一种用于免疫分析的高效氯氟氰菊酯半抗原、活化载体蛋白、完全抗原及多克隆抗体制造技术

本发明专利技术涉及检测技术领域，公开了一种用于免疫分析的高效氯氟氰菊酯半抗原、活化载体蛋白、完全抗原及多克隆抗体。本发明专利技术低毒性试剂选择性水解氰基，可一步法制备高效氯氟氰菊酯半抗原，将高效氯氟氰菊酯中的氰基转化为酰胺。将该带酰胺基的半抗原与琥珀酸酐活化的载体蛋白偶联成完全抗原，并用制备相应的多克隆抗体。该抗体对高效氯氟氰菊酯的最低检出限为10μg/L，对其他拟除虫菊酯类农药(溴氰菊酯、氯氰菊酯、氟氯氰菊酯和氰戊酸酯)无明显交叉反应。

A high efficiency cyhalothrin hapten, active carrier protein, complete antigen and polyclonal antibody for immunoassay

【技术实现步骤摘要】
一种用于免疫分析的高效氯氟氰菊酯半抗原、活化载体蛋白、完全抗原及多克隆抗体
本专利技术涉及检测
，尤其涉及一种用于免疫分析的高效氯氟氰菊酯半抗原、活化载体蛋白、完全抗原及多克隆抗体。
技术介绍
拟除虫菊酯类杀虫剂是一类模拟天然除虫菊酯的合成杀虫剂，是一种由菊酯生物合成的昆虫神经毒素。到目前为止，拟除虫菊酯已经占据了全球农药市场18％以上的份额。高效氯氟氰菊酯(如下文式1所示)是该类杀虫剂的重要组成之一，在农业生产中有着广泛的应用。尽管人们普遍认为它的毒性很低，但最近的两项研究结果对这种分子对人体的安全性提出了重大质疑。例如，研究表明，过度暴露于氰菊酯可能导致肌痛性、急性呼吸道刺激性损伤和休克。另一方面，由于在蔬菜、水果和鱼类等食品中发现高效氯氟氰菊酯残留，使人接触到氰菊酯的风险大大增加。为了控制人类对该杀虫剂的接触，许多国家和地区都对高效氯氟氰菊酯残留有严格的规定。例如，中国和欧盟食品中高效氯氟氰菊酯的最大残留限量分别为0.05mg/kg～15mg/kg和0.02mg/kg～1mg/kg。目前，食品中菊酯类化合物(本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于免疫分析的高效氯氟氰菊酯半抗原，其特征在于分子结构式为：/n

【技术特征摘要】
1.一种用于免疫分析的高效氯氟氰菊酯半抗原，其特征在于分子结构式为：





2.一种高效氯氟氰菊酯半抗原的一步合成方法，其特征在于化学反应过程如下所示：





3.如权利要求2所述的一步合成方法，其特征在于，原料以mmol计，具体包括以下步骤：将1.5-2.5mmol高效氯氟氰菊酯装入反应容器中在冰水浴中冷却，然后加入3.5-4.5mmol三甲基((三氟甲基)磺酰)硅烷，搅拌均匀；待高效氯氟氰菊酯完全溶解后，缓慢加水并对所得混合物进行搅拌；然后添加试剂对反应进行中和，用有机试剂萃取；将有机相混合并使用脱水试剂进行干燥，然后真空浓缩；产物使用硅胶柱分离，淋洗液为乙酸乙酯和正己烷的混合液。


4.如权利要求2所述的一步合成方法，其特征在于：
加入1三甲基((三氟甲基)磺酰)硅烷后搅拌1-3min；和/或
将70-80μL的水在1.5-2.5min内缓慢加入，对所得混合物搅拌3-5h；和/或
用饱和的NaHCO3溶液对反应进行中和；和/或
用有机试剂CH2Cl2萃取多次，每次用量为10-20mL；和/或
将有机相混合并使用过量的Na2SO4干燥；和/或
所述淋洗液中乙酸乙酯和正己烷的体积比为(35-65)∶(45-55)。


5.一种活化载体蛋白的制备方法，其特征在于包括以下步骤：将载体蛋白OVA在双蒸水中溶解，调节pH至8.0～8.5；然后缓慢加入琥珀酸酐；将pH＝8.0～9.0的混合溶液进行搅拌；用磷酸缓冲液透析，得到活化载体蛋白，然后保存。


6.一种用于免疫分析的高效氯氟氰菊酯完全抗原的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
1)载体蛋白活化：将载体蛋白OVA在双蒸水中溶解，调节pH至8.0～8.5；然后缓...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹立民，崔南，隋建新，林洪，韩香凝，孙逊，
申请(专利权)人：中国海洋大学，
类型：发明
国别省市：山东;37