一种基于PCR-RFLP快速鉴定草地贪夜蛾的方法技术

本发明专利技术公开了一种基于PCR‑RFLP快速鉴定草地贪夜蛾的方法。本发明专利技术通过分析草地贪夜蛾与其它近缘种在COI序列上的差异，以及草地贪夜蛾两种生物型在Tpi序列上的差异，获得了草地贪夜蛾及其生物型特异性的SNP位点，并针对其中的SNP位点设计了相应的限制性内切酶。采用基于聚合酶链式反应的限制性酶切图谱多样性分析技术(PCR‑RFLP)实现了草地贪夜蛾及其生物型的快速鉴定。为基层农业技术人员以及相关农业科研人员开展草地贪夜蛾鉴定、预测预报和防治提供了一种新的便利方法。

A PCR-RFLP based method for rapid identification of Spodoptera graminis

【技术实现步骤摘要】
一种基于PCR-RFLP快速鉴定草地贪夜蛾的方法
本专利技术属于分子生物学领域，具体涉及一种基于PCR-RFLP快速鉴定草地贪夜蛾的方法。
技术介绍
草地贪夜蛾(Spodopterafrugiperda)是一种原产于南美洲的爆食性农业害虫，被列为我国重要的检验检疫对象。它具有很强的迁飞能力，扩散能力非常强。2019年1月首次在我国云南被发现。不到一年的时间，该害虫已经扩散至29个省份。目前，草地贪夜蛾在我国主要为害玉米，可造成作物减产15-73％。此外，已经发现该害虫还能够为害小麦、大豆、甘蔗等。在美国和非洲，草地贪夜蛾还能够严重为害水稻。因此，该害虫对我国水稻生产也带来了潜在的严重威胁。草地贪夜蛾目前主要在我国玉米上严重为害，与玉米上常发的其它鳞翅目害虫，如斜纹夜蛾、甜菜夜蛾、黏虫等高度相似，给基层农业技术人员的测报和防治工作带来了困难。此外，草地贪夜蛾有两种不同的生物型，玉米型(Cornstrain,C型)和水稻型(Ricestrain,R型)。前者主要为害玉米、棉花、高粱等作物，后者主要为害水稻、苜蓿、狗牙根草等。两种生物型几乎不本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于PCR-RFLP快速区分草地贪夜蛾及其近缘的方法，其特征在于，包括如下步骤：/n(1)提取待鉴定材料的基因组DNA；/n(2)以P1和P2为引物，步骤(1)得到的基因组DNA为模板，进行PCR扩增，得到大小为697bp的COI基因片段；P1的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，P2的核苷酸序列如SEQ IDNo.2所示；/n(3)对步骤(2)得到的COI基因片段进行两轮酶切：/n1)第一轮，采用Tail和AlWN I对步骤(2)得到的COI基因片段进行双酶切，琼脂糖凝胶电泳，并对电泳结果进行拍照、分析：同时具有347bp、263bp和87bp片段的为草地贪夜蛾和斜纹夜蛾，350...

【技术特征摘要】
1.一种基于PCR-RFLP快速区分草地贪夜蛾及其近缘的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)提取待鉴定材料的基因组DNA；
(2)以P1和P2为引物，步骤(1)得到的基因组DNA为模板，进行PCR扩增，得到大小为697bp的COI基因片段；P1的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示，P2的核苷酸序列如SEQIDNo.2所示；
(3)对步骤(2)得到的COI基因片段进行两轮酶切：
1)第一轮，采用Tail和AlWNI对步骤(2)得到的COI基因片段进行双酶切，琼脂糖凝胶电泳，并对电泳结果进行拍照、分析：同时具有347bp、263bp和87bp片段的为草地贪夜蛾和斜纹夜蛾，350bp的为甜菜夜蛾，697bp的为黏虫；
2)第二轮，采用BstYI对步骤(2)得到的COI基因片段进行酶切，琼脂糖凝胶电泳，并对电泳结果进行拍照、分析：同时具有587bp和110bp片段的为草地贪夜蛾，同时具有300bp和110bp片段的为黏虫，697bp的为斜纹夜蛾。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，PCR扩增程序参数设置如下：95℃，5min；随后进行35个循环扩增95℃，30s；54℃，30；72℃，40s；最后72℃补充延伸10min。


3.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄立华，江健钊，李梓钊，冯兴暴，
申请(专利权)人：华南师范大学，
类型：发明
国别省市：广东;44