NTx检测试纸及NTx检测试剂盒制造技术

本实用新型专利技术公开了一种具有较好灵敏度的NTx检测试纸和NTx检测试剂盒。该NTx检测试纸包括依次连接的标记垫、包被膜和吸水垫，标记垫上包被有NTx荧光标记抗体，包被膜在沿层析方向上依次设有检测线和质控线，检测线上包被有NTx偶联抗原，质控线上包被有抗抗体，抗抗体特异性结合NTx荧光标记抗体，检测线和质控线相互分离。本实用新型专利技术所提供的NTx检测试纸利用竞争侧向层析检测的原理，基于测定检测线和质控线上的荧光强度结合标准浓度曲线来测定样品中所含抗原的浓度。本实用新型专利技术所提供的检测试纸能够明显的提高检测的特异性，缩短检测所需时间。通过荧光标记抗体，能够明显的提高检测灵敏度。

NTX test paper and NTX test kit

【技术实现步骤摘要】
NTx检测试纸及NTx检测试剂盒
本技术涉及免疫检测
，尤其是涉及一种NTx检测试纸及NTx检测试剂盒。
技术介绍
骨质疏松症(osteoporosis)是骨形成与骨吸收发生失衡，导致钙质由骨骼往血液净移动，其症状为骨质流失和骨组织破坏，骨质脆弱，容易骨折。随着人口寿命的增长和老龄人口的增多，原发性骨质疏松代谢性疾病已成为影响健康的严重疾病之一。在我国，目前有9700万骨质疏松患者，女性占三分之二。骨质疏松症现位居中老年人五大疾病患病率之首，已成为我国乃至世界广泛关注的社会问题，骨质疏松已与冠心病癌症一样危害着人们的健康，对其之诊治有极为迫切的重要性。退行性骨质疏松症诊断需依靠临床表现、骨密度检测、X光片及骨转换生化指标等综合分析判断。双能X射线骨密度检测是诊断骨质疏松症的金标准，如果测得的骨矿物质密度低于年青人的标准值2.5个标准方差值，即可诊断为骨质疏松症。但是，基于骨密度的检测的敏感度差，往往需要到半年甚至一年以上才能有动态变化。因此，对骨转化生化指标，特别是骨转换过程中的标志物进行检测已经成为诊断骨质疏松症的重要手段。研究发现，骨质疏松患者的骨质吸收增多表现突出，所以骨吸收标志物的表达变化研究意义较高，而骨吸收标志物中I型胶原交联N-末端肽(NTx)、Ⅰ型胶原交联C-末端肽(CTx)和白介素-6(IL-6)对于骨胶原降解和破骨细胞调节作用明显，对骨吸收具有促进作用，是对骨转换敏感性较好的检测指标。目前常见的人骨代谢标志物的检测方法是胶体金免疫层析法，胶体金检测相比于ELISA更快，但在灵敏度上有待提高，无法精确测量。因此，有必要提供一种具有较好灵敏度的NTx检测产品。
技术实现思路
本技术所要解决的技术问题是如何提供一种具有较好灵敏度的NTx检测试纸及NTx检测试剂盒。根据本技术的第一个方面，本技术提供一种NTx检测试纸，根据本技术的实施例，该NTx检测试纸包括依次连接的标记垫、包被膜和吸水垫，标记垫上包被有NTx荧光标记抗体，包被膜在沿层析方向上依次设有检测线和质控线，检测线上包被有NTx偶联抗原，质控线上包被有抗抗体，抗抗体特异性结合NTx荧光标记抗体，检测线和质控线相互分离。本技术的有益效果是：本技术所提供的NTx检测试纸利用竞争侧向层析检测的原理，标记垫上包被的NTx荧光标记抗体能特异性结合包被膜上检测线位置包被的NTx偶联抗原，利用膜层析在包被膜上形成NTx偶联抗原-NTx荧光标记抗体复合物，多余的NTx荧光标记抗体则在质控线与抗抗体形成抗抗体-NTx荧光标记抗体复合物。当样品中存在NTx抗原时，样品抗原与NTx荧光标记抗体结合，层析到检测线时NTx偶联抗原无法捕获与样品抗原相结合的NTx荧光标记抗体。层析到质控线上与抗抗体结合的NTx荧光标记抗体的量也发生改变。基于测定检测线和质控线上的荧光强度结合标准浓度曲线来测定样品中所含抗原的浓度。本技术所提供的检测试纸能够明显的提高检测的特异性，缩短检测所需时间。通过荧光标记抗体，能够明显的提高检测灵敏度。根据本技术的实施例，NTx荧光标记抗体的荧光标记为荧光微球，形成NTx荧光微球标记抗体，NTx抗体与荧光微球通过肽键共价结合，从而提高标记物的稳定性，避免了抗体空间位阻的影响，有利于提高灵敏度和特异性。根据本技术的实施例，荧光微球直径在纳米级范围内，具体粒径范围为10nm～600nm，较佳地为40nm～300nm。其上负载有荧光物质，是受外界能量刺激能激发出荧光的固体微粒。根据本技术的实施例，荧光微球包括荧光物质和包覆荧光物质的聚合物层。荧光物质可以是量子点或稀土络合物，相应地形成量子点荧光微球或稀土络合物荧光微球。