双去乙酰基比沙可啶和单去乙酰基比沙可啶的检测方法技术

本发明专利技术提供了一种双去乙酰基比沙可啶和单去乙酰基比沙可啶的检测方法，采用超高效液相色谱‑线性离子阱质谱法进行定性筛查、确证及含量测定。色谱条件：色谱柱：C18色谱柱；检测器：线性离子阱；流动相：A‑0.1%乙酸溶液、B‑0.1%乙酸‑甲醇；流速：0.2‑0.6 mL/min；柱温：25‑40℃；进样量：0.1‑5μL；洗脱梯度程序：0‑5 min，20%‑90%B；5‑6min，90%B；6.1‑7min，20%B。本发明专利技术方法可专属、灵敏、快速地初筛并确证减肥类中成药和保健食品中添加的双去乙酰基比沙可啶及单去乙酰基比沙可啶，主要适用于固体剂型的中成药及保健食品的分析。

Methods for the determination of double deacetylbisacordine and single deacetylbisacordine

【技术实现步骤摘要】
双去乙酰基比沙可啶和单去乙酰基比沙可啶的检测方法
本专利技术属于医药检测领域，涉及化学品的检测方法，具体涉及一种双去乙酰基比沙可啶和单去乙酰基比沙可啶的检测方法。
技术介绍
比沙可啶是一种接触性缓泻药，通过与肠黏膜的直接接触，刺激其感觉神经末梢，引起肠反射性蠕动增加而导致排便。因为该药具有一定的瘦身效果，被不法商家添加进减肥类中成药及保健食品中，对消费者身体健康带来危害。目前，国家法定检验标准（食品中西布曲明等化合物的测定BJS201701）已收载了比沙可啶的检测方法，为禁用成分。比沙可啶的两种类似物：双去乙酰基比沙可啶（CAS号：603-41-8，分子式：C18H15NO2，分子量：277.1）及单去乙酰基比沙可啶（CAS号：72901-16-7，分子式：C20H17NO3，分子量：319.1），为比沙可啶生产过程中的杂质，具有比沙可啶相同的母核，也具有减肥作用。制假分子为了逃避监管，会将这两种化合物掺入减肥产品中，日前在市售减肥类中成药及保健食品监督检验中发现有添加这两种成分，但目前还没有此物质的定性、定量检测方法。本专利技术建立了双去乙酰基比沙可啶及单去乙酰基比沙可啶的快速检验方法，以供对两种去乙酰基比沙可啶的定性筛查及含量测定。aba:双去乙酰基比沙可啶b:单去乙酰基比沙可啶。
技术实现思路
要解决的技术问题：本专利技术的目的是提供一种针对减肥类中成药和保健食品中添加双去乙酰基比沙可啶及单去乙酰基比沙可啶的检验方法，该方法的原理为：将供试品用甲醇提取和过滤，C18色谱柱分离，线性离子阱质谱检测，根据色谱保留时间、质谱一级母离子、二、三级碎片子离子综合加以确证，并采用多重反应监测（MRM）模式建立定量方法。技术方案：双去乙酰基比沙可啶和单去乙酰基比沙可啶的检测方法，该方法的样品进样量为0.1-5μL；样品经超高效液相色谱-线性离子阱质谱法进行分析。双去乙酰基比沙可啶和单去乙酰基比沙可啶的检测方法在检测减肥类中成药及保健食品中残留的应用。双去乙酰基比沙可啶和单去乙酰基比沙可啶的检测方法，包括以下步骤：（1）精密称取双去乙酰基比沙可啶及单去乙酰基比沙可啶对照品各5mg，置于50mL容量瓶中，用甲醇溶解稀释至刻度，作为储备液；再移取适量，用甲醇逐级稀释，配成浓度分别为2ng/mL的对照品溶液。（2）将供试品制成细粉，混合均匀，精密称取一次服用量，置于50mL容量瓶中，加甲醇30mL，振摇提取30min，静置，加甲醇至刻度，混匀，0.22μm有机滤膜过滤。（3）采用超高效液相色谱-线性离子阱质谱法进行定性筛查：分别取空白溶液、供试品溶液和对照品溶液，注入液质联用仪中进行检测。进一步的，所述超高效液相色谱-线性离子阱质谱的检测条件如下：超高效液相色谱条件：色谱柱：C18色谱柱，100mm/50mm×2.1mm，1.7μm/1.8μm；检测器：线性离子阱；流动相：A-0.1%乙酸溶液、B-0.1%乙酸-甲醇；流速：0.2-0.6mL/min；柱温：25-40℃；进样量：0.1-5μL；洗脱梯度程序：0-5min，20%-90%B；5-6min，90%B；6.1-7min，20%B；线性离子阱质谱检测器条件：离子源：ESI+；脱溶剂温度（℃）：550离子化电压（V）：5500；喷雾气（psi）：45辅助加热气（psi）：45；碰撞气：Medium采集模式：MRM,MS3；气帘气：25化合物离子对参数：名称离子对DP(V)CE(V)MS3采集范围AF2MS3碎片双去乙酰基比沙可啶-1*278.4/184.26020100-3000.12167.1、156.0、129.0单去乙酰基比沙可啶-1320.2/226.26020-----------------------------单去乙酰基比沙可啶-2*320.2/184.26036100-3400.12167.0、156.1、129.1注：*定量离子对进一步的，所述步骤（2）中供试品为固体剂型，主要为胶囊剂或片剂型的中成药及保健食品。进一步的，步骤（2）中供试品制成的细粉粒径≤180μm。进一步的，所述色谱柱为AgilentZorbaxEclipseC18，100mm×2.1mm，1.8μm。结果判断：供试品色谱图中，如果出现与双去乙酰基比沙可啶或单去乙酰基比沙可啶对照品保留时间一致的TIC及MRM色谱峰，且MS3质谱主要碎片（167.1、156.0、129.0）都一致，则确定添加了双去乙酰基比沙可啶或单去乙酰基比沙可啶，则将供试品提取液适当稀释，利用定量离子对进行含量测定。如果出现与双去乙酰基比沙可啶或单去乙酰基比沙可啶对照品保留时间一致的TIC及MRM色谱峰，但是MS3质谱主要碎片（167.1、156.0、129.0）均不一致，则确定样品中没有添加这两种化合物，计算这两种化合物的检出浓度。如果未出现与双去乙酰基比沙可啶或单去乙酰基比沙可啶对照品保留时间一致的MRM色谱峰，则判断样品中没有添加这两种化合物，计算其检出浓度。检出浓度：按下表1中检出限，当称样量为1g，稀释倍数为50时，检出浓度为：0.99μg/kg（双去乙酰基比沙可啶），1.02μg/kg（单去乙酰基比沙可啶）。含量测定：线性范围：移取双去乙酰基比沙可啶和单去乙酰基比沙可啶的混合对照品储备溶液，加甲醇逐级稀释配制成最终浓度分别为0.05、0.1、0.5、1.0、2.0、5.0ng/mL的系列标准溶液，以双去乙酰基比沙可啶-1（278.4/184.2）及单去乙酰基比沙可啶-2（320.2/184.2）MRM峰面积（Y）对浓度（X）进行线性拟合，计算线性方程和相关系数（见表1）。结果显示在0.05-5ng/mL范围内，线性关系良好（r>0.999）。检出限：取混合对照品溶液用阴性样品提取液逐级稀释后进样测定，分别以3倍信噪比时对应的各对照溶液浓度计算检出限，结果见表1。表1去乙酰基比沙可啶的线性范围、线性方程、相关系数、检出限化合物线性范围ng/mL线性方程相关系数r检出限（ng）双去乙酰基比沙可啶0.05-5Y=228028X+66650.99990.00002单去乙酰基比沙可啶0.05-5Y=426215X+39305<本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.双去乙酰基比沙可啶和单去乙酰基比沙可啶的检测方法，其特征在于：该方法的样品进样量为0.1-5 μL；样品经超高效液相色谱-线性离子阱质谱法进行分析。/n

