发明专利技术制备的黄鳝血红素氧化酶1具有提高病原细菌处理的血清组织中抗氧化能力和提高肝脏免疫相关基因表达的作用。

Preparation and application of a recombinant protein swho1

【技术实现步骤摘要】
一种重组蛋白swHO1的制备方法及应用
本专利技术属于重组基因蛋白
，具体涉及一种重组蛋白swHO1的制备方法及应用。
技术介绍
血红素氧化酶是生物体内血红素降解过程中的重要限速酶，它可以将血红素降解为一氧化碳(CO)、胆绿素和Fe2+。这三种产物在机体内具有抗氧化、抗炎症和促进细胞自噬及调控细胞凋亡与增殖的作用。目前已知，哺乳动物血红素氧化酶有1、2和3三种主要的同工酶。黄鳝(Monopterusalbus)的HO1基因是否在病原细菌诱导的氧化应激中能够起到的调控作用和对免疫相关基因表达有什么的影响，未见相关报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种重组蛋白swHO1的制备方法，并且所制备的重组蛋白swHO1能够降低病原细菌感染诱导的氧化应激水平、提高抗氧化能力并能显著提高免疫相关基因的表达。其技术方案如下：一种重组蛋白swHO1的制备方法，提取黄鳝肝脏组织总RNA，通过反转录和PCR扩增，将黄鳝血红素氧化酶1的编码基因克隆到表达载体上，获得重组表达载体pET-HO1；将所述重组表达载体pET-HO1本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组蛋白swHO1的制备方法，其特征在于，提取黄鳝肝脏组织总RNA，通过反转录和PCR扩增，将黄鳝血红素氧化酶1的编码基因克隆到表达载体上，获得重组表达载体pET-HO1；将所述重组表达载体pET-HO1转化到大肠杆菌BL21(DE3)细胞中进行表达，纯化，得到重组蛋白swHO1。/n

【技术特征摘要】
1.一种重组蛋白swHO1的制备方法，其特征在于，提取黄鳝肝脏组织总RNA，通过反转录和PCR扩增，将黄鳝血红素氧化酶1的编码基因克隆到表达载体上，获得重组表达载体pET-HO1；将所述重组表达载体pET-HO1转化到大肠杆菌BL21(DE3)细胞中进行表达，纯化，得到重组蛋白swHO1。


2.如权利要求1所述的重组蛋白swHO1的制备方法，其特征在于，所述黄鳝血红素氧化酶1的编码基因的PCR扩增步骤如下：
(1)根据已知鱼类的HO1基因序列，设计了一对简并引物de-HO1-F和de-HO1-R用来扩增反转录得到的黄鳝HO1基因的cDNA片段；所述扩增产物进行纯化后与pEASY-T1载体连接，转化至DH5a感受态细胞中，鉴定得到阳性克隆片段；
(2)根据所得cDNA片段设计基因特异性引物HO5GSP和HO3GSP分别用于cDNA片段的5’和3’末端进行RACE扩增，得到cDNA末端序列；
(3)将所述阳性克隆片段与所述cDNA末端序列进行拼接后即得到黄鳝HO1基因全长cDNA序列。


3.如权利要求1所述的重组蛋白swHO1的制备方法，其特征在于，所述重组表达载体pET-HO1的构建步骤如下：
(1)以所述黄鳝HO1基因全长cDNA序列为模板，设计re-ex-F为正向引物，re-ex-R为反向引物，进行PCR扩增，得到PCR产物；其中所述re-ex-F引物，re-ex-R引物中分别添加了BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点；

【专利技术属性】
技术研发人员：李伟，孙文秀，臧彧伟，
申请(专利权)人：长江大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42