这两种荧光物质在紫外光源激发下发射的荧光寿命长，不易漂白，其强度能够有效应用于定量检测。量子点优选是CdSe/CdS，稀土络合物优选是Eu(TTA)3Phen。根据本技术的实施例，聚合物层为经活化的聚合物层。根据本技术的实施例，对聚合物层进行活性官能基团的修饰，使NTx抗体能够以共价偶联的方式定向连接到荧光微球表面。活性官能基团可以是羧基、氨基、羟基、巯基。根据本技术的实施例，聚合物层是苯乙烯-羧基聚乙烯醇共聚物层。单一的苯乙烯聚合物合成条件难以控制、荧光效率低、粒径不均一，而苯乙烯-羧基聚乙烯醇共聚物制得的荧光微球则具有较高的荧光效率和更为均一的粒径。根据本技术的实施例，NTx偶联抗原为NTx多肽与载体蛋白的偶联物。优选的，NTx多肽与载体蛋白的偶联比为(5～50)：1。其中，载体蛋白是任意能够使NTx获得免疫原性的载体，包括但不仅限于常规的载体蛋白，例如牛血清白蛋白BSA、鸡卵白蛋白OVA、血蓝蛋白KLH等。根据本技术的实施例，标记垫、包被膜和吸水垫固定在同一固相基质的底板上。固相基质的底板主要起承载作用，方便检测过程中进行操作。固相基质的类型不作特别限定，可以为不会与待测样品发生反应或者不影响抗原抗体结合的惰性材料，比如纸板、塑料板等。根据本技术的实施例，标记垫为玻璃纤维素膜，包被膜为硝酸纤维素膜(NC膜)。玻璃纤维素膜呈化学惰性，不含粘合剂，采用100％硼硅酸玻璃纤维制造而成，利于其上包被的NTx荧光标记抗体与待测样品中的目标抗原发生特异性结合。NC膜本身是已经添加了表面活性剂来改善亲水能力，而且已经存在有一定的缓冲系统，具有毛细纤维结构，能吸附比同等纤维素滤纸更多的水分，流速快、耐高温，利于其上包被的NTx偶联抗原与前述的NTx荧光标记抗体发生特异性结合反应，激发荧光。根据本技术的实施例，NTx抗体可以特异性结合NTx抗原。NTx抗体可以是NTx多克隆抗体和单克隆抗体中的任一种。本技术的这一检测试纸是基于对荧光标记、抗原和抗体特性的研究，通过选择适合的荧光标记与特异性的抗体进行定向共价化学偶联，获得荧光标记抗体分析，并通过优化竞争法免疫反应的各种条件，制备得到上述检测NTx的检测试纸。根据本技术的实施例，抗抗体为羊抗鼠IgG抗体。其能够与NTx抗体特异性结合，即与多余的带荧光标记NTx抗体结合形成免疫复合物，激发荧光，得以能够定性和/或定量检测该免疫复合物。根据本技术的实施例，NTx检测试纸的宽度为3mm～5mm。根据本技术的实施例，该NTx检测试纸具体可以采用以下制备方法进行制备：S1：NTx荧光微球标记抗体的制备采用适合的羧基修饰的荧光微球，活化其表面的羧基后，采用共价偶联的方式分别将NTx标记抗体定向连接到该羧基修饰的荧光微球表面。S2：测试区T线和C线处抗原抗体的包被采用喷膜仪器，在包被膜的检测线处喷涂NTx偶联抗原，在质控线处喷涂羊抗鼠IgG抗体。S3：NTx荧光微球标记抗体的包被采用喷涂仪器，在标记垫处喷涂NTx荧光微球标记抗体，该特定位置作为后续的“加样端”。S4：检测试纸的组装成型在塑料支撑背板中间粘贴作为测试区本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种NTx检测试纸，其特征在于，包括依次连接的标记垫、包被膜和吸水垫，所述标记垫上包被有NTx荧光标记抗体，所述包被膜在沿层析方向上依次设有检测线和质控线，所述检测线上包被有NTx偶联抗原，所述质控线上包被有抗抗体，所述抗抗体特异性结合所述NTx荧光标记抗体，所述检测线和所述质控线相互分离。/n

【技术特征摘要】
1.一种NTx检测试纸，其特征在于，包括依次连接的标记垫、包被膜和吸水垫，所述标记垫上包被有NTx荧光标记抗体，所述包被膜在沿层析方向上依次设有检测线和质控线，所述检测线上包被有NTx偶联抗原，所述质控线上包被有抗抗体，所述抗抗体特异性结合所述NTx荧光标记抗体，所述检测线和所述质控线相互分离。


2.根据权利要求1所述的NTx检测试纸，其特征在于，所述NTx荧光标记抗体为NTx荧光微球标记抗体。


3.根据权利要求2所述的NTx检测试纸，其特征在于，所述NTx荧光微球标记抗体的荧光微球的粒径为10nm～600nm。


4.根据权利要求2所述的NTx检测试纸，其特征在于，所述NTx荧光微...

【专利技术属性】
技术研发人员：马岚，吴峰，岑瑜，毛茅，
申请(专利权)人：清华大学深圳研究生院，
类型：新型
国别省市：广东;44