【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】使用光致发光颗粒的超灵敏检测方法本专利技术涉及研究、生物分析和体外诊断领域。更具体地，其主题是一种用于通过检测具有受控光学和物理化学性质的光致发光无机纳米颗粒发射的发光来对样品(特别是生物样品)中生物学或化学上感兴趣的物质(例如生物标志物、抗体、DNA、RNA和其他化合物)进行超灵敏体外检测和/或定量的方法。检测和/或定量生物样品(血液、血清、唾液、尿液、脑脊髓液等)中生物标志物、抗体或DNA和RNA的浓度对于医学诊断至关重要。在研究、体外或离体诊断、医学分析和生物分析领域，已经提出了许多方法来检测和/或确定特定物质的存在。这些方法通常基于用于检测和/或定量溶液中浓度的探针的使用。这些探针与识别化合物或靶向剂连接，以结合待分析的分子物质。识别化合物可以是分子、DNA、适配体、蛋白质或抗体。然后，可以使用一种或多种方法(例如基于它们的发光、吸光度、化学反应性、放射性等)检测借由识别化合物与待分析分子物质附连的探针。最常用的生化测定是酶联免疫吸附测定(ELISA)，其通常依靠辣根过氧化物酶作为酶来引起与底物发生反应并通过测量溶液中...
【技术保护点】
1.一种通过检测由光致发光无机纳米颗粒的发光发射，对样品，特别是生物样品中生物学或化学上感兴趣的物质进行超灵敏体外检测和/或定量的方法，所述方法至少包括以下步骤：/n(i)使用光致发光颗粒，所述光致发光颗粒全部或部分由光致发光无机纳米颗粒组成，并且在有利于其与所述样品中待分析物质联接的条件下与用于所述待分析物质的至少一种靶向剂连接，所述光致发光无机纳米颗粒由具有至少10
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170804 FR 17575541.一种通过检测由光致发光无机纳米颗粒的发光发射，对样品，特别是生物样品中生物学或化学上感兴趣的物质进行超灵敏体外检测和/或定量的方法，所述方法至少包括以下步骤：
(i)使用光致发光颗粒，所述光致发光颗粒全部或部分由光致发光无机纳米颗粒组成，并且在有利于其与所述样品中待分析物质联接的条件下与用于所述待分析物质的至少一种靶向剂连接，所述光致发光无机纳米颗粒由具有至少103个稀土离子的晶体基质组成，所述纳米颗粒具有的平均尺寸大于或等于20nm且严格小于1μm，并且在吸收光子后能够发射发光；
(ii)通过照明装置，特别是激光类型的照明装置，来激发与所述待分析物质联接的所述颗粒的稀土离子，功率为至少50mW，优选至少500mW，并且激发强度为至少1W/cm2，优选至少10W/cm2；
(iii)检测单光子吸收后由所述颗粒发射的发光，以及
(iv)通过解析所述发光测量值来确定所述物质的存在和/或浓度，在适当情况下参考标准或校准。
2.根据前一权利要求所述的方法，其中，将步骤(i)中所述样品的待分析物质预先固定在载体的表面上，将所述表面钝化使得在不存在所述待分析的物质时所述发光颗粒不附连至所述表面上。
3.根据权利要求1或2所述的方法，用于检测和/或定量所述样品中存在的感兴趣物质，其含量严格低于10pM，特别是低于1pM，或者甚至低于0.1pM，或者低于0.01pM。
4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述样品是生物样品，特别是人样品，并且更特别地选自血液、血清、血浆、唾液、尿液、脑脊髓液、鼻涂片、阴道涂片、痰液和稀释粪便物。
5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，用于检测和/或定量生物样品中的生物标志物、抗体、DNA和/或RNA。
6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述靶向剂选自多克隆或单克隆抗体、抗体片段、纳米抗体、寡核苷酸、肽、激素、配体、细胞因子、拟肽、蛋白质、碳水化合物、化学修饰的蛋白质、化学修饰的核酸、靶向已知细胞表面蛋白质的化学修饰的碳水化合物、适配体、蛋白质和DNA/RNA组装物或HaloTag型标志物使用的氯代烷，特别是抗体或抗体片段。
7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，最大化所述稀土离子的掺杂率与从所述纳米颗粒发射的量子效率之间的乘积，特别地，其中所述纳米颗粒具有不完美的结晶性。
8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述纳米颗粒具有的发射寿命大于或等于5μs，特别是大于或等于10μs，尤其是大于或等于20μs，或者甚至是大于或等于50μs。
9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述纳米颗粒具有的平均尺寸在20nm至500nm之间，优选在20nm至200nm之间，以及尤其是在20至100nm之间，特别是在25nm至100nm之间并且尤其是30至60nm之间。
10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述稀土离子是选自铕(Eu)、镝(Dy)、钐(Sm)、镨(Pr)、钕(Nd)、铒(Er)、镱(Yb)、铈(Ce)、钬(Ho)、铽(Tb)、铥(Tm)及其混合物的镧系元素离子，特别是选自Eu、Dy、Sm、Nd、Er、Yb、Tm、Tb及其混合物的镧系元素离子，特别是Eu。
11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，形成所述光致发光无机纳米颗粒的晶体基质是氧化物基质，特别是钒酸盐或磷酸盐基质；卤化物基质，特别是氟化物基质；或硫族化合物基质，特别是碲，硫化物或硒化物基质。
12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述纳米颗粒具有下式(I)：
(A1-xLnx)a(MpOq)(I)
其中：
-M代表能够与氧(O)联接以形成结晶化合物的一种或多种元素，特别地M代表选自V、P、W、Mo、As、Al、Hf、Zr、Ge、Ti、Sn、Mn和Si的一种或多种元素；特别地，M代表选自V、P、W、Mo、As和Al的一种或多种元素；
-Ln对应于一个或多个发光镧系元素离子，特别是如权利要求10所定义的；
-A对应于其电子能级不参与发光过程的晶体基质的一个或多个组成离子，特别地选自钇(Y)、钆(Gd)、镧(La)、铋(Bi)、镥(Lu)及其混合物，特别地A代表Y或Gd，并且优选A代表Y；
-0<x<1，特别地0.1≤x≤0.9，特别地0.2≤x≤0.6，尤其是0.2≤x≤0.4以及更特别地x为0.4；以及
-p、q和a的值使得符合(A1-xLnx)a(MpOq)呈电中性。
13.根据前述权利要求中任一项所述的方法，所述纳米颗粒具有下式：
A1-xLnxVO4(1-y)(PO4)y(II)
其中：
.A选自钇(Y)、钆(Gd)、镧(La)、镥(Lu)及其混合物，特别地A代表Y；
.Ln选自铕(Eu)、镝(Dy)、钐(Sm)、钕(Nd)、铒(Er)、镱(Yb)、铥(Tm)、铽(Tb)及其混合物，特别地Ln代表Eu；
.0<x<1；特别地0.2≤x≤0.6并且更特别地x为0.4；以及
.0≤y<1，特别地y为0。
14.根据权利要求13所述的方法，其中，所述式(II)的纳米颗粒在其表面上具有四烷基铵阳离子，特别是具有式NR4+的阳离子，其中，R可以相...
【专利技术属性】
技术研发人员：帕斯卡尔·普瑞拉，马克西米利安·里奇伊，塞德里克·布兹格，安蒂戈尼·亚历桑德罗，蒂埃里·加库安，
申请(专利权)人：巴黎综合理工大学，国家科学研究中心，
类型：发明
国别省市：法国;FR
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