本发明专利技术公开了一种抗REGγ C末端区域的单克隆抗体及其制备方法与应用，所述单克隆抗体是由名称为：杂交瘤细胞株Mc‑IgG‑REGγ‑C，保藏单位为：中国普通微生物菌种保藏管理中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编：100101，保藏日期为：2018年11月14日，保藏编号为CGMCC：No.16809的杂交瘤细胞Mc‑IgG‑REGγ‑C分泌的。本发明专利技术的单克隆抗体具有高效价、高灵敏度、高均一性及高特异性等特点，可以为REGγ高表达的相关疾病的诊断与治疗提供有效工具。
Preparation and application of a monoclonal antibody against the end region of reg \u03b3 C
【技术实现步骤摘要】
一种抗REGγC末端区域的单克隆抗体及其制备和应用
本专利技术属于医药领域，具体涉及一种抗REGγC末端区域的单克隆抗体及其制备方法和应用。
技术介绍
REGγ，又名11Sγ、PA28γ、PSME3或Ki(GeneID：10197)，是11S蛋白酶体激活因子家族成员之一，最初是在系统性红斑狼疮病人的血清中发现的，并命名为Ki抗原，但其与系统性红斑狼疮病人的关系至今依旧没有十分明确。之后发现Ki抗原与REGα和REGβ一样，属于11S蛋白酶体激活因子家族成员，因其是在REGα和REGβ之后发现的，所以被命名为REGγ。REGγ作为蛋白酶体激活因子，通过与20S核心颗粒的α亚基结合，打开20S门控，将底物蛋白送入20S的β亚基蛋白酶催化位点处，将底物蛋白降解。REGγ-20S蛋白质降解系统对底物蛋白降解的过程不需要泛素化和ATP的参与，是一个泛素和ATP非依赖的蛋白质降解系统。REGγ-20S蛋白质降解系统通过降解一些具有重要生物学功能的蛋白质来调控一系列生理生化过程。例如，通过降解肿瘤抑制因子等调控肿瘤的发生发展；通过促进p53的降解来促进柯萨奇病毒复制以增强其感染效力，调控心肌炎和扩张性心肌症；通过降解酪蛋白激酶1δ(CK1δ)抑制CK1δ-MDM2-p53通路，从而促进衰老；通过降解沉默信息调节因子1(SriT1)抑制细胞自噬并调控肝脏的脂质代谢；通过降解蛋白激酶A(PKA)调控FoxO1的活性，促进VCAM1诱导的血管新生。近期研究发现，REGγ还可以通过降解核因子κB抑制因子ε(IκBε)调控核因子κB(NFκB)信号通路的活性，从而促进炎性相关的结肠癌及实验性肠炎的发生等。除了通过蛋白酶体激活作用降解蛋白质行使功能以外，REGγ还可以不依赖蛋白酶体激活作用而调控生命活动。例如REGγ可以作用于早幼粒细胞白血病蛋白(PML)，使其在核小体中大量积累，从而调节PML核小体的数量；REGγ在有丝分裂的不同时期，胞内分布不同，对于维持细胞中心粒和染色体的稳定具有一定的作用；对于DNA的损伤应答，作为ATM蛋白的靶向蛋白，REGγ可以聚集在DNA的损伤位点处，介导蛋白酶体的累积，从而降解损伤相关的蛋白质。近年来，对于REGγ与癌症之间关系的科学研究工作正在蓬勃发展。然而在过去相当长的一段时间以来，科学界普遍认为REGγ仅能降解短肽链，不能降解细胞内完整的蛋白质，直至2006年，XiaotaoLi等发现REGγ通过泛素和ATP非依赖的方式降解了细胞内的第一个完整蛋白——甾体类受体共激活因子-3(SRC-3)。SRC-3是转录共激活因子SRC家族成员之一，是已知的促癌因子，在多种癌症中均有较高水平的表达，如卵巢癌、前列腺癌、乳腺癌、胃癌和胰腺癌等。因此，REGγ对于SRC-3的降解作用的发现，也暗示了REGγ与肿瘤的发生发展关系密切。紧接着，有研究发现REGγ可以通过降解p21、p16、p19及p14等细胞周期素依赖激酶抑制因子来调控细胞周期和细胞凋亡，这些细胞周期素抑制因子的缺失可以诱导正常细胞转变为癌细胞，从而导致癌症的发生。同时，REGγ还可以通过与p53和MDM2的结合促进p53的泛素化降解，p53是目前研究相对深入的一个肿瘤抑制因子，具有加速细胞凋亡和抑制肿瘤发生的生物学功能。这些证据更加证实了REGγ对于癌症的发生具有重要的调控作用。此后，对人及小鼠的肿瘤组织中REGγ表达水平的研究发现，REGγ在肺癌、结肠癌、甲状腺癌及肝癌中均有较高水平的表达，这些发现印证了REGγ与癌症之间存在的重要联系，使REGγ成为了一个潜在的癌症标签，也为REGγ调控癌症的深入研究指明了方向。而后，一些与癌症发生发展相关的靶蛋白相继被发现，例如糖原合成酶激酶3(GSK3β)，是一种丝氨酸/苏氨酸激酶，除调控糖原合成外，还具有调控众多信号蛋白和转录因子的功能，调控细胞分化、增殖、存活及凋亡，对癌症的发生具有一定的抑制作用。最新的研究发现，REGγ通过降解GSK3β，上调β-catenin的表达水平，促进Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因CyclinD1和c-Myc的表达，从而促进皮肤癌的发生。这些研究结果皆表明，REGγ在细胞活动和人类疾病中发挥着非常重要的调控作用，是一个潜在的癌症等疾病诊断和治疗的潜在靶点，因此，对于REGγ蛋白及其表达水平的判定，将为癌症等疾病的诊断和治疗提供一定的科学依据。目前，市面上出现的REGγ抗体均为多克隆抗体，存在多种亚型，可以识别多个抗原表位，相较于单克隆抗体，其特异性较差，在进行免疫检测时，容易造成背景，例如蛋白质印迹实验(WesternBlot)中出现的杂带或免疫组织化学(IHC)中背景染色较深等现象。并且市面上出现的REGγ抗体批次不一、稳定性相差较大，不利于长期研究使用。
