一种磁微粒化学发光法醛固酮测定试剂盒及使用方法技术

本发明专利技术公开了医疗器械生物类免疫体外诊断相关技术领域，特别涉及一种磁微粒化学发光法醛固酮测定试剂盒及使用方法；包括相互独立包装的磁分离试剂、生物素化醛固酮抗体、碱性磷酸酶标记醛固酮抗原、校准品和质控品；整个反应体系避免了放射性污染，延长了试剂效期，简化了实验操作流程；亲和素与生物素间的结合具有极高的亲和力，其反应呈高度专一性，在提高灵敏度的同时，并不增加非特异性干扰；结合特性不会因反应试剂的高度稀释而受影响，使其在实际应用中可最大限度地降低反应试剂的非特异作用。

A kit for the determination of aldosterone by magnetic particle chemiluminescence and its application

【技术实现步骤摘要】
一种磁微粒化学发光法醛固酮测定试剂盒及使用方法
本专利技术涉及医疗器械生物类免疫体外诊断相关
，特别涉及一种磁微粒化学发光法醛固酮测定试剂盒及使用方法。
技术介绍
醛固酮是是人体内调节血容量的激素，通过调节肾脏对钠的重吸收，维持水平衡。醛固酮是调节细胞外液容量和电解质的激素，醛固酮的分泌，是通过醛固酮一血管紧张素系统实现的。当细胞外液容量下降时，刺激肾小球旁细胞分泌醛固酮，激活醛固酮-血管紧张素-醛固酮系统、醛固酮分泌增加，使肾脏重吸收钠增加，进而引起水重吸收增加，细胞外液容量增多；相反细胞外液容量增多时，通过上述相反的机制，使醛固酮分泌减少，肾重吸收钠水减少，细胞外液容量下降。血钠降低，血钾升高同样刺激肾上腺皮质，使醛固酮分泌增加。醛固酮增高多见于：原发性醛固酮增多症，假性醛固酮增多症(双侧肾上腺球状带增生)，利尿剂、心衰、肝硬变、肾衰、肾病综合征等所致的继发性醛固酮增多症，原发性周期性水肿，Bartter氏综合征，肾球旁器增生，手术后，低血容量，各种原因所致的低钾血症，部分恶性高血压及缓进型高血压等。醛固酮降低多见于：肾上腺皮质功能减退，低醛固酮低醛固酮综合征，18－羟化酶缺乏，糖尿病，Turner氏综合征，急性乙醇中毒等。因此，研发一种操作简便，反应灵敏度高的醛固酮检测产品，对现有技术有着重要的作用。
技术实现思路
针对现有技术存在的需要一种操作简便，反应灵敏度高的醛固酮检测产品的技术问题，本专利技术提供一种磁微粒化学发光法醛固酮测定试剂盒及使用方法。为实现上述目的，本专利技术的技术方案为：一种磁微粒化学发光法醛固酮测定试剂盒，包括相互独立包装的磁分离试剂、生物素化醛固酮抗体、碱性磷酸酶标记醛固酮抗原、校准品和质控品；A、所述生物素化醛固酮抗体通过包括以下步骤的操作制备而成：Sa1：准确称量0.3～0.5mg生物素-NHS并用DMSO溶解至终浓度为4.5～5.5mg/ml，制得生物素-NHS的DMSO溶液；Sa2：准确称量0.9～1.1mg醛固酮抗体并加入所述生物素-NHS的DMSO溶液中，充分混匀后室温反应1.5～2.5h；Sa3：用透析袋对Sa2中反应产物进行透析处理；Sa4：用抗试剂缓冲液将Sa3制得的混合物稀释至0.45～0.55μg/ml即得；所述抗试剂缓冲液为pH值为5～6的PBS体系；所述抗试剂缓冲液包括纯化水1L、Na2PO3H·12H2O10～20g、NaPO3H2·12H2O1～2g、绵羊血清1～5g、新生牛血清3～10g和马血清1～5g；B、所述碱性磷酸酶标记醛固酮抗原通过包括以下步骤的操作制备而成：Sb1：将检测醛固酮抗原进行透析处理后用2-IT进行活化；Sb2：将碱磷酶用SMCC进行活化；Sb3：将活化后的所述检测醛固酮抗原和所述碱磷酶混合后在2～8℃反应16～20h；Sb4：将Sb3制备的反应物用层析柱进行纯化，收集I峰II峰并混合，制得抗原-碱磷酶；Sb5：用抗试剂缓冲液将所述抗原-碱磷酶稀释至0.09～0.11μg/ml即得；C、所述校准品和所述质控品的成分相同，且均通过包括用醛固酮校准品缓冲液将待检抗原稀释的操作制备而成。优选的，醛固酮抗体为鼠单克隆抗体。优选的，所述醛固酮抗体与所述生物素-NHS的摩尔比为1：20；其中，醛固酮抗体的分子量以1500000计，生物素-NHS的分子量以587计。优选的，Sa3中所述透析袋的截留分子量为500。优选的，Sa3中透析处理所用的透析缓冲液为pH为7.5的0.15M的PBS缓冲液。优选的，Sb1中透析处理所用的透析缓冲液为0.1M的PBS缓冲液。