黎药红葱中两个新颖萘醌二聚体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及黎药红葱中两个新颖萘醌二聚体及其制备方法和应用。本发明专利技术化合物通过多级提取工艺分离而得，经实验证明，本发明专利技术两个化合物均具有明显的抗菌和抗肿瘤活性，提示其在抗菌、抗肿瘤药物或保健品中具有良好的应用前景。

Two novel naphthoquinone dimers in leek and their preparation and Application

【技术实现步骤摘要】
黎药红葱中两个新颖萘醌二聚体及其制备方法和应用
本专利技术涉及黎药红葱中两个新颖萘醌二聚体及其制备方法和应用，属于医药生物

技术介绍
红葱(Eleutherineamericana)为鸢尾科(Iridacea)红葱属(Eleutherine)植物的全草或鳞茎，又名小红蒜、红葱头、百步还阳。据《中国植物志》记载，鸢尾科红葱属植物全世界约4种，包括E.blulbosa、E.angusta、E.citriodora、E.latifolia,主要分布于东南亚和美洲地区。红葱味苦，性凉，具有清热解毒、利尿除湿、散瘀消肿、止血等功效，其鳞茎或全草均可入药，临床上应用广泛，为我国黎药所收载，主要在我国海南、广西等地区种植栽培。由于来源问题，目前国外对红葱的研究报道几乎空白，而国内对红葱的研究较为肤浅，仅从中得到少量的酚酸、甾体和少量的单倍醌类。在药理活性研究方面，国内对红葱提取物进行筛选发现其具有多方面的药理活性包括抗菌、抗炎、抗病毒、抗氧化、心脑血管作用等。
技术实现思路
本领域对于红葱新药效成分的研究相对较少，基于此，专利技术人通过深入研究，从黎药红葱中分离鉴定得到两个新颖的萘醌类二聚体，经鉴定确认其拥有全新的碳结构骨架，具有抗菌，抗肿瘤等药理活性。本专利技术采取的技术方案如下：本专利技术得到了黎药红葱中两个新颖萘醌二聚体，结构式分别如式1和式2所示：本专利技术还具体提供了所述萘醌二聚体的制备方法，包括以下步骤：S1：取干燥的红葱鳞茎粉末，使用甲醇浸提，甲醇提取液减压浓缩后得到红葱提取物；S2：将红葱提取物分散于水中，依次使用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取，得不同极性部位；S3：取乙酸乙酯部位，进行硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯至乙酸乙酯-甲醇为洗脱剂，梯度洗脱，得不同洗脱部位；S4：取乙酸乙酯-甲醇部位，进行硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂，梯度洗脱，依据薄层层析色谱的Rf值合并，得到8个部位Fr1.A～H；Fr1.A展开剂为体积比1:1的石油醚-乙酸乙酯，Rf值为0.25-0.5；Fr1.B展开剂为体积比1:8的石油醚-乙酸乙酯，Rf值为0.2-0.4；Fr1.C展开剂为体积比0:1的石油醚-乙酸乙酯，Rf值为0.2-0.5；Fr1.D展开剂为体积比99:1的乙酸乙酯-甲醇，Rf值为0.3-0.6；Fr1.E展开剂为体积比95:5的乙酸乙酯-甲醇，Rf值为0.2-0.5；Fr1.F展开剂为体积比9:1的乙酸乙酯-甲醇，Rf值为0.2-0.5；Fr1.G展开剂为体积比6:1的乙酸乙酯-甲醇，Rf值为0.3-0.6；Fr1.H展开剂为体积比4:1的乙酸乙酯-甲醇，Rf值为0.4-0.6。S5：取Fr1.B，使用液相色谱，以甲醇水为洗脱剂，等度洗脱，得到化合物1；S6：取Fr1.D，使用液相色谱，以甲醇水为洗脱剂，等度洗脱，得到化合物2。优选的，步骤S1中，红葱鳞茎粉末与甲醇的料液比为1kg:(8～10)L。优选的，步骤S3中，洗脱梯度为：石油醚-乙酸乙酯体积比10:1、5:1、2:1、1:1、0:1，乙酸乙酯-甲醇体积比100:1、80:1、60:1、40:1、30:1、20:1、10:1、0:100。优选的，步骤S4中，所述乙酸乙酯-甲醇部位为以体积比80:1的乙酸乙酯-甲醇为洗脱剂洗脱所得部位。优选的，步骤S4中，洗脱梯度为：80:1、60:1、40:1、30:1、20:1、10:1、5:1、0:100。优选的，步骤S5中，甲醇水的体积分数为55～60％。优选的，步骤S6中，甲醇水的体积分数为50～55％。本专利技术通过抗菌活性筛选和抗肿瘤活性筛选发现，所得化合物1和化合物2具有明显的抗菌和抗肿瘤活性，提示本专利技术化合物在抗菌、抗肿瘤药物或保健品中具有良好的应用前景。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：A.本专利技术从红葱中获得两个新颖的萘醌二聚体，实验证明，化合物1和化合物2均能抑制多种细菌的生长，其中对大肠杆菌的抑制效果最为显著，MIC值最低，分别为0.06、0.24μg/mL，对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)具有显著的抑制活性，MIC值分别为0.78、0.32μg/mL。化合物1和化合物2在0.05～0.6μM浓度下对多种肿瘤细胞均有不同程度的杀伤作用，表现出较强的增殖抑制活性，其中，化合物1在0.3μM浓度下，对HuH-7、BEL-7402、H22、S180的抑制率达到50％以上，在0.6μM浓度下，对BEL-7402和S180的抑制率达到90％以上。化合物2在0.3μM浓度下对HuH-7、S180和A549的抑制率达到50％以上，在0.6μM浓度下，对HuH-7、S180、A549和AGS的抑制率达到100％以上。以上结果表明，本专利技术化合物就有明细的抗菌和抗肿瘤活性，在预防或治疗肿瘤疾病药物或保健品中具有良好的应用前景。B.本专利技术化合物的制备方法相对简单，且提取过程中未使用高毒试剂，该方法安全、高效。附图说明图1化合物1-2的主要COSY和HMBC相关图2化合物1-2的ECD光谱图图3化合物1的1H-NMR谱(DMSO-d6)图4化合物1的13C-NMR谱(DMSO-d6)图5化合物1的COSY谱(DMSO-d6)图6化合物1的HSQC谱(DMSO-d6)图7化合物1的HMBC谱(DMSO-d6)图8化合物1的NOESY谱(DMSO-d6)图9化合物2的1H-NMR谱(CDCl3)图10化合物2的13C-NMR谱(CDCl3)图11化合物2的COSY谱(CDCl3)图12化合物2的HSQC谱(CDCl3)图13化合物2的HMBC谱(CDCl3)图14化合物2的NOESY谱(CDCl3)图15化合物1的HR-ESI-MS谱图16化合物2的HR-ESI-MS谱具体实施方式下面通过具体实施方式结合附图对本专利技术作进一步详细说明。本专利技术实施例所用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。本专利技术实施例所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例1：萘醌二聚体的制备方法，包括以下步骤：S1：取干燥的红葱鳞茎粉末，使用甲醇室温浸提3次，料液比1kg：10L，每次提取24h，甲醇提取液减压浓缩后得到红葱提取物；S2：将红葱提取物分散于水中，依次使用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取，得不同极性部位；S3：取乙酸乙酯部位，干法上样，湿法装柱，进行硅胶柱层析(14×100cm,100-200目)，以石油醚-乙酸乙酯至乙酸乙酯-甲醇为洗脱剂，梯度洗脱，得不同洗脱部位；洗脱梯度为：石油醚-乙酸乙酯体积比10:1、5:1、2:1、1:1、0:1，乙酸乙酯-甲醇体积比100:1、80:1、60:1、40:1、30:1、20:1、10:1、0:100；S4本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.黎药红葱中两个新颖萘醌二聚体，其特征在于，化合物1和化合物2的结构式分别如式1和式2所示：/n

