基于氯高铁血红素诱导生物催化光电敏感界面的miRNA高效检测制造技术

本发明专利技术公开了一种基于氯高铁血红素诱导生物催化沉淀反应实现micro‑RNA高效检测方法。在纸芯片上依次修饰金纳米颗粒和硫化镉量子点后，发夹结构的捕获DNA被修饰在电极表面。随后micro‑RNA与捕获DNA杂交形成的双链结构可被DSN剪切，从而释放micro‑RNA，释放的microRNA在与捕获DNA杂交后被DSN剪切，从而形成DSN辅助micro‑RNA循环。此后，电极表面得到很多的短的DNA片段与随后加入的氯高铁血红素标记的DNA杂交形成重新双链结构。在过氧化氢的存在下，氯高铁血红素催化4‑氯‑1‑萘酚，从而在电极表面形成不溶性沉淀，能有效地抑制抗坏血酸到电极表面的转移，导致光电流的降低。此方法具有低的检测限和较宽的检测范围，为微量检测RNA序列提供了一个思路，同时在许多疾病的早期诊断具有广阔应用前景。

Efficient detection of miRNA based on photocatalysis photoelectric sensitive interface induced by hemin

【技术实现步骤摘要】
基于氯高铁血红素诱导生物催化光电敏感界面的miRNA高效检测
本专利技术涉及纳米材料制备，RNA检测技术及纸芯片
，更具体的说是基于氯高铁血红素诱导生物催化光电敏感界面的miRNA高效检测。
技术介绍
作为在健康细胞和致病细胞中重要的组成成分之一，miRNA在基因表达与调控中扮演重要的角色。他们影响哺乳动物百分之五十以上的蛋白质编码基因，它们的失调会导致癌症和其他疾病。因此，实现对miRNA的高效灵敏检测是十分重要的。光致电化学传感由于设备简单、灵敏度高、简单操作等优点收到广泛关注。在PEC传感系统中，许多信号放大策略被使用实现对一系列目标物的检测，如目标循环放大，环介导等温扩增，滚动循环放大等。其中，酶辅助的目标循环放大技术通过将传感电极置于含酶的目标物溶液中培育实现循环放大的功能。该技术不需要额外的培育过程和复杂的操作，同时也具有循环放大特点，具有广阔的应用前景。为了进一步提高对目标物的检测范围和检测限，酶生物催化沉淀（BCP）被引入实现对micro-RNA的高效灵敏检测。BCP会导致电极表面形成不溶物绝缘层，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于氯高铁血红素诱导生物催化光电敏感界面的miRNA高效检测方法，其特征在于该方法包括以下步骤：/n（1）首先利用Adobe illustrator CS4软件设计微流控纸芯片的图案，利用蜡打印机将设计好的图案打印在A4色谱纸上，然后将打印过的色谱纸放在烘箱中，在100 ℃加热60 s形成疏水区域和亲水的工作区域；/n（2）利用丝网印刷技术在步骤（1）中获得的纸芯片上印刷三电极体系（碳工作电极、碳对电极和Ag/AgCl参比电极）；/n（3）利用原位化学合成法在碳电极的工作区域生长生长聚吡咯导电聚合物，其具体步骤为：首先，量取20 μL - 30 μL吡咯单体滴涂在（2）电极的工作区域，...

【技术特征摘要】
1.一种基于氯高铁血红素诱导生物催化光电敏感界面的miRNA高效检测方法，其特征在于该方法包括以下步骤：
（1）首先利用AdobeillustratorCS4软件设计微流控纸芯片的图案，利用蜡打印机将设计好的图案打印在A4色谱纸上，然后将打印过的色谱纸放在烘箱中，在100℃加热60s形成疏水区域和亲水的工作区域；
（2）利用丝网印刷技术在步骤（1）中获得的纸芯片上印刷三电极体系（碳工作电极、碳对电极和Ag/AgCl参比电极）；
（3）利用原位化学合成法在碳电极的工作区域生长生长聚吡咯导电聚合物，其具体步骤为：首先，量取20μL-30μL吡咯单体滴涂在（2）电极的工作区域，室温下放置10min，然后取20μL新配置的摩尔浓度为0.49M氯化铁和0.3M盐酸混合溶液转移到电极表面于4℃下放置2-3h，紧接着依次用50μL0.3M的盐酸溶液，0.1M的氯化钠溶液和去离子水仔细清洗工作电极表面，最后于室温下干燥；
（4）将20μL壳聚糖修饰的硫化镉量子点固定在步骤（3）中电极的工作区域，在仔细清洗电极后，将20μL戊二醛溶液置于电极表面活化壳聚糖修饰的硫化镉量子点，然后用pH7.4的PBS清洗三次；
（5）将20μL1μM捕获DNA固定在步骤（4）中获得电极的工作区域，随后利用BSA封闭未被固定的活性位点，用pH7.4的PBS清洗，然后取20μL含不同浓度miRNA和0.03U·μL-1DSNand5mM氯化镁的混合溶液置于纸芯片上，在室温...

【专利技术属性】
技术研发人员：于京华，史慧慧，王衍虎，高超民，葛慎光，
申请(专利权)人：济南大学，
类型：发明
国别省市：山东;37