一种用于蛋白酶酶谱法的原位凝胶制备方法技术

本发明专利技术是一种用于蛋白酶酶谱法的原位凝胶制备方法，属于土壤酶谱法技术领域。本发明专利技术的目的在于提供一种以琼脂糖、明胶、β‑环状糊精和PBS（磷酸盐缓冲溶液）为实验原料制备的原位凝胶技术，可用于根际土壤中蛋白酶分布的测定，也可广泛用于蛋白酶酶谱法实验材料。这种用于蛋白酶酶谱法的原位凝胶制备技术填补了相关凝胶制备技术的缺失，通过制备高质量的原位凝胶对实验土壤进行孵育，绘制成酶谱图，为土壤中酶活性计算提供便利。

An in situ gel preparation method for protease zymography

【技术实现步骤摘要】
一种用于蛋白酶酶谱法的原位凝胶制备方法
本专利技术是一种用于蛋白酶酶谱法的原位凝胶制备方法，属于土壤酶谱法

技术介绍
随着土壤酶谱法的发展进步，相关学者对土壤中微生物活动空间分布的探索方式也更加新颖。由于酶谱法是一种不需要破坏土壤结构的原位方法，因此它能够更真实地描绘酶活性。在以后的土壤微生物研究或根际效应的研究中，土壤酶谱法会得到更加广泛的普及与运用。根据已有研究，土壤酶活性的高低关乎土壤微生物活性，在反映微生物活性状况等方面极具参考研究价值，而植物的根际土壤受根系分泌物堆积影响强烈，土壤微生物在此微域多有集聚现象，故土壤酶活性在根际微区普遍偏高。所以根际土壤的酶活性相对于一般土壤的酶活性更具研究价值。在用于研究根际土壤蛋白酶分布的蛋白酶酶谱法中，采用覆盖有相应底物分子的膜来测量土壤中蛋白酶的分布。这些膜可以在以凝胶为基质的土壤表面上孵育，并基于考马斯亮蓝、银染法对蛋白质的染色原理对原位凝胶进行着色。最后利用比色法处理生成酶谱图。目前利用蛋白酶酶谱法来定位和定量土壤中的蛋白酶酶活性的尝试中，尚未有一种明确的优本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于蛋白酶酶谱法的原位凝胶制备方法，其特征在于包括以下步骤：/n（1）配液：凝胶采用琼脂糖配制，加入明胶用于确定蛋白酶活性，加入β-环状糊精增加所制备凝胶的稳定性，加入PBS作为保护剂；最后将以上原材料在去离子水中混合均匀；/n（2）化胶：将所配置溶液置于高压蒸气灭菌锅中，在0.5mpa的条件下加热至70℃，加热时间持续5-15min，至溶液呈澄清状态取出；/n（3）冷凝成型：准备玻璃室厚度为1mm的玻璃室，玻璃室需可拆卸供所制备凝胶的取用；将所制备的凝胶温度控制在65=75℃，浇铸在玻璃腔室内冷却成型；/n（4）孵育：凝胶冷却成型后立即拆开玻璃室的一面，稳定住凝胶的一面将其覆盖在平整...

【技术特征摘要】
1.一种用于蛋白酶酶谱法的原位凝胶制备方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）配液：凝胶采用琼脂糖配制，加入明胶用于确定蛋白酶活性，加入β-环状糊精增加所制备凝胶的稳定性，加入PBS作为保护剂；最后将以上原材料在去离子水中混合均匀；
（2）化胶：将所配置溶液置于高压蒸气灭菌锅中，在0.5mpa的条件下加热至70℃，加热时间持续5-15min，至溶液呈澄清状态取出；
（3）冷凝成型：准备玻璃室厚度为1mm的玻璃室，玻璃室需可拆卸供所制备凝胶的取用；将所制备的凝胶温度控制在65=75℃，浇铸在玻璃腔室内冷却成型；
（4）孵育：凝胶冷却成型后立即拆开玻璃室的一面，稳定住凝胶的一面将其覆盖在平整干燥的根际土壤表面；用塑料薄膜覆盖住凝胶防止其失水干燥，在黑暗条件中以室温孵育24小时；
（5）染色：将孵育好的凝胶取下，放置在蒸馏水中，用水平摇床以80rmp处理2分钟以除去表...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘寅，钱进，陆卞和，赵媛媛，钱心缘，沈俊炜，朱鑫泽，
申请(专利权)人：河海大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32