一种超高效液相色谱串联质谱法检测血清中5种脂溶性维生素的试剂盒制造技术

技术编号:24329284 阅读:43 留言:0更新日期:2020-05-29 19:04
一种超高效液相色谱串联质谱法检测血清中5种脂溶性维生素的试剂盒,所述的维生素包括VA、VD2、VD3、VE和VK1;所述试剂盒包括如下试剂分别包括电解质浓缩液A、电解质浓缩液B、标准品母液、内标液、萃取液和质控品QC(L)、QC(M)、QC(H);本发明专利技术试剂盒与现有技术相比具有如下优势:灵敏度高、特异性强、准确且前处理过程较简单,6min之内可完成化合物的分离和检测,基质效应与精密度基本满足要求,可用于临床上血清中VA、VD2、VD3、VE和VK1的定量分析,为临床上维生素缺乏的健康评估提供一种可靠的检测方法。

【技术实现步骤摘要】
一种超高效液相色谱串联质谱法检测血清中5种脂溶性维生素的试剂盒
本专利技术属于分析检测
,更具体的是涉及一种超高效液相色谱串联质谱法检测血清中5种脂溶性维生素的试剂盒。
技术介绍
维生素(Vitamin)是维持人和动物正常生理功能的重要物质,这类物质必须从食物中获得,在人类的生长发育和代谢中发挥着重要的作用。机体缺乏维生素会引起各种代谢障碍,甚至引发疾病,这类疾病被统称为维生素缺乏症。维生素分为水溶性维生素和脂溶性维生素两大类,本专利中涉及到的维生素为脂溶性维生素,包括维生素A,D,E,K1。维生素A在视网膜的功能(适应昏暗的光线)中起着至关重要的作用,是上皮组织生长和分化、骨骼生长、生殖和胚胎发育所必需的。维生素A与某些类胡萝卜素一起增强免疫功能。眼睛和皮肤的退行性变化在维生素A缺乏症中很常见。严重或长期缺乏会导致干眼症、角膜溃疡、瘢痕和失明,摄入不足还可能导致免疫力低下。过量的维生素A是有毒的,临床表现多种多样,包括皮肤干燥、唇裂、舌炎、呕吐、脱发、骨质疏松和疼痛、高钙血症、淋巴结肿大、高脂血症、闭经,以及颅内压增高、乳头水肿的大脑假瘤的特征。伴有门脉高压的肝纤维化也可能发生。孕妇服用维生素A过量可能会引起胎儿先天性畸形,如自然流产,颅面畸形,和心脏瓣膜疾病。维生素D在体内的主要存在形式为25-OH维生素D,其中25-OHVD2和25-OHVD3与健康密切相关,缺乏维生素D可能会引起儿童佝偻病,还可能会影响机体的神经、肌肉、造血及免疫等组织器官的功能。维生素E又被称为生育酚,作为抗氧化剂和自由基清除剂,保护所有细胞生物膜中不饱和脂肪的完整性,保护视黄醇(维生素A)不受氧化破坏。维生素E可以促进内皮细胞中前列环素的形成,并抑制血栓细胞中血栓烷类的形成,从而减少血栓细胞在内皮细胞表面的聚集。儿童缺乏维生素E可导致可逆的运动和感觉神经病。维生素K1又称为凝血维生素,包括K1、K2、K3、K4等几种形式,该专利中检测的为维生素K1,维生素K1在体内功能主要是促进凝血、生血,同时促进身体对钙、糖的吸收。目前,国内外有关血清和血浆中各种维生素的测定方法报道很多,测定维生素的方法有很多种,其中常见的方法有:层析法、分光光度法、气相色谱法、液相色谱法,在众多的方法中,液相色谱法或液相串联质谱法为测定维生素的首选方法,以往方法存在前处理复杂、干扰因素多、特异性差、分析时间长、灵敏度不高、定性定量准确性差且重现性较差的问题,迄今为止,尚未见到一种能够同时检测血液中多种脂溶性维生素的有效方法及试剂盒的报道。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种超高效液相色谱串联质谱法检测血清中5种脂溶性维生素的试剂盒。为解决上述技术问题,本专利技术采用的技术方案如下:一种超高效液相色谱串联质谱法检测血清中5种脂溶性维生素的试剂盒,所述的维生素包括维生素A(VA)、25-羟基维生素D2(VD2)、25-羟基维生素D3(VD3)、维生素E(VE)、维生素K1(VK1);所述试剂盒包括如下试剂:电解质浓缩液A:甲酸水溶液;电解质浓缩液B:甲酸铵水溶液;标准品母液:含VA、VD2、VD3、VE和VK1的甲醇溶液;内标液:含有VA、VD2、VD3、VE和VK1对应内标的甲醇溶液;萃取液:甲基叔丁基醚;质控品:含有VA、VD2、VD3、VE和VK1的空白血清基质溶液,分为低、中、高三个浓度,分别为QC(L)、QC(M)、QC(H)。测试时将血清样本与所有待测物的内标溶液混合,通过甲基叔丁基醚萃取液一步液-液萃取获得预处理血清,采用高效液相色谱串联质谱进行分离,用质谱检测目标物与其对应同位素内标的质荷比(m/z),使用同位素内标法定量,准确计算出5种脂溶性维生素的含量。优选地,质控品中VA、VD2、VD3、VE和VK1对应的QC(L)、QC(M)、QC(H)浓度见表1;表1质控品对应浓度(单位ng/mL)QC(L)QC(M)QC(H)VA80400800VD242040VD384080VE80040008000VK10.212优选地,所述的空白血清基质溶液为甲醇溶液。优选地,所述的标准品母液为含有40000ng/mLVA、4000ng/mLVD2、4000ng/mLVD3、400000ng/mLVE和200ng/mLVK1标准品的甲醇溶液。具体地,分别准确移取5mg/mLVA8μL、100μg/mLVD240μL、100μg/mLVD340μL、10mg/mLVE40μL、50μg/mLVK14μL至同一离心管中,然后加入868μL甲醇,涡旋均匀,得到标准品母液;优选地,所述的内标液为含有500ng/mLVA-IS、200ng/mLVD2-IS、200ng/mLVD3-IS、750ng/mLVE-IS和10ng/mLVK1-IS内标的甲醇溶液。具体地,分别准确移取100μg/mLVA-IS5μL、50μg/mLVD2-IS4μL、50μg/mLVD3-IS2μL、50μg/mLVE-IS5μL、2μg/mLVK1-IS5μL至同一离心管中,然后加入975μL甲醇,涡旋均匀,得到内标液;优选地,所述的血清为人或动物的血清。上述试剂盒的制备方法,包括:(1)电解质浓缩液A:取甲酸溶液1.5mL,加入超纯水1.5mL,涡旋5s,混匀得电解质浓缩液A;电解质浓缩液B:用电子天平称取9.460g甲酸铵置于50mlBD管中,加入超纯水至刻度线15mL,混合均匀并超声至完全溶解得电解质浓缩液B;(2)标准品母液:准确移取5mg/mLVA8μL、100μg/mLVD240μL、100μg/mLVD340μL、10mg/mLVE40μL、50μg/mLVK14μL至同一离心管中,然后加入868μL甲醇,涡旋均匀,得到标准品母液,浓度参表2:表2标准品母液溶液浓度(3)内标液:各内标的混合液,用甲醇溶液配制,所述的内标液按如下方法制备得到:分别准确移取100μg/mLVA-IS5μL、50μg/mLVD2-IS4μL、50μg/mLVD3-IS2μL、50μg/mLVE-IS5μL、2μg/mLVK1-IS5μL至同一离心管中,然后加入975μL甲醇,涡旋均匀,得到内标液,浓度参见表3:表3内标工作液浓度(4)萃取液:甲基叔丁基醚;(5)质控品:低浓度质控品:取步骤(2)中的标准品母液用含甲醇溶液稀释500倍(1:499);中浓度质控品:取步骤(2)中的标准品母液用甲醇溶液稀释100倍(1:99);高浓度质控品:本文档来自技高网
...

