本发明专利技术涉及一种可以用于检测早期肺腺癌的肿瘤标记物蛋白LAC‑M及其应用。所述LAC‑M蛋白是通过捕获正常人与肺腺癌患者血清蛋白多肽图谱，并将两者进行比较，筛选得到对肺腺癌具备高度特异性的肿瘤标记物。同时，本发明专利技术涉及一种基于所述LAC‑M标记物的Elisa检测方法及其试剂盒，所述检测方法具备较高的特异性，能够快速进行肺腺癌的血清学检测。
A lung adenocarcinoma tumor marker protein and its application
【技术实现步骤摘要】
一种肺腺癌肿瘤标记物蛋白及其应用
本专利技术属于肿瘤领域，特别涉及一种用于检测肺腺癌的肿瘤标记物蛋白的筛选、及其检测应用。
技术介绍
肺癌是全球范围内发病率及死亡率最高的癌种。肺癌按病理类型可以分为小细胞肺癌(smalllungcancer,SCLC)和非小细胞肺癌(non-smalllungcancer,NSCLC)；非小细胞肺癌约占肺癌种类的85％，而小细胞肺癌约占15％；其中NSCLC又分为鳞癌、腺癌、大细胞癌、肉瘤样癌等，其中，肺腺癌占到肺癌中的约50，是最为常见的肺癌类型。研究发现，不吸烟女性肺癌患者多数为肺腺癌类型。肺腺癌大多数起源于较小的支气管黏膜分泌粘液的上皮细胞，因此大多数腺癌位于肺的周围部分，呈球形肿块，靠近胸膜。女性病人较为多见，发病年龄亦较小。肺腺癌与吸烟无密切关系，一部分病例癌肿发生在肺纤维疤痕病变的基础上。腺癌在早期一般没有明显的临床症状，往往在胸部X线检查时才发现，因此通过一定检测手段筛查出易患肺腺癌的高危人群，指导这类人群提早预防肺腺癌的发生至关重要。肺腺癌的预后较差，5年生存率仅15％，这主要是由于晚期诊断和对转移性疾病有限的治疗手段有关。目前对于肺腺癌的早期检测受到如下几个因素的阻碍：第一，在疾病的早期没有特定的临床症状；第二，肺腺癌患者的年龄较大，侵略性治疗干预受限，患者接受度差；第三，低剂量螺旋CT假阳性率高并且昂贵，不适合广泛的筛查。此外，辐射暴露可能增加肺癌风险。目前尚缺乏灵敏度和特异度均满意的用于肺腺癌诊治相关的生物标志物。随着后基因组时代的到来，蛋白质组研究越来越受到国内外科技工作者的关注，蛋白质组是指“一个细胞或一个组织基因组所表达的全部蛋白质”。从蛋白质组学角度看肿瘤是一种蛋白质缺陷病，其发生过程中有许多蛋白质发生了异常变化，从而导致肿瘤组织表达的蛋白质图谱的变化。肿瘤蛋白质组学研究主要是为了建立肿瘤细胞和组织的蛋白质表达谱及研究肿瘤细胞和组织与正常细胞和组织之间差异表达的蛋白质，以期发现用于肿瘤诊断、预后和治疗的分子标志物。目前肺癌特别是肺腺癌相关血清标志物特异性、敏感度低，因此临床医学亟待寻找正确率、灵敏度、特异度高的新的肺腺癌相关血清标志物。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种能够用于早期肺癌特别是肺腺癌的蛋白标志物及其在肺腺癌早期诊断中的应用。为实现上述目的，本申请专利技术人通过捕获正常人与肺腺癌患者血清蛋白多肽图谱，并且采用ClinProTools2.1软件对比分析血清蛋白多肽谱图差异，找出组间显著差异表达的蛋白多肽分值，筛选出在肺腺癌患者血清中显著高表达的蛋白多肽峰值中筛出肺腺癌血清肿瘤标志物。本专利技术使用的多肽谱图捕获技术是质谱技术，是当前在蛋白质组学研究中最广泛使用的蛋白质分析方法。由质谱技术发展而来的蛋白质指纹图谱SELDI-TOE-MS技术，即表面增强激光解析电离飞行时间质谱，是一种包含层析与质谱的特殊蛋白质芯片技术，它综合了芯片微阵列与质谱技术两者的优点。SELDI-TOF-MS包括蛋白质芯片、飞行质谱仪和分析软件三部分。其原理是利用高能激光束使芯片中的分析物解析形成离子，根据不同质荷比，这些离子在仪器场中飞行的时间长短不一，由此绘制出一张质谱图。经电脑处理后，直接显示样品中各种蛋白质的分子量、含量等信息。同时还可将它与正常人或某种疾病患者的图谱，甚至数据库中的图谱进行对照，从而发现和捕获新的疾病特异性相关蛋白及其特征。采用这种高灵敏度的蛋白质指纹图谱技术寻找高特异性和高敏感性的肿瘤标志物已成为当前临床医学研究的热点之一。包括各种肿瘤在内的许多疾病，在发病早期，都会导致细胞内的蛋白质在成分、表达量等方面的变化，并在血清中加以反映；借助这种差异，比较正常人群与疾患人群血清中蛋白质的差异，可筛选出疾病或肿瘤相关的特异性蛋白质。对于SELDI-TOF-MS得到的质谱图作分析研究一般采用生物信息学技术。