一种阿伐那非及其制剂中有关物质的分析方法技术

本发明专利技术公开了一种阿伐那非及其制剂中有关物质的测定方法。采用辛烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱，以磷酸盐缓冲液‑乙腈为流动相，梯度洗脱，采用二极管阵列检测器或紫外检测器。本发明专利技术提供的分析方法能够分离阿伐那非及其9个工艺杂质，降解杂质也能有效分离，空白溶剂不干扰测定。该方法使用普通的仪器设备及色谱柱，流动相简单易得，操作简便，灵敏度高，可较好的控制阿伐那非及其制剂的质量。

A method for the analysis of related substances in avanafil and its preparations

【技术实现步骤摘要】
一种阿伐那非及其制剂中有关物质的分析方法
本专利技术涉及一种阿伐那非及其制剂的有关物质检测方法，属于药物分析

技术介绍
阿伐那非(Avanafil)，化学名为4-[(3-氯-4-甲氧基苄基)氨基]-2-[2-(羟甲基)-1-吡咯烷基]-N-(2-嘧啶基甲基)-5-嘧啶甲酰胺，CAS号为330784-47-9。化学结构式如下：阿伐那非是由日本田边三菱制药株式会社授权美国Vivus公司开发的用于治疗男性勃起功能障碍(ED)的药物，于2012年4月27日经美国FDA批准上市，剂型为片剂(规格50mg、100mg和200mg)。该药物是一种口服速效的高选择性磷酸二酯酶-5(PDE-5)抑制剂。阿伐那非在合成过程中有可能引入起始原料、中间体、副产物等有关物质，在储藏过程中也有可能产生降解产物，因此需要对阿伐那非原料药及制剂的有关物质进行控制。阿伐那非及其制剂目前在国内还没有上市，其原料药及制剂的有关物质分析方法尚无文献报道，也无标准可供参考。专利CN201510097960.9报道，用C18柱测定阿伐那非及其制剂的有关物质，仅鉴定了合成工艺中的3个已知杂质，在该条件下，本专利技术中的杂质1与杂质3不能分离。因此，建立一种专属性更强的有关物质分析方法十分必要。本专利技术通过对色谱条件的筛选，采用辛烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱，能够分离阿伐那非及其9个工艺杂质，降解杂质也能有效分离。本专利技术中的方法专属性强，灵敏度高，操作简便，可准确检测阿伐那非及其制剂的有关物质，保证了阿伐那非及其制剂的质量可控，对其后续的研发和生产具有重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种可行性高、操作简便的阿伐那非及其制剂有关物质的分析方法。本专利技术一种测定阿伐那非及其制剂中有关物质的高效液相色谱方法的实现包括以下步骤：(1)色谱条件：色谱柱：选用辛烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱。流动相：以磷酸盐缓冲液-乙腈为流动相，梯度洗脱。磷酸盐缓冲液中采用的缓冲盐为磷酸盐缓冲体系中的一种或多种。磷酸盐缓冲液中缓冲盐的浓度为0.005～0.03mol/L。磷酸盐缓冲液的pH值为5.0～7.0。流速为0.9～1.1ml/min。柱温为25～40℃。采用二极管阵列检测器或紫外检测器，检测波长为225～240nm。进样体积10～20μl。(2)系统适用性溶液：取阿伐那非、杂质1、杂质2及杂质3适量，制成每1ml约含阿伐那非、杂质1、杂质2及杂质3分别为50μg、0.5μg、0.5μg及0.5μg的溶液，作为系统适用性溶液。(3)供试品溶液的制备：取阿伐那非或其制剂适量，制成每1ml约含阿伐那非0.5～1mg的溶液，作为供试品溶液。(4)对照溶液的制备：量取上述(3)供试品溶液适量，稀释成每1ml中约含阿伐那非5～10μg的溶液，作为对照溶液。(5)测定方法：取系统适用性溶液、供试品溶液和对照溶液，分别注入高效液相色谱仪，供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液中的主峰面积(1.0％)。本专利技术的积极效果在于：(1)本专利技术提供的分析方法已完成方法学验证，包括专属性、供试品溶液稳定性、线性、精密度、检测限、定量限、杂质回收率、耐用性、重复性，可以广泛应用于阿伐那非及其制剂中有关物质的测定。(2)本专利技术提供的分析方法灵敏度高。经试验，最小检测量为0.25ng(S/N≧3)，最小检测浓度为25ng/ml，相当于有关物质供试品溶液浓度的0.0025％～0.005％。(3)本专利技术提供的分析方法专属性强，能够分离阿伐那非及其9个工艺杂质(包括起始原料1、起始原料2、中间体1、中间体2、中间体3、杂质1、杂质2、杂质3及杂质4)。进行了强制降解试验，降解杂质也能有效分离。(4)本专利技术提供的分析方法使用普通的仪器设备及色谱柱，流动相简单易得，操作过程简便，可行性高。