一种凝胶粒径分布检测方法技术

本发明专利技术提供一种凝胶粒径分布检测方法，其主要检测流程包括检测样品预处理、凝胶染色处理、凝胶分色处理、终处理、显微镜检测和数据统计分析,本检测方法成本低廉、操作简单，检测便捷、准确度高且可对凝胶颗粒形状进行观察记录。

A method for detecting gel size distribution

【技术实现步骤摘要】
一种凝胶粒径分布检测方法
本专利技术属于凝胶粒径检测领域，具体涉及一种整形手术用交联透明质酸钠凝胶粒径分布检测方法。
技术介绍
整形手术用交联透明质酸钠凝胶主要成分为交联透明质酸钠和游离透明质酸钠。透明质酸钠是一种由D-葡萄糖醛酸和N-乙酰基-D-葡萄糖胺通过β-（1-3）糖苷键连接而成的双糖重复结构单元组成的线性多糖。每个双糖单元通过β-（1-4）糖苷键与另个一双糖单元连接起来。透明质酸钠在交联剂作用下，经交联后得到交联透明质酸钠凝胶。交联透明质酸成透明块状固态凝胶，而游离透明质酸钠为高粘度液体，所以整形手术用交联透明质酸钠凝胶粒径检测主要是针对交联透明质酸钠凝胶颗粒。凝胶粒径的大小分布直接影响产品体内降解效果、注射时推挤力及产品均一性，故此凝胶粒径大小属于整形手术用交联透明质酸钠凝胶的重要技术参数，其检测方法的选用直接关系到凝胶颗粒粒径检测的准确性。现有整形手术用交联透明质酸钠凝胶粒径分布检测方法主要是按照《中华人民共和国药典（四部）》（2015年版）0982粒度与粒度分布法第三法（光散射法）湿法测定。光散射法湿法测定需待检样品在检测过程中均匀分散在液相中，但对如何保持待检颗粒在液相中均匀分散未做说明。交联透明质酸钠凝胶不同处理方法会导致其在液相中的沉降度，且光散射法检测专业性高，检测费用较高。
技术实现思路
针对现有技术存在的问题，本专利技术提供一种凝胶粒径分布检测方法，本检测方法成本低廉、操作简单，检测便捷、准确度高且可对凝胶颗粒形状进行观察记录。本专利技术的目的是通过以下技术方案来实现的：提供一种凝胶粒径分布检测方法,其特征在于，包括以下步骤：1）样品预处理:取凝胶样品，加入10-20倍量的PBS溶液中进行振荡清洗，每次清洗5-20min，共清洗5-10次，获得预处理后样品；2）取预处理后样品，加入到离心管中，加入染色剂进行染色处理；采用70%-95%乙醇进行分色处理；采用5%-10%甘油进行终处理，获得终处理后样品；3)显微检测：取终处理后样品，使用显微镜进行数据检测，以凝胶长轴的轴向长度测量值作为不规则颗粒粒径；4）数据统计：将测量数据进行统计、建立数据正态分布图、根据正态分布图进行凝胶粒径分布计算。优选地，所述染色剂选自甲苯胺蓝染色剂，所述甲苯胺蓝染色剂中甲苯胺蓝的质量分数为：0.1%-1%。优选地，步骤2）中，加入染色剂进行染色处理后，需进行分色处理。优选地，所述预处理后样品经过染色处理后，需加PBS溶液，振荡30-60s，静置5-10min，弃上清液后，再进行分色处理。优选地，所述分色处理具体过程为：加入70%-95%乙醇，振荡30-60s，800-1500rpm离心5-10min，弃上清液。优选地，采用5%-10%甘油进行终处理的具体过程为：加入5%-10%甘油，振荡30-60s，800-1500rpm离心5-10min，弃上清液，再加入5%-10%甘油，振荡30-60s，获得终处理后样品。优选地，所述凝胶选自交联透明质酸钠凝胶。现对于现有技术，本专利技术的有益效果在于：本检测方法中样品预处理可有效去除待检样品中游离透明质酸钠干扰，甲苯胺蓝染色剂可有效对待检样品凝胶颗粒进行深度染色，70%-95%乙醇可对样品染色效果进行巩固和加强，5%-10%甘油可有效模拟待检样品中交联透明质酸钠凝胶外部环境，保证检测过程待检样品颗粒大小无明显变化。本检测方法涉及检测试剂较少仅包括甲苯胺蓝染色剂、乙醇和甘油。本检测方法具有成本低廉、操作简单，检测便捷、准确度高的优点，可有效应用推广到企业样品生产检测中。附图说明图1是本专利技术实施例1中0.2%甲苯胺蓝染色剂染色效果图；图2是本专利技术实施例1中40倍镜下显微镜检测效果图；图3是本专利技术实施例1中数据统计凝胶粒径分布正态分布图；图4是本专利技术实施例2中0.2%甲苯胺蓝染色剂染色效果图；图5是本专利技术实施例2中40倍镜下显微镜检测效果图；图6是本专利技术实施例2中数据统计凝胶粒径分布正态分布图。