【技术实现步骤摘要】
一种基于皮肤前体细胞的提取物及其制备方法和用途
本专利技术一种基于皮肤前体细胞的提取物及其制备方法和用途。
技术介绍
萎缩性皮肤病临床非常常见，如萎缩纹、偏侧萎缩、全层萎缩、进行性特发性皮肤萎缩、老化皮肤及皱纹以及若干继发于其他皮肤病的皮肤萎缩(如痤疮后的萎缩性疤痕)。诸多萎缩性皮肤病导致患者外观的变化，进而引起生理、心理及社会生活适应能力方面的巨大痛苦；另一方面，随着社会的发展，生活水平的显著提高，人们延缓皮肤衰老的要求也日愈迫切，市场潜力巨大。然而目前国内外对于萎缩性皮肤病却缺乏满意的治疗药物，因此寻找有效的治疗途径成为当今的研究热点。皮肤前体细胞(skin-derivedprecursors，SKP)是来源于真皮层的一类多能干细胞，具有向三个胚层的体细胞诱导分化的潜能，具有广泛的应用前景。研究表明，培养的干细胞的液体中含有多种细胞因子，被皮肤细胞摄取后，可以激活角质细胞和成纤维细胞，矫正角化过度的表皮组织，刺激真皮胶原蛋白的合成，增加皮肤组织的弹性和容量。而目前还没有以皮肤前体细胞为原料制备的提取物，用于治疗萎...
【技术保护点】
1.一种基于皮肤前体细胞的提取物的制备方法，其特征在于：它包括如下步骤：/n(1)皮肤前体细胞的分离培养：取皮肤，消毒清洗，除去脂肪层，剪成块，加胰酶2～8℃消化8～12h，再加DMEM培养基终止消化，除去表皮，真皮剪成块，加胶原酶35～40℃消化2～5h，再加DMEM培养基终止消化，解离细胞，细胞悬液接种于增殖培养基中传代培养；/n(2)皮肤前体细胞培养上清液的制备：取步骤1)所得P3-P5代细胞，接种于DMEM/F12培养基中培养72～120h，离心，过滤得上清液；/n(3)皮肤前体细胞培养上清液冻干粉的制备：取步骤2)上清液，浓缩，过滤，再加冻存保护剂混匀，过滤，冷冻即得。/n
【技术特征摘要】
1.一种基于皮肤前体细胞的提取物的制备方法，其特征在于：它包括如下步骤：
(1)皮肤前体细胞的分离培养：取皮肤，消毒清洗，除去脂肪层，剪成块，加胰酶2～8℃消化8～12h，再加DMEM培养基终止消化，除去表皮，真皮剪成块，加胶原酶35～40℃消化2～5h，再加DMEM培养基终止消化，解离细胞，细胞悬液接种于增殖培养基中传代培养；
(2)皮肤前体细胞培养上清液的制备：取步骤1)所得P3-P5代细胞，接种于DMEM/F12培养基中培养72～120h，离心，过滤得上清液；
(3)皮肤前体细胞培养上清液冻干粉的制备：取步骤2)上清液，浓缩，过滤，再加冻存保护剂混匀，过滤，冷冻即得。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤1)所述皮肤为人的皮肤，优选人包皮；所述消毒是用75％酒精消毒；所述清洗是用PBS缓冲液冲洗3次；所述剪成块是将皮肤剪成5×5mm2/块。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤1)所述加胰酶4℃消化8h；所述胰酶浓度为0.2～0.5％(g/ml)，优选0.25％(g/ml)。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤1)所述除去表皮是用PBS缓冲液冲洗2次，未洗去的表皮用镊子手工分离去除；所述真皮剪成块是将真皮剪成2-3mm2/块；所述加胶原酶37℃消化2～3h；所述胶原酶浓度为1～3mg/ml，优选1mg/ml；所述解离细胞是用1000μl移液枪反复吹打，机械解离细胞；所述细胞悬液是解离细胞后的上清液经70μm滤网过滤，2000rpm的速度离心8分钟后的细胞沉淀，加DMEM/F12培养基稀释至密度为2～4×104/ml的细胞悬液。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤1)所述传代培养的方法为：
细胞悬液接种于含2％B27,20ng/mlEGF和40ng/mlbFGF的增殖培养基中,在37℃，5％CO2条件下培养，每3-4天加1-2ml含有2％B27，20ng/mlEGF和40ng/mlbFGF的无血清洗涤培养基，细胞球中心开始...
【专利技术属性】
技术研发人员：李利，陈伟，熊丽丹，唐洁，华薇，黎安琪，舒晓红，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：四川;51
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