一种从人尿中提取人绒毛膜促性腺激素的方法技术

本发明专利技术公开了一种从人尿中提取人绒毛膜促性腺激素的方法，涉及生物制药技术领域。其技术要点是：采用阴离子交换树脂作为吸附剂，加入到孕妇尿液中进行搅拌、过滤、洗涤，通过乙酸铵溶液经层析法进行洗脱，然后对洗脱液进行沉淀，收集沉淀以及测定效价，得到人绒毛膜促性腺激素。通过上述方法对人尿中的人绒毛膜促性腺激素进行提取，增加了提纯效率，节约了生产成本，减少了污染排放。

A method of extracting human chorionic gonadotropin from human urine

【技术实现步骤摘要】
一种从人尿中提取人绒毛膜促性腺激素的方法
本专利技术涉及生物制药
，更具体地说，它涉及一种从人尿中提取人绒毛膜促性腺激素的方法。
技术介绍
人绒毛膜促性腺激素(HCG)是由胎盘的滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，是由α和β二聚体的糖蛋白组成的。人绒毛膜促性腺激素(HCG)，由合体滋养细胞合成。成熟女性因受精的卵子移动到子宫腔内着床后，形成胚胎，在发育成长为胎儿的过程中，胎盘合体滋养层细胞产生大量的人绒毛膜促性腺激素(HCG)，可通过孕妇血液循环而排泄到尿中。当妊娠1～2.5周时，血清和尿中的HCG水平即可迅速升高，第8周孕期达到高峰，至孕期第4个月始降至中等水平，并一直维持到妊娠末期。现在国内外人们提取人绒毛膜促性腺激素(HCG)是从孕妇尿中提取。人绒毛膜促性腺激素(HCG)在医学上有重要的用途，在国际医药市场上人绒毛膜促性腺激素(HCG)的需要量是很大的。人绒毛膜促性腺激素(HCG)是分子量约为30000-40000的糖蛋白性激素，它能刺激性腺活动，对雌性可促使卵胞成熟及排卵功能，对雄性可促使细精管功能及间质细胞活动，增加雄性素产生，促使睾丸下降，可治疗神经衰弱，习惯性流产，严重子宫出血，闭经，不孕症等，而且，人绒毛膜促性腺激素(HCG)还可以用来制备妊娠试剂和放射免疫试剂，用以妊娠检验和绒毛膜癌的诊断。在申请公开号为CN1302818A的中国专利技术专利申请中公开了一种高纯度的人绒毛膜促性腺激素(HCG)及其制备方法，本专利技术是从妊娠女性尿液中提取出的一种人绒毛膜促性腺激素(HCG)的分离纯化技术。孕妇尿液中存在含有人绒毛膜促性腺激素(HCG)，通过苯甲酸钠或者高岭土，乙醇吸附制得人绒毛膜促性腺激素(HCG)粗制品。本专利技术制备方法的特征是通过用醋酸钠的高盐抽提和低盐反抽技术得到人绒毛膜促性腺激素(HCG)中间体，经过SP-葡聚糖凝胶的分离纯化技术制得一种高纯度的人绒毛膜促性腺激素(HCG)，经过无菌无热原的处理制得医用的注射用人绒毛膜促性腺激素(HCG)精品原料。1、粗品制造：吸附、洗脱、干燥，按孕妇尿量:苯甲酸乙醇饱和液:乙醇＝1:0.75:5的配料比投料。取盐酸调尿液pH至4-5，加苯甲酸乙醇饱和液搅拌1小时，静置2-3小时过滤，弃上清液得吸附物。用95％乙醇在搅拌下洗脱，直到苯甲酸全部溶解为止，即有孥状沉淀物产生。静置过夜离心，沉淀物用95％乙醇和丙酮洗涤，千燥得粗制品，每毫克单位效价为10iu以上，每千克粗品含HCG量大于1000万单位。2、注射用HCG原料制造：1)中间体(500u/mg士)制造工段；2)纯品HCG制造工段；3)注射用HCG制造工段。3、HCG中间体的制造方法为高盐抽提法及低盐反抽法，中间体产品质量可达500iu/mg士50iu，收率为95％以上。4、采用SP-sephandexc-50纯化HCG中间体其上样及SP平衡洗涤液处方。5、纯化后的精制品再进行二次磷酸钙去热原，使产品内毒素指标稳定地控制在注射针剂规定的范围并使产品纯度再提高15％，其操作中Na3PO4及CaAC2浓度应控制在0.1-0.3M，pH在8.2-8.6之间，最好在8.5，液温应保持5C士1C。上述技术方案中存在如下缺陷：不仅通过上述方法获得的产物的效价比较低，且用到的盐酸是挥发性和腐蚀性比较强的溶剂，会产生更多的污染，经济效益较差，而且污染环境。因此，需要提出一种新的方案来解决上述问题。
技术实现思路