目前常用的程序是利用CiphergenProteinChip软件对分组数据及相关性进行分析，再用BioMarkerWizard软件对芯片检测得到的蛋白质相对含量及蛋白质质荷比数据进行处理。不同组、相同质荷比的蛋白质含量采用方差分析计算p值。将处理的数据以EXCEL的格式导入BiomarkerPatternsSoftware分析，选出最佳诊断蛋白质组决策树模型。本专利技术的目的是利用上述技术，筛选一种能够用作早期诊断肺腺癌的高特异性标志物蛋白质，并基于该标志物蛋白质设计专门的检测试剂盒。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术提供了一种能够用于早期肺癌特别是肺腺癌的蛋白标志物LAC-M及其在肺腺癌早期诊断中的应用，其中，所述LAC-M的序列如SEQIDNO.1所示。进一步，本专利技术提供一种检测肺腺癌(尤其早期肺腺癌)的方法，所述方法能够通过检测血液中LAC-M蛋白的存在与否来诊断患者是否患有肺腺癌。进一步，所述检测LAC-M蛋白的表达及表达水平的方法包括：免疫检测、原位杂交等；优选是一种Elisa检测方法，及相关检测试剂盒。进一步地，本专利技术提供一种快速定性检测肺腺癌的Elisa试剂盒及其方法。所述检测试剂盒包括：酶标板、兔抗LAC-M血清抗体、酶标羊抗LAC-M血清抗体、洗涤液、PBST封闭液、包含TMB的底物溶液、反应终止液。优选地，本专利技术所述的试剂盒中兔抗LAC-M血清抗体、酶标羊抗LAC-M血清抗体浓度均为2ug/ml；所述PBST封闭液含有3％的BSA；所述酶为HRP。优选地，所述反应终止液为H2SO4，浓度为2mol/L；所述洗涤液为含有0.05％Tween20的PBS，PH值为7.5。进一步的，本专利技术提供一种检测患者是否患有肺腺癌的方法，所述方法包括如下步骤：(1)将兔抗LAC-M血清抗体包被酶标板(100ul/孔)，洗涤液洗板2-5次，封闭液封闭，200ul/孔，37℃；洗板2-5次；(2)取血液样品，1:1000倍稀释，取稀释液加入包被好的酶标板中，150ul/孔，37℃孵育2-4h后，洗板2-5次；(3)加入HRP标记的羊抗LAC-M血清抗体溶液，100ul/孔，37℃孵育1-2h；洗板2-5次，拍干；(4)加入TMB底物溶液显色，100ul/孔，3-8min；终止液终止反应，观察每孔颜色；(5)判定：基本颜色为无色判定为阴性，颜色呈黄色则判定为阳性。本专利技术的优点和有益效果：本专利技术首次发现了LAC-M蛋白，并将其表达与肺腺癌的发生发展相关，通过检测受试者肺组织中LAC-M的表达，可以判断受试者是否患有肺腺癌，从而指导临床医师给受试者提供预防方案或者治疗方案。同传统的检测和治疗手段相比，本专利技术的方法更具有敏感性、特异性、无创性。具体实施方式实施例1：肺腺癌血清标志物蛋白质用表面加强的激光解析电离飞行-时间质谱检测肺腺癌血清标志物蛋白质，采用SAX-2蛋白芯片，所述表面加强的激光解析电力化-飞行时间质谱法检测的最适条件是：采用SAX-2蛋白本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种能够用于肺腺癌检测的特异性蛋白标志物LAC-M，其中，所述LAC-M的序列如SEQID NO.1所示。/n
【技术特征摘要】
1.一种能够用于肺腺癌检测的特异性蛋白标志物LAC-M，其中，所述LAC-M的序列如SEQIDNO.1所示。
2.权利要求1所述的LAC-M作为肺腺癌特异性蛋白标志物的应用。
3.一种肺腺癌特异性检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：酶标板、兔抗LAC-M血清抗体、酶标羊抗LAC-M血清抗体、洗涤液、PBST封闭液、包含TMB的底物溶液、反应终止液。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：所述LAC-M序列如SEQIDNO.1所示。
5.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中，兔抗LAC-M血清抗体、酶标羊抗LAC-M血清抗体浓度均为2ug/ml；所述PBST封闭液含有3％的BSA；所述酶为HRP。
6.根据权利要求5所述的...
【专利技术属性】
技术研发人员：冯华，巩丹慧，任春慧，刘鹤，冯晨，温宏丽，
申请(专利权)人：牡丹江医学院，
类型：发明
国别省市：黑龙;23
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