质粒载体组、DNA组和外源基因导入的基因编辑方法技术

本发明专利技术属于基因工程、家禽品种分子精确改良育种技术领域，公开了一种质粒载体组、DNA组和外源基因导入的基因编辑方法，包括：P1质粒、P2质粒和P3质粒；DNA组件包括：RNA介导的Cas9内源性核酸内切酶基因、特异性位点介导sgRNA基因和导入基因片段的位点和插入位点特异性的同源DNA片段。本发明专利技术能够将目的DNA片段整合到家禽生物体的基因组合适位置的载体组的方法，有助于将目的DNA片段插入到动物细胞基因组的合适位置，从而获得转基因或嵌合动物个体。本发明专利技术的载体组具有易构建，易批量生产以及安全高效的特点。

Gene editing methods of plasmid vector group, DNA group and foreign gene introduction

【技术实现步骤摘要】
质粒载体组、DNA组和外源基因导入的基因编辑方法
本专利技术属于基因工程、家禽品种分子精确改良育种
，尤其涉及一种质粒载体组、DNA组和外源基因导入的基因编辑方法。
技术介绍
蛋禽产业我国一大特色家禽产业，特别是蛋鸭产业，因此国外内相关选育研究较多，但在蛋禽产业生产过程中由于公禽使用比例极低(在人工授精情况下公母比例只有1:20～30)，因此孵化过程中公禽的孵化生产是蛋禽产业发展中最大的资源浪费，问题因此如何利用现在最新的基因编辑技术导入外源基因进行公禽受精蛋的标示是目前蛋禽产业发展亟待解决的难题。目前的基因编辑技术对基因功能研究、药物筛选和基因治疗意义重大。通过对家禽进行转基因操作获取高附加值禽蛋，也是当前蛋禽产业选育研究的热点。但是，禽蛋受精过程发生在输卵管，早于生产过程，并且受精后在短暂时间内就发生快速胚胎发育，而多细胞胚胎的转基因操作十分复杂，这对转基因操作的时机要求十分严格。同时，传统操作需要慢病毒介导，而慢病毒介导的外源基因导入存在以下的不足：第一，慢病毒导入是利用病毒质粒的LTR区的随机重组机制进行因此存在导入的随机性，即导本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种质粒载体组，其特征在于，所述质粒载体组包括：P1质粒、P2质粒和P3质粒；/n所述P1质粒包含RNA介导的Cas9内源性核酸内切酶基因；/n所述P2质粒包含特异性位点介导sgRNA基因；/n所述P3质粒包含导入基因片段和插入位点特异性的同源性DNA片段；/n所述P2质粒序列为SEQ ID NO：1。/n所述P3的Left Homolog Part序列为SEQ ID NO：2；Right Homolog Part序列为SEQ IDNO：3。/n

【技术特征摘要】
1.一种质粒载体组，其特征在于，所述质粒载体组包括：P1质粒、P2质粒和P3质粒；
所述P1质粒包含RNA介导的Cas9内源性核酸内切酶基因；
所述P2质粒包含特异性位点介导sgRNA基因；
所述P3质粒包含导入基因片段和插入位点特异性的同源性DNA片段；
所述P2质粒序列为SEQIDNO：1。
所述P3的LeftHomologPart序列为SEQIDNO：2；RightHomologPart序列为SEQIDNO：3。


2.如权利要求1所述的质粒载体组，其特征在于，所述P3质粒包含与插入位点两侧的两个同源的DNA片段。


3.如权利要求1所述的质粒载体组，其特征在于，所述P3质粒中两个与家禽基因组插入位点特异性的同源DNA片段中间是要导入的外源基因片段。


4.如权利要求1所述的质粒载体组，其特征在于，所述P2质粒包含一个与家禽基因组同源的特异性位点片段，并引导Cas9内源性核酸酶在此切割的作用。


5.如权利要求1所述的质粒载体组，其特征在于，所述P3质粒在精子或受精卵胚盘的介导作用下通过同源互补将...

【专利技术属性】
技术研发人员：柯诺瓦·奥克萨娜，卢立志，塔巴卡·帕夫洛，任晋东，柯斯登柯·斯维特拉纳，杜雪，卜星辰，陈黎，
申请(专利权)人：浙江省农业科学院，
类型：发明
国别省市：浙江;33