一种阴道毛滴虫量子点荧光免疫检测方法技术

本发明专利技术公开了一种阴道毛滴虫量子点荧光免疫检测方法，采用量子点偶联阴道毛滴虫抗体，实现了对阴道毛滴虫的特异性检测，大大提高了阴道毛滴虫检出率、准确率；示踪物量子点具有激发光谱宽、发射光谱窄的特点，可实现在荧光显微镜下直接观察，降低了对检测人员的操作技能及实验室检测仪器的要求；同时量子点荧光效率高，荧光强度强，稳定性好，抗漂白能力强，可经受多次，激发而不易发生荧光淬灭，即已染色的标本可以长期保存，可疑结果可以多次阅片。

A quantum dot fluorescence immunoassay for Trichomonas vaginalis

【技术实现步骤摘要】
一种阴道毛滴虫量子点荧光免疫检测方法
本专利技术涉及医学生物领域，具体是一种阴道毛滴虫量子点荧光免疫检测方法。
技术介绍
阴道毛滴虫是寄生在人体阴道和泌尿道的鞭毛虫，主要引起滴虫性阴道炎和尿道炎，是以性传播为主的一种传染病。毛滴虫不但寄生于缺氧的阴道内，并可侵入尿道和尿道旁腺，甚至于上行至输尿管及肾盂。最适宜于毛滴虫生长的pH值是5.5～6，如pH为5以下或7.5以上则毛滴虫的生长会受到抑制，毛滴虫可引起阴道滴虫病，主要检测方法为悬滴法、涂片染色法、培养法等。目前临床常用的阴道毛滴虫检测方法有悬滴法、吖啶橙荧光染色法、阴道毛滴虫分离培养法等，以上方法阳性率低、耗时、不易检出，临床使用不方便。因此，有必要提供一种高特异性、高灵敏度的阴道毛滴虫量子点荧光免疫检测技术，以期解决现有技术中的不足。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种阴道毛滴虫量子点荧光免疫检测方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种阴道毛滴虫量子点荧光免疫检测方法，包括阴道毛滴虫量子点荧光探针的制备方法及使用方法：一种阴道毛滴虫量子点荧光探针的制备方法，包括如下步骤：（1）采用EDC偶联法标记抗体，将量子点溶液和EDC溶液按照按1:10比例混合，并常温避光搅拌活化之；（2）加入过量阴道毛滴虫标记抗体，调整反应pH值为6，避光反应1小时；（3）将反应液进行超滤，在10000rpm下离心20分钟，吸出超滤后的标记抗体，用含20mMTris、15%蔗糖、1%BSA，pH7.5的溶液复溶至原体积，即为制备好的量子点标记抗体。一种阴道毛滴虫量子点荧光探针的使用方法，包括如下步骤：（1）挑取样本在载玻片上制成涂片，用无水乙醇固定；（2）将载玻片标本放于水平位置，加10ul制备好的量子点标记抗体完全覆于标本上；（3）置温育盒37℃孵育30分钟，蒸馏水缓缓全覆盖洗涤3遍；（4）用荧光显微镜100倍油镜下观察。作为本专利技术进一步的方案：一种阴道毛滴虫量子点荧光探针的制备方法，包括如下步骤：（1）采用EDC偶联法标记抗体，将量子点溶液和EDC溶液按照按3:20比例混合，并常温避光搅拌活化之；（2）加入过量阴道毛滴虫标记抗体，调整反应pH值为7，避光反应1小时；（3）将反应液进行超滤，在10000rpm下离心20分钟，吸出超滤后的标记抗体，用含20mMTris、15%蔗糖、1%BSA，pH8.0的溶液复溶至原体积，即为制备好的量子点标记抗体。作为本专利技术进一步的方案：一种阴道毛滴虫量子点荧光探针的制备方法，包括如下步骤：（1）采用EDC偶联法标记抗体，将量子点溶液和EDC溶液按照按1:5比例混合，并常温避光搅拌活化之；（2）加入过量阴道毛滴虫标记抗体，调整反应pH值为8，避光反应1小时；（3）将反应液进行超滤，在10000rpm下离心20分钟，吸出超滤后的标记抗体，用含20mMTris、15%蔗糖、1%BSA，pH8.5的溶液复溶至原体积，即为制备好的量子点标记抗体。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本技术方案中用量子点偶联阴道毛滴虫抗体，实现了对阴道毛滴虫的特异性检测，大大提高了阴道毛滴虫检出率、准确率；示踪物量子点具有激发光谱宽、发射光谱窄的特点，可实现在荧光显微镜下直接观察，降低了对检测人员的操作技能及实验室检测仪器的要求；同时量子点荧光效率高，荧光强度强，稳定性好，抗漂白能力强，可经受多次，激发而不易发生荧光淬灭，即已染色的标本可以长期保存，可疑结果可以多次阅片。具体实施方式实施例1一种阴道毛滴虫量子点荧光免疫检测方法，包括阴道毛滴虫量子点荧光探针的制备方法及使用方法：一种阴道毛滴虫量子点荧光探针的制备方法，包括如下步骤：（1）采用EDC偶联法标记抗体，将量子点溶液和EDC溶液按照按1:10比例混合，并常温避光搅拌活化之；（2）加入过量阴道毛滴虫标记抗体，调整反应pH值为6，避光反应1小时；（3）将反应液进行超滤，在10000rpm下离心20分钟，吸出超滤后的标记抗体，用含20mMTris、15%蔗糖、1%BSA，pH7.5的溶液复溶至原体积，即为制备好的量子点标记抗体。