优选的，所述醛固酮校准品缓冲液通过向0.05M的PH为7.4的TRIS缓冲液中加入牛血清白蛋白和防腐剂制备而成，所述醛固酮校准品缓冲液中所述牛血清白蛋白的体积百分比为0.5％，所述防腐剂的体积百分比为0.2％。优选的，所述待检抗原稀释的最终浓度为0pg/ml、50pg/ml、250pg/ml、500pg/ml、1000pg/ml和2000pg/ml。优选的，所述磁分离试剂为链霉亲和素磁珠。一种上述任一项所述的磁微粒化学发光法醛固酮测定试剂盒的使用方法，包括以下步骤：Sd1：准确称取待检测样本30μl、所述生物素化醛固酮抗体30μl和所述碱性磷酸酶标记醛固酮抗原30μl充分混合并孵育15min；Sd2：向Sd1制得的反应物中加入所述磁分离试剂30μl充分混合并孵育5min；Sd3：对Sd2制得的反应物磁分离2min，去除上清保留底物；Sd4：对所述底物洗涤3次，每次用300μl洗液；Sd5：用200μl所述醛固酮校准品缓冲液将所述底物稀释后测值。本专利技术具有如下优点：1.整个反应体系避免了放射性污染，延长了试剂效期，简化了实验操作流程；2.亲和素与生物素间的结合具有极高的亲和力，其反应呈高度专一性，在提高灵敏度的同时，并不增加非特异性干扰；3.结合特性不会因反应试剂的高度稀释而受影响，使其在实际应用中可最大限度地降低反应试剂的非特异作用。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为体系1曲线拟合；图2为体系2曲线拟合。具体实施方式下面结合附图对本专利技术的具体实施方式作进一步说明。在此需要说明的是，对于这些实施方式的说明用于帮助理解本专利技术，但并不构成对本专利技术的限定。此外，在以下说明中，省略了对公知结构、技术及操作的描述，以避免不必要地混淆本专利技术的概念。另外，下面所描述的本专利技术各个实施方式中所涉及的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。本专利技术中，未特别注明单位的比例与含量，固体组分为质量比例与含量，液体组分为体积比例与含量。实施例1一种磁微粒化学发光法醛固酮测定试剂盒，包括相互独立包装的链霉亲和素磁珠、生物素化醛固酮抗体、碱性磷酸酶标记醛固酮抗原、校准品和质控品；A、生物素化醛固酮抗体通过包括以下步骤的操作制备而成：Sa1：准确称量0.3mg生物素-NHS并用DMSO溶解至终浓度为4.5mg/ml，制得生物素-NHS的DMSO溶液；Sa2：准确称量0.9mg鼠单克隆醛固酮抗体并加入生物素-NHS的DMSO溶液中，其中，充分混匀后室温反应1.5h；Sa3：用截留分子量为500的透析袋，以及pH为7.5的0.15M的PBS缓冲液充当的透析缓冲液对Sa2中反应产物进行透析处理；Sa4：用抗试剂缓冲液将Sa3制得的混合物稀释至0.45μg/ml即得；B、碱性磷酸酶标记醛固酮抗原通本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种磁微粒化学发光法醛固酮测定试剂盒，其特征在于：包括相互独立包装的磁分离试剂、生物素化醛固酮抗体、碱性磷酸酶标记醛固酮抗原、校准品和质控品；/nA、所述生物素化醛固酮抗体通过包括以下步骤的操作制备而成：/nSa1：准确称量0.3～0.5mg生物素-NHS并用DMSO溶解至终浓度为4.5～5.5mg/ml，制得生物素-NHS的DMSO溶液；/nSa2：准确称量0.9～1.1mg醛固酮抗体并加入所述生物素-NHS的DMSO溶液中，充分混匀后室温反应1.5～2.5h；/nSa3：用透析袋对Sa2中反应产物进行透析处理；/nSa4：用抗试剂缓冲液将Sa3制得的混合物稀释至0.45～0.55μg/ml即得；/nB、所述碱性磷酸酶标记醛固酮抗原通过包括以下步骤的操作制备而成：/nSb1：将检测醛固酮抗原进行透析处理后用2-IT进行活化；/nSb2：将碱磷酶用SMCC进行活化；/nSb3：将活化后的所述检测醛固酮抗原和所述碱磷酶混合后在2～8℃反应16～20h；/nSb4：将Sb3制备的反应物用层析柱进行纯化，收集I峰II峰并混合，制得抗原-碱磷酶；/nSb5：用抗试剂缓冲液将所述抗原-碱磷酶稀释至0.09～0.11μg/ml即得；/nC、所述校准品和所述质控品的成分相同，且均通过包括用醛固酮校准品缓冲液将待检抗原稀释的操作制备而成。/n...