附图说明图1实施例一的空白溶剂的高效液相色谱图图2实施例一的阿伐那非及其杂质混合溶液的高效液相色谱图图3实施例二的阿伐那非有关物质测定的高效液相色谱图图4实施例二的阿伐那非系统适用性溶液的高效液相色谱图图5实施例三的阿伐那非系统耐用性的高效液相色谱图图6实施例四的阿伐那非片空白辅料的高效液相色谱图图7实施例四的阿伐那非片有关物质测定的高效液相色谱图具体实施方式以下结合附图对本专利技术实施方式作进一步详细描述。实施例一仪器与色谱条件：高效液相色谱仪：Waterse2695，PDA检测器色谱柱：WatersC8，4.6mm*250mm，5μm流动相A：0.02mol/L磷酸盐缓冲液，流动相B：乙腈，梯度洗脱，梯度程序如下表：检测波长：235nm流速：1.0ml/min柱温：30℃进样体积：10μl实验步骤：取阿伐那非、起始原料1、起始原料2、中间体1、中间体2、中间体3、杂质1、杂质2、杂质3及杂质4适量，用甲醇溶解并稀释制成每1ml约含阿伐那非0.5mg、每1ml约含起始原料1、起始原料2、中间体1、中间体2、中间体3、杂质1、杂质2、杂质3及杂质4分别为15μg、15μg、15μg、15μg、15μg、0.5μg、0.5μg、0.5μg及2.5μg的混合溶液，分别精密量取空白溶剂甲醇及上述混合溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，空白溶剂及混合溶液的高效液相色谱图分别见图1及图2。结果：从图1可以看出，空白溶剂不干扰阿伐那非有关物质的测定。图2中，出峰顺序依次为起始原料2、中间体3、杂质2、阿伐那非、中间体1、杂质3、杂质1、中间体2、杂质4及起始原料1，从图中可以看出，阿伐那非峰形良好，且与各杂质分离良好。实施例二仪器与色谱条件：高效液相色谱仪：Waterse2695，PDA检测器色谱柱：WatersC8，4.6mm*250mm，5μm流动相A：0.02mol/L磷酸盐缓冲液，流动相B：乙腈，梯度洗脱，梯度程序如下表：检测波长：235nm流速：1.0ml/min柱温：30℃进样体积：10μl实验步骤：系统适用性溶液：取阿伐那非、杂质1、杂质2及杂质3适量，制成每1ml约含阿伐那非、杂质1、杂质2及杂质3分别为50μg、0.5μg、0.5μg及0.5μg的溶液，作为系统适用性溶液。取阿伐那非适量，精密称定，溶解并稀释制成每1ml约含阿伐那非0.5～1mg的溶液，作为供试品溶液。精密量取供试品溶液适量，稀释成每1ml中约含阿伐那非5～10μg的溶液，作为对照溶液。精密量取系统适用性溶液、供试品溶液和对照溶液各10μl注入高效液相色谱仪，记录色谱图，按自身对照法计算阿伐那非的有关物质，阿伐本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种测定阿伐那非及其制剂中有关物质的高效液相色谱方法，其特征在于包括以下步骤：/n(1)色谱条件：/n选用辛烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱，以磷酸盐缓冲液-乙腈为流动相，梯度洗脱，流速为0.9～1.1ml/min，柱温为25～40℃，采用二极管阵列检测器或紫外检测器，检测波长为225～240nm，进样体积10～20μl；/n(2)系统适用性溶液：/n取阿伐那非、杂质1、杂质2及杂质3适量，制成每1ml约含阿伐那非、杂质1、杂质2及杂质3分别为50μg、0.5μg、0.5μg及0.5μg的溶液，作为系统适用性溶液；/n(3)供试品溶液的制备：/n取阿伐那非或其制剂适量，制成每1ml约含阿伐那非0.5～1mg的溶液，作为供试品溶液；/n(4)对照溶液的制备：/n量取上述(3)供试品溶液适量，稀释成每1ml中约含阿伐那非5～10μg的溶液，作为对照溶液；/n(5)测定方法：/n取系统适用性溶液、供试品溶液和对照溶液，分别注入高效液相色谱仪，供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液中的主峰面积(1.0％)。/n

【技术特征摘要】
1.一种测定阿伐那非及其制剂中有关物质的高效液相色谱方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)色谱条件：
选用辛烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱，以磷酸盐缓冲液-乙腈为流动相，梯度洗脱，流速为0.9～1.1ml/min，柱温为25～40℃，采用二极管阵列检测器或紫外检测器，检测波长为225～240nm，进样体积10～20μl；
(2)系统适用性溶液：
取阿伐那非、杂质1、杂质2及杂质3适量，制成每1ml约含阿伐那非、杂质1、杂质2及杂质3分别为50μg、0.5μg、0.5μg及0.5μg的溶液，作为系统适用性溶液；
(3)供试品溶液的制备：
取阿伐那非或其制剂适量，制成每1ml约含阿伐那非0.5～1mg的溶液，作为供试品溶液；
(4)对照溶液的制备：
量取上述(3)供试品溶液适量，稀释成每1ml中约含阿伐那非5～10...

【专利技术属性】
技术研发人员：王帆，刘延新，杨琪，李帅，王业强，刘敏，廉贞霞，
申请(专利权)人：山东省药学科学院，
类型：发明
国别省市：山东;37