具体实施例下面通过具体实施方式来进一步说明本专利技术的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本专利技术，不应视为对本专利技术的具体限制。实施例1.本实施例提供一种凝胶粒径分布检测方法，包括以下步骤：1）样品预处理:取交联透明质酸钠凝胶样品，加入20倍量的PBS溶液中进行振荡清洗，每次清洗10min，共清洗5次，获得预处理后样品；2）取预处理后样品60mg，加入1.5mL的EP离心管中，加入0.2%甲苯胺蓝染色剂1mL，用振荡器振荡45s，1000rpm离心5min，弃上清液；加1mLPBS溶液，振荡45s，静置5min，弃上清液至溶液剩余0.5mL；加入95%乙醇1mL，振荡45s，进行分色，1000rpm离心5min，弃上清液至溶液剩余0.5mL；加入10%甘油1mL，振荡45s，1000rpm离心5min，弃上清液至溶液剩余0.5mL；加入10%甘油1mL，振荡45s，获得终处理后样品。所述甲苯胺蓝染色剂配制配制方法为：用70%乙醇10mL，加入甲苯胺蓝20mg，配成0.2%的甲苯胺蓝染色剂，参考图1；3)显微检测：取终处理后样品，在40倍镜下进行显微镜观察和粒径测量，以凝胶长轴的轴向长度测量值作为不规则颗粒粒径，参考图2；4）数据统计：将测量数据进行统计、建立数据正态分布图、根据正态分布图进行凝胶粒径分布计算。数据统计结果如表1所示，正态分布图如图3所示：表1.凝胶颗粒粒径分布区间置信区间|X-µ|≤0.675σ|X-µ|≤σ|X-µ|≤1.29σ|X-µ|≤1.645σ区间概率50.03%68.27%80.30%90.00%样品11078.38~1802.64904.02~1977.00753.80~2127.22557.98~2323.04样品2675.82~1295.88523.55~1445.16397.94~1573.76230.29~1741.41样品3735.91~1233.36616.15~1353.12512.97~1456.30378.48~1590.79样品4452.39~874.89350.68~976.60263.05~1064.23148.82~1178.46样品5981.90~1595.85834.10~1743.65706.77~1870.98540.78~2036.98样品6610.95~1172.094本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种凝胶粒径分布检测方法,其特征在于，包括以下步骤：/n1）样品预处理:取凝胶样品，加入10-20倍量的PBS溶液中进行振荡清洗，每次清洗5-20min，共清洗5-10次，获得预处理后样品；/n2）取预处理后样品，加入到离心管中，加入染色剂进行染色处理；采用5%-10%甘油进行终处理，获得终处理后样品；/n3) 显微检测：取终处理后样品，使用显微镜进行数据检测，以凝胶长轴的轴向长度测量值作为不规则颗粒粒径；/n4）数据统计：将测量数据进行统计、建立数据正态分布图、根据正态分布图进行凝胶粒径分布计算。/n

【技术特征摘要】
1.一种凝胶粒径分布检测方法,其特征在于，包括以下步骤：
1）样品预处理:取凝胶样品，加入10-20倍量的PBS溶液中进行振荡清洗，每次清洗5-20min，共清洗5-10次，获得预处理后样品；
2）取预处理后样品，加入到离心管中，加入染色剂进行染色处理；采用5%-10%甘油进行终处理，获得终处理后样品；
3)显微检测：取终处理后样品，使用显微镜进行数据检测，以凝胶长轴的轴向长度测量值作为不规则颗粒粒径；
4）数据统计：将测量数据进行统计、建立数据正态分布图、根据正态分布图进行凝胶粒径分布计算。


2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述染色剂选自甲苯胺蓝染色剂，所述甲苯胺蓝染色剂中甲苯胺蓝的质量分数为：0.1%-1%。


3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤2）中，加入染色剂...

【专利技术属性】
技术研发人员：周斌，
申请(专利权)人：陕西佰傲再生医学有限公司，
类型：发明
国别省市：陕西;61