【技术特征摘要】
1.一种磁微粒化学发光法醛固酮测定试剂盒，其特征在于：包括相互独立包装的磁分离试剂、生物素化醛固酮抗体、碱性磷酸酶标记醛固酮抗原、校准品和质控品；
A、所述生物素化醛固酮抗体通过包括以下步骤的操作制备而成：
Sa1：准确称量0.3～0.5mg生物素-NHS并用DMSO溶解至终浓度为4.5～5.5mg/ml，制得生物素-NHS的DMSO溶液；
Sa2：准确称量0.9～1.1mg醛固酮抗体并加入所述生物素-NHS的DMSO溶液中，充分混匀后室温反应1.5～2.5h；
Sa3：用透析袋对Sa2中反应产物进行透析处理；
Sa4：用抗试剂缓冲液将Sa3制得的混合物稀释至0.45～0.55μg/ml即得；
B、所述碱性磷酸酶标记醛固酮抗原通过包括以下步骤的操作制备而成：
Sb1：将检测醛固酮抗原进行透析处理后用2-IT进行活化；
Sb2：将碱磷酶用SMCC进行活化；
Sb3：将活化后的所述检测醛固酮抗原和所述碱磷酶混合后在2～8℃反应16～20h；
Sb4：将Sb3制备的反应物用层析柱进行纯化，收集I峰II峰并混合，制得抗原-碱磷酶；
Sb5：用抗试剂缓冲液将所述抗原-碱磷酶稀释至0.09～0.11μg/ml即得；
C、所述校准品和所述质控品的成分相同，且均通过包括用醛固酮校准品缓冲液将待检抗原稀释的操作制备而成。


2.根据权利要求1所述的磁微粒化学发光法醛固酮测定试剂盒，其特征在于：醛固酮抗体为鼠单克隆抗体。


3.根据权利要求1所述的磁微粒化学发光法醛固酮测定试剂盒，其特征在于：所述醛固酮抗体与所述生物素-NHS的摩尔比为1：20。


4.根据权利要求1所述的磁微粒化学发光法醛固酮测定试剂盒，其特征在于：Sa3...

【专利技术属性】
技术研发人员：李婷婷，程义壮，刘振世，
申请(专利权)人：江苏泽成生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32