【技术特征摘要】
1.黎药红葱中两个新颖萘醌二聚体，其特征在于，化合物1和化合物2的结构式分别如式1和式2所示：





2.权利要求1所述的萘醌二聚体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：取干燥的红葱鳞茎粉末，使用甲醇浸提，甲醇提取液减压浓缩后得到红葱提取物；
S2：将红葱提取物分散于水中，依次使用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取，得不同极性部位；
S3：取乙酸乙酯部位，进行硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯至乙酸乙酯-甲醇为洗脱剂，梯度洗脱，得不同洗脱部位；
S4：取乙酸乙酯-甲醇部位，进行硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂，梯度洗脱，依据薄层层析色谱的Rf值合并，得到8个部位Fr1.A～H；
S5：取Fr1.B，使用液相色谱，以甲醇水为洗脱剂，等度洗脱，得到化合物1；
S6：取Fr1.D，使用液相色谱，以甲醇水为洗脱剂，等度洗脱，得到化合物2。


3.根据权利要求2所述萘醌二聚体的制备方法，其特征在于，步骤S1中，红葱鳞茎粉末与甲醇的料液比为1kg:(8～10)L。


4.根据权利要求2所述萘醌二聚体的制备方法，其特征在于，步骤S3中，洗脱梯度为：石油醚-乙酸乙酯体积比10:1、5:1、2:1、1:1、0:1，乙酸乙酯-甲醇体积比100:1、80:1、60:1、40:1、30:1、20:1、10:1、0:100。


5.根据权利要求2所述萘醌二聚体的制备方法，其特征在于，步骤S4中，所述乙酸乙酯-甲醇部位为以体...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈德力，马国需，刘洋洋，许旭东，魏建和，
申请(专利权)人：中国医学科学院药用植物研究所海南分所，
类型：发明
国别省市：海南;46