【技术保护点】
1.一种超高效液相色谱串联质谱法检测血清中5种脂溶性维生素的试剂盒,其特征在于,所述的维生素包括VA、VD2、VD3、VE和VK1;/n所述试剂盒包括如下试剂:/n电解质浓缩液A:甲酸水溶液/n电解质浓缩液B:甲酸铵水溶液;/n标准品母液:含VA、VD2、VD3、VE和VK1的甲醇溶液;/n内标液:含有VA、VD2、VD3、VE和VK1对应内标的甲醇溶液;/n萃取液:甲基叔丁基醚;/n质控品:含有VA、VD2、VD3、VE和VK1的空白血清基质溶液,分为低、中、高三个浓度,分别为QC(L)、QC(M)、QC(H)。/n

【技术特征摘要】
1.一种超高效液相色谱串联质谱法检测血清中5种脂溶性维生素的试剂盒,其特征在于,所述的维生素包括VA、VD2、VD3、VE和VK1;
所述试剂盒包括如下试剂:
电解质浓缩液A:甲酸水溶液
电解质浓缩液B:甲酸铵水溶液;
标准品母液:含VA、VD2、VD3、VE和VK1的甲醇溶液;
内标液:含有VA、VD2、VD3、VE和VK1对应内标的甲醇溶液;
萃取液:甲基叔丁基醚;
质控品:含有VA、VD2、VD3、VE和VK1的空白血清基质溶液,分为低、中、高三个浓度,分别为QC(L)、QC(M)、QC(H)。


2.根据权利要求1所述的一种超高效液相色谱串联质谱法检测血清中5种脂溶性维生素的试剂盒,其特征在于,质控品中VA、VD2、VD3、VE和VK1对应的QC(L)、QC(M)、QC(H)浓度见表1;
表1质控品对应浓度(单位ng/mL)











QC(L)
QC(M)
QC(H)


VA
80
400
800


VD2
4
20
40


VD3
8
40
80


VE
800
4000
8000


VK1
0.2
1
2








3.根据权利要求1所述的一种超高效液相色谱串联质谱法检测血清中5种脂溶性维生素的试剂盒,其特征在于,所述的空白血清基质溶液为甲醇溶液。


4.根据权利要求1所述的一种超高效液相色谱串联质谱法检测血清中5种脂溶性维生素的试剂盒,其特征在于,所述的标准品母液为含有40000ng/mLVA、4000ng/mLVD2、4000ng/mLVD3、400000ng/mLVE和200ng/mLVK1标准品的甲醇溶液。


5.根据权利要求1所述的一种超高效液相色谱串联质谱法检测血清中5种脂溶性维生素的试剂盒,其特征在于,所述的内标液为含有500ng/mLVA-IS、200ng/mLVD2-IS、200ng/mLVD3-IS、75...

【专利技术属性】
技术研发人员:成晓亮李美娟
申请(专利权)人:南京品生医学检验实验室有限公司
类型:发明
国别省市:江苏;32

网友询问留言 已有0条评论
  • 还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。

1