波棱瓜子壳提取物的液相色谱检测方法技术

本发明专利技术公开了一种波棱瓜子壳提取物的液相色谱检测方法。所述方法以波棱瓜子壳为原料，利用甲醇与水作为流动相，通过在甲醇中添加0.1％的甲酸，调整不同洗脱时间下甲醇与水的比例获得最佳洗脱条件，获得液相图谱。本发明专利技术方法简便、稳定、精密度高以及重现性好。通过本发明专利技术的检测方法，充分地反映波棱瓜子壳中的化学成分信息。本发明专利技术建立的波棱瓜子壳提取物的液相分析谱图对波棱瓜子壳的生产开发具有重要意义。

HPLC method for the determination of the extract from the seed shell of porridge melon

【技术实现步骤摘要】
波棱瓜子壳提取物的液相色谱检测方法
本专利技术属于天然药物化学
，涉及一种波棱瓜子壳提取物的液相色谱检测方法。
技术介绍
波棱瓜(Herpetospermumpedunculosum)，是葫芦科波棱瓜属下的一个植物种。波棱瓜是攀缘性的草本植物，茎、枝都比较细长，瓜外表长有沟状结构。波棱瓜刚生长出来的时候表面长有稀疏的柔毛，最后表面变得十分光滑。波棱瓜是一年生植物，花为单性并且雌雄异株，广泛分布于中国、尼泊尔和印度的喜马拉雅山，常见于海拔2000-3500m的路边和灌木丛中。波棱瓜子，系葫芦科植物波棱瓜的干燥成熟的种子，是中国的传统藏药，藏语为“Se-Ji-Mei-Duo”，已收载在《中华人民共和国卫生部药品标准》中。波棱瓜子具有清热解毒的功效，被广泛用于治疗“赤巴”炎症(藏药三大疾病之一)。波棱瓜的用药历史相当悠远，主要应用它入药的是藏医和蒙医。《迪庆藏药》及《中华本草》记载：“种子味苦，性寒，效锐；能清俯热、胆热；治赤巴人脏腑，肝、胆热症(肝炎、胆囊炎)，消化不良。”袁海龙等从波棱瓜子的乙醇提取物中分离得到波棱素(herpetin)(袁海龙,李仙义.波棱素化合物及其制法和其药物组合物与用途:,CN1305468C[P].2007)，张梅等从波棱瓜子的乙酸乙酯提取物中分离得到波棱酮、去氢双松柏醇(Dehydrodiconiferylalcohol)、波棱内酯Ⅰ(HerpetolideA)、波棱内酯Ⅱ(HerpetolideB)等具有药用价值的活性化合物(ZHANGM,DENGY,ZHANGHB,etal.TwonewcoumarinsfromHerpetospermumcaudigerum[J].Cheminform,2010,39(32))。根据《中国藏药》和《西藏常用中草药》记载，用作藏药“波棱瓜子”的主要部分是波棱瓜的种子，但种皮、花等部位也能够利用，并且效用和种子差不多。据调研，目前尚未发现有关波棱瓜子壳的入药说明，其化学成分、药理毒性等研究尚未有人涉足。在实际生产过程中，成熟的波棱瓜子经过晒干脱壳后即送往下一步加工，波棱瓜的果壳则被丢弃，造成了巨大的浪费。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种波棱瓜子壳提取物的液相色谱检测方法。该方法以波棱瓜子壳为原料，利用天然产物化学手段，通过在有机相中添加一定比例的甲酸，使用高效液相色谱建立波棱瓜子壳的液相图谱，为波棱瓜子壳的产业化利用过程建立质量标准。实现本专利技术目的的技术方案如下：波棱瓜子壳提取物的液相色谱检测方法，包括以下步骤：步骤1，将波棱瓜子壳粉碎；将粉碎后的波棱瓜子壳用95％乙醇进行加热回流提取，获得醇提物，将波棱瓜子壳醇提物使用乙酸乙酯进行萃取，对萃取液减压旋蒸，获得乙酸乙酯萃取物；步骤2，将波棱瓜子壳乙酸乙酯提取物加入色谱级甲醇中混溶，超声使其充分溶解后过微孔滤膜进样；步骤3，使用高效液相色谱仪，C18色谱柱为分析柱，以添加0.1％甲酸的甲醇为A相，以水为B相，进行梯度洗脱，设置洗脱程序洗脱60min，获得波棱瓜子壳提取物的指纹图谱。优选地，步骤1中，回流提取次数为3次以上，所述的每次回流提取时间为1～3小时，优选为第一次3小时，第二次2小时，第三次1小时。优选地，步骤2中，所述的微孔滤膜的孔径为0.5μm。优选地，步骤3中，所述的洗脱程序为：0～10min，10％～25％甲醇；10～25min，25％～36％甲醇；25～29min，36％～58％甲醇；29～40min，58％～60％甲醇；40～45min；60％～100％甲醇；45～60min，100％甲醇。优选地，步骤3中，柱温为30℃。优选地，步骤3中，所述的荧光检测波长为230nm，254nm和260nm。优选地，步骤3中，所述的流动相的流速为0.8mL/min。与现有技术相比，本专利技术具备以下优点：本专利技术首次对波棱瓜子壳进行液相色谱分析，通过在流动相中添加0.1％的甲酸，增加了提取物的分离程度，获得的液相图谱化合物的分离程度好，化合物数量多。