针对现有技术存在的不足，本专利技术的目的在于提供一种从人尿中提取人绒毛膜促性腺激素的方法，其具有增加提纯效率,节约生产成本,减少污染排放的优点。为实现上述目的，本专利技术提供了如下技术方案：一种从人尿中提取人绒毛膜促性腺激素的方法，采用阴离子交换树脂作为吸附剂，加入到孕妇尿液中进行搅拌、过滤、洗涤，通过乙酸铵溶液经层析法进行洗脱，然后对洗脱液进行沉淀，收集沉淀以及测定效价，得到人绒毛膜促性腺激素。通过采用上述技术方案，采集孕妇的尿液，向孕妇的尿液中加入阴离子交换树脂，然后对孕妇的尿液和阴离子交换树脂进行混合搅拌，进而使阴离子交换树脂对尿液中的人绒毛膜促性腺激素进行吸附，吸附作用是依靠它和被吸附的分子(吸附质)之间的范德华引力，通过它巨大的比表面进行物理吸附而工作，使有机化合物根据有吸附力及其分子量大小可以经一定溶剂洗脱分开而达到分离、纯化、除杂、浓缩等不同目的。离子交换树脂是一类具有离子交换功能的高分子材料。在溶液中它能将本身的离子与溶液中的同号离子进行交换。按交换基团性质的不同，离子交换树脂可分为阳离子交换树脂和阴离子交换树脂两类。阴离子交换树脂含有季胺基[-N(CH3)3OH]、胺基(-NH2)或亚胺基(-NH2)等碱性基团。它们在水中能生成OH-离子，可与各种阴离子起交换作用，其交换原理为：R—N(CH3)3OH+Cl-——R—N(CH3)3Cl+OH-，在孕妇尿液中，阴离子交换树脂中的OH-与人绒毛膜促性腺激素中的阴离子交换，使阴离子交换树脂与人绒毛膜促性腺激素交联，实现吸附，然后对孕妇的尿液和阴离子交换树脂的混合液进行过滤，对吸附后的阴离子交换树脂进行洗涤，洗去一些尿液中的杂质，避免对下一步的实验造成影响，洗涤过后，再通过乙酸铵溶液对吸附在阴离子交换树脂上的人绒毛膜促性腺激素进行洗脱，并收集洗脱液，进行沉淀，获得沉淀固体，进行测定效价，就得到了从孕妇的尿液中提取的人绒毛膜促性腺激素。层析法是利用不同物质理化性质的差异而建立起来的技术，所有的层析系统都由两个相组成：一是固定相，另一是流动相。当待分离的混合物随流动相通过固定相时，由于各组分的理化性质存在差异，与两相发生相互作用(吸附、溶解、结合等)的能力不同，在两相中的分配(含量比)不同，且随流动相向前移动，各组分不断地在两相中进行再分配。分步收集流出液，可得到样品中所含的各单一组分，从而达到将各组分分离的目的。此实验过程的原理就是将已吸附人绒毛膜促性腺激素粗品的阴离子交换树脂装入层析系统，通过流动相10％乙酸铵溶液，再通过固定相，由于人绒毛膜促性腺激素和阴离子交换树脂的理化性质存在很大的差异，两者会在固定相和流动相中进行再分配，分步收集流出液，即可得到含有单一组分人绒毛膜促性腺激素的洗脱液，即达到人绒毛膜促性腺激素和阴离子交换树脂的相互分离目的。本专利技术在一较佳示例中可以进一步配置为：所述阴离子交换树脂的用量为孕妇尿液体积的1％-5％。通过采用上述技术方案，采用阴离子交换树脂的用量为孕妇尿液体积的1％-5％，使阴离子交换树脂在这样的一个合适范围，便于更好地吸收孕妇尿液中的人绒毛膜促性腺激素。进一步优选为，所述阴离子交换树脂采用的是陶氏550A(OH)阴离子交换树脂。通过采用上述技术方案，陶氏550A(OH)阴离子交换树脂是上海凯茵化工有限公司从美国进口的一线品牌原料，陶氏550A(OH)阴离子交换树脂是一种具有极高交换容量的高品质树脂，它除了具有超强的颗粒完整性以外，还具有极易与阳树脂加以识别的浅色。它特别适合于火电厂本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种从人尿中提取人绒毛膜促性腺激素的方法，其特征在于：采用阴离子交换树脂作为吸附剂，加入到孕妇尿液中进行搅拌、过滤、洗涤，通过乙酸铵溶液经层析法进行洗脱，然后对洗脱液进行沉淀，收集沉淀以及测定效价，得到人绒毛膜促性腺激素。/n

【技术特征摘要】
1.一种从人尿中提取人绒毛膜促性腺激素的方法，其特征在于：采用阴离子交换树脂作为吸附剂，加入到孕妇尿液中进行搅拌、过滤、洗涤，通过乙酸铵溶液经层析法进行洗脱，然后对洗脱液进行沉淀，收集沉淀以及测定效价，得到人绒毛膜促性腺激素。


2.根据权利要求1所述的一种从人尿中提取人绒毛膜促性腺激素的方法，其特征在于：所述阴离子交换树脂的体积为孕妇尿液体积的1%-5%。


3.根据权利要求1所述的一种从人尿中提取人绒毛膜促性腺激素的方法，其特征在于：所述阴离子交换树脂采用的是陶氏550A（OH）阴离子交换树脂。


4.根据权利要求3所述的一种从人尿中提取人绒毛膜促性腺激素的方法，其特征在于：所述孕妇尿液为怀孕2-6个月的孕妇新鲜尿液。


5.根据权利要求1所述的一种从人尿中提取人绒毛膜促性腺激素的方法，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：秦卓韬，
申请(专利权)人：上海浦东明炎生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31