【技术特征摘要】
1.双去乙酰基比沙可啶和单去乙酰基比沙可啶的检测方法，其特征在于：该方法的样品进样量为0.1-5μL；样品经超高效液相色谱-线性离子阱质谱法进行分析。


2.双去乙酰基比沙可啶和单去乙酰基比沙可啶的检测方法在检测减肥类中成药及保健食品中残留的应用。


3.根据权利要求1所述的双去乙酰基比沙可啶和单去乙酰基比沙可啶的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：
（1）精密称取双去乙酰基比沙可啶及单去乙酰基比沙可啶对照品各5mg，置于50mL容量瓶中，用甲醇溶解稀释至刻度，作为储备液；再移取适量，用甲醇逐级稀释，配成浓度分别为2ng/mL的对照品溶液；
（2）将供试品制成细粉，混合均匀，精密称取一次服用量，置于50mL容量瓶中，加甲醇30mL，振摇提取30min，静置，加甲醇至刻度，混匀，0.22μm有机滤膜过滤；
（3）采用超高效液相色谱-线性离子阱质谱法进行定性筛查：分别取空白溶液、供试品溶液和对照品溶液，注入液质联用仪中进行检测。


4.根据权利要求1所述的双去乙酰基比沙可啶和单去乙酰基比沙可啶的检测方法，其特征在于：所述超高效液相色谱-线性离子阱质谱的检测条件如下：
超高效液相色谱条件：
色谱柱：C18色谱柱，100mm/50mm×2.1mm，1.7μm/1.8μ...

【专利技术属性】
技术研发人员：贾昌平，郑佳新，郑梅，陈丽波，钱叶飞，赵琪，张珊珊，张斌，储蓉，
申请(专利权)人：苏州市药品检验检测研究中心，
类型：发明
国别省市：江苏;32