一种阴道毛滴虫量子点荧光探针的使用方法，包括如下步骤：（1）挑取样本在载玻片上制成涂片，用无水乙醇固定；（2）将载玻片标本放于水平位置，加10ul制备好的量子点标记抗体完全覆于标本上；（3）置温育盒37℃孵育30分钟，蒸馏水缓缓全覆盖洗涤3遍；（4）用荧光显微镜100倍油镜下观察。实施例2一种阴道毛滴虫量子点荧光免疫检测方法，包括阴道毛滴虫量子点荧光探针的制备方法及使用方法：一种阴道毛滴虫量子点荧光探针的制备方法，包括如下步骤：（1）采用EDC偶联法标记抗体，将量子点溶液和EDC溶液按照按3:20比例混合，并常温避光搅拌活化之；（2）加入过量阴道毛滴虫标记抗体，调整反应pH值为7，避光反应1小时；（3）将反应液进行超滤，在10000rpm下离心20分钟，吸出超滤后的标记抗体，用含20mMTris、15%蔗糖、1%BSA，pH8.0的溶液复溶至原体积，即为制备好的量子点标记抗体。一种阴道毛滴虫量子点荧光探针的使用方法，包括如下步骤：（1）挑取样本在载玻片上制成涂片，用无水乙醇固定；（2）将载玻片标本放于水平位置，加10ul制备好的量子点标记抗体完全覆于标本上；（3）置温育盒37℃孵育30分钟，蒸馏水缓缓全覆盖洗涤3遍；（4）用荧光显微镜100倍油镜下观察。实施例3一种阴道毛滴虫量子点荧光免疫检测方法，包括阴道毛滴虫量子点荧光探针的制备方法及使用方法：一种阴道毛滴虫量子点荧光探针的制备方法，包括如下步骤：（1）采用EDC偶联法标记抗体，将量子点溶液和EDC溶液按照按1:5比例混合，并常温避光搅拌活化之；（2）加入过量阴道毛滴虫标记抗体，调整反应pH值为8，避光反应1小时；（3）将反应液进行超滤，在10000rpm下离心20分钟，吸出超滤后的标记抗体，用含20mMTris、15%蔗糖、1%BSA，pH8.5的溶液复溶至原体积，即为制备好的量子点标记抗体。一种阴道毛滴虫量子点荧光探针的使用方法，包括如下步骤：（1）挑取样本在载玻片上制成涂片，用无水乙醇固定；（2）将载玻片标本放于水平位置，加10ul制备好的量子点标记抗体完全覆于标本上；（3）置温育盒37℃孵育30分钟，蒸馏水缓缓全覆盖洗涤3遍；（4）用荧光显微镜100倍油镜下观察。本需要特别说明的是，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种阴道毛滴虫量子点荧光免疫检测方法，包括阴道毛滴虫量子点荧光探针的制备方法及使用方法，其特征在于，/n一种阴道毛滴虫量子点荧光探针的制备方法，包括如下步骤：/n（1）采用EDC偶联法标记抗体，将量子点溶液和EDC溶液按照按1:10比例混合，并常温避光搅拌活化之；/n（2）加入过量阴道毛滴虫标记抗体，调整反应pH值为6，避光反应1小时；/n（3）将反应液进行超滤，在10000rpm下离心20分钟，吸出超滤后的标记抗体，用含20mMTris、15%蔗糖、1%BSA，pH7.5的溶液复溶至原体积，即为制备好的量子点标记抗体。/n一种阴道毛滴虫量子点荧光探针的使用方法，包括如下步骤：/n（1）挑取样本在载玻片上制成涂片，用无水乙醇固定；/n（2）将载玻片标本放于水平位置，加10ul制备好的量子点标记抗体完全覆于标本上；/n（3）置温育盒37℃孵育30分钟，蒸馏水缓缓全覆盖洗涤3遍；/n（4）用荧光显微镜100倍油镜下观察。/n

【技术特征摘要】
1.一种阴道毛滴虫量子点荧光免疫检测方法，包括阴道毛滴虫量子点荧光探针的制备方法及使用方法，其特征在于，
一种阴道毛滴虫量子点荧光探针的制备方法，包括如下步骤：
（1）采用EDC偶联法标记抗体，将量子点溶液和EDC溶液按照按1:10比例混合，并常温避光搅拌活化之；
（2）加入过量阴道毛滴虫标记抗体，调整反应pH值为6，避光反应1小时；
（3）将反应液进行超滤，在10000rpm下离心20分钟，吸出超滤后的标记抗体，用含20mMTris、15%蔗糖、1%BSA，pH7.5的溶液复溶至原体积，即为制备好的量子点标记抗体。
一种阴道毛滴虫量子点荧光探针的使用方法，包括如下步骤：
（1）挑取样本在载玻片上制成涂片，用无水乙醇固定；
（2）将载玻片标本放于水平位置，加10ul制备好的量子点标记抗体完全覆于标本上；
（3）置温育盒37℃孵育30分钟，蒸馏水缓缓全覆盖洗涤3遍；
（4）用荧光显微镜100倍油镜下观察。


2.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：李万寿，
申请(专利权)人：济南德亨医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37