本专利技术方法简便、稳定、精密度高以及重现性好。通过本专利技术的检测方法，能够更充分的反映波棱瓜子壳中的化学成分信息，选取的荧光检测波长均提供了较为丰富的化合物信息。工业生产中对原材料的液相分析谱图是质量控制的重要参考，本专利技术建立的波棱瓜子壳提取物的液相分析谱图对波棱瓜子壳的生产开发具有重要意义。附图说明图1为实施例1，对比例1和对比例2峰数量对比图。图2为实施例1在260nm检测波长下的液相谱图。图3为实施例1在254nm检测波长下的液相谱图。图4为实施例1在230nm检测波长下的液相谱图。图5为对比例1在260nm检测波长下的液相谱图。图6为对比例1在254nm检测波长下的液相谱图。图7为对比例1在230nm检测波长下的液相谱图。图8为对比例2在260nm检测波长下的液相谱图。图9为对比例2在254nm检测波长下的液相谱图。图10为对比例2在230nm检测波长下的液相谱图。具体实施方式下面结合实施例和附图对本专利技术作进一步详细说明。实施例1(1)将波棱瓜子壳粉碎；将粉碎后的波棱瓜子壳使用95％乙醇进行加热回流提取，分三次进行，第一次3小时，第二次2小时，第三次1小时，获得乙醇提取液；将乙醇提取液经过减压旋蒸挥干后获得乙醇提取物，将乙醇提取物使用乙酸乙酯萃取，萃取液经过减压旋蒸挥干后获得乙酸乙酯提取物；(2)将波棱瓜子壳乙酸乙酯提取物加入色谱级甲醇混溶，使用超声充分混溶后用0.5um的有机滤膜过滤后转移至色谱仪专用进样瓶后等待进样；(3)打开液相色谱仪，待各组件准备就绪后，设置洗脱程序，洗脱程序设置为：0～10min，10％～25％甲醇；10～25min，25％～36％甲醇；25～29min，36％～58％甲醇；29～40min，58％～60％甲醇；40～45min；60％～100％甲醇；45～60min，100％甲醇。柱温设为30℃，流速设为0.8mL/min，荧光检测波长分别设置为230nm、254nm和260nm，检测柱选用C18色谱柱，规格为4.6mm×200mm、5μm，在A相甲醇中加入0.1％的甲酸；(4)启动高效液相色谱仪，执行设定的程序，获得的数据使用打印命令获得液相谱图。本实施例中，三个检测波长下获得的色谱峰分别为51，89，97个。对比例1(1)将波棱瓜子壳粉碎；将粉碎后的波棱瓜子壳使用95％乙醇进行加热回流提取，分三次进行，第一次3小时，第二次2小时，第三次1小时，获得乙醇提取液；将乙醇提取液经过减压旋蒸挥干后获得乙醇提取物，将乙醇提取物使用乙酸乙酯萃取，萃取液经过减压旋蒸挥干后获得乙酸乙酯提取物；(2)将波棱瓜子壳乙酸乙酯提取物加入色谱级甲醇混溶，使用超声充分混溶后用0.5um的有机滤膜过滤后转移至色谱仪专用进样瓶后等待进样；(3本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.波棱瓜子壳提取物的液相色谱检测方法，其特征在于，包括以下步骤：/n步骤1，将波棱瓜子壳粉碎；将粉碎后的波棱瓜子壳用95％乙醇进行加热回流提取，获得醇提物，将波棱瓜子壳醇提物使用乙酸乙酯进行萃取，对萃取液减压旋蒸，获得乙酸乙酯萃取物；/n步骤2，将波棱瓜子壳乙酸乙酯提取物加入色谱级甲醇中混溶，超声使其充分溶解后过微孔滤膜进样；/n步骤3，使用高效液相色谱仪，C18色谱柱为分析柱，以添加0.1％甲酸的甲醇为A相，以水为B相，进行梯度洗脱，设置洗脱程序洗脱60min，获得波棱瓜子壳提取物的指纹图谱。/n

【技术特征摘要】
1.波棱瓜子壳提取物的液相色谱检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1，将波棱瓜子壳粉碎；将粉碎后的波棱瓜子壳用95％乙醇进行加热回流提取，获得醇提物，将波棱瓜子壳醇提物使用乙酸乙酯进行萃取，对萃取液减压旋蒸，获得乙酸乙酯萃取物；
步骤2，将波棱瓜子壳乙酸乙酯提取物加入色谱级甲醇中混溶，超声使其充分溶解后过微孔滤膜进样；
步骤3，使用高效液相色谱仪，C18色谱柱为分析柱，以添加0.1％甲酸的甲醇为A相，以水为B相，进行梯度洗脱，设置洗脱程序洗脱60min，获得波棱瓜子壳提取物的指纹图谱。


2.根据权利要求1所述的液相色谱检测方法，其特征在于，步骤1中，回流提取次数为3次以上，所述的每次回流提取时间为1～3小时，优选为第一次3小时，第二次2小时，第三次1小时。


3.根据权利要求1所述的液相色谱...

【专利技术属性】
技术研发人员：汪俊松，陈剑锋，
申请(专利权)人：南京理工大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32