技术实现思路
本专利技术提供了一种如SEQIDNO：1所示的氨基酸序列在作为以REGγ为靶点的相关疾病的标志物中的应用。本专利技术还提供了如SEQIDNO：1所示的氨基酸序列在制备诊断、预防和/或治疗以REGγ为靶点的相关疾病的产品中的应用。其中，所述以REGγ为靶点的相关疾病包括结肠癌、肺癌、肝癌、实验性肠炎、皮肤癌、乳腺癌、卵巢癌、胃癌、前列腺癌、胰腺癌、甲状腺癌、早幼粒白血病、心肌炎、扩张性心肌症等。本专利技术还提供了一种抗REGγC末端区域的单克隆抗体。其中，所述抗REGγC末端区域的单克隆抗体识别的抗原氨基酸序列如SEQIDNO：1所示；编码基因序列如SEQIDNO：2所示，GeneID：10197。其中，所述单克隆抗体是由保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编：100101，保藏日期为：2018年11月14日，保藏编号为CGMCC：No.16809的杂交瘤细胞Mc-IgG-REGγ-C分泌的抗REGγC末端区域的单克隆抗体，或是与所述抗REGγC末端区域的单克隆抗体具有同等结合活性的单克隆抗体。其中，所述单克隆抗体为分子量为55kDa的小鼠血清免疫球蛋白G，所述单克隆抗体识别抗原决定簇的位置位于所述免疫球蛋白G的重链上。其中，所述单克隆抗体可与REGγ抗原相结合；具体地，所述单克隆抗体可与REGγC末端的13个氨基酸序列IIKRPRSSNAETLYY(SEQIDNO：1)相结合。本专利技术还提供了一种利用REGγC末端的SEQIDNO：1所示的13个氨基酸序列IIKRPRSSNAETLYY的单克隆抗体。本专利技术还提供了一种如上所述的抗REGγC末端区域的单克隆抗体所识别的抗原决定簇的氨基酸序列，其中，所述氨基酸序列为IIKRPRSSNAETLYY。本专利技术还提供了一种细胞系，其表达、分泌如上所述的抗REGγC末端区域的单克隆抗体。其中，所述细胞系为哺乳动物细胞系。其中，所述细胞系为杂交瘤细胞。本专利技术还提供了一种杂交瘤细胞株Mc-IgG-REGγ-C，其特征在于，所述杂交瘤细胞株Mc-IgG-REGγ-C保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列在作为以REGγ为靶点的相关疾病的标志物中的应用。/n
【技术特征摘要】
20181122 CN 20181139451251.如SEQIDNO：1所示的氨基酸序列在作为以REGγ为靶点的相关疾病的标志物中的应用。
2.如SEQIDNO：1所示的氨基酸序列在制备诊断、预防和/或治疗以REGγ为靶点的相关疾病的产品中的应用。
3.一种抗REGγC末端区域的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体识别的抗原氨基酸序列如SEQIDNO：1所示，编码基因序列如SEQIDNO：2所示，GeneID：10197。
4.一种抗REGγC末端区域的单克隆抗体，其特征在于：所述单克隆抗体是由保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编：100101，保藏日期为2018年11月14日，保藏编号为CGMCC：No.16809的杂交瘤细胞Mc-IgG-REGγ-C分泌的抗REGγC末端区域的单克隆抗体，或是与所述抗REGγC末端区域的单克隆抗体具有同等结合活性的单克隆抗体。
5.如权利要求3或4所述的抗REGγC末端区域的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体识别的抗原决定簇位于分子量为55kDa的免疫球蛋白G的重链上。
6.如权利要求3或4所述的抗REGγC末端区域的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体与REGγ抗原相结合。
7.如权利要求3或4所述的抗REGγC末端区域的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体识别REGγC末端的13个氨基酸序列IIKRPRSSNAETLYY。
8.一种利用如SEQIDNO：1所示的氨基酸序列的单克隆抗体。
9.一种细胞系，其特征在于，其表达、分泌如权利要求3或4所述的抗REGγC末端区域的单克隆抗体。
10.如权利要求9所述的细胞系，其特征在于，所述细胞系为哺乳动物细胞系。
11.如权利要求9所述的细胞系，其特征在于，所述细胞系为融合瘤细胞。
12.一种杂交瘤细胞株Mc-IgG-REGγ-C，其特征在于，所述杂交瘤细胞株Mc-IgG-...
【专利技术属性】
技术研发人员：李晓涛，童璐，夏艳阳，黄婷妹，李磊，
申请(专利权)人：华东师范大学，
类型：发明
国别省市：上海;31
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