一种凤仙花药材中2-甲氧基-1,4-萘醌的含量检测方法技术

本发明专利技术涉及一种凤仙花药材中2‑甲氧基‑1,4‑萘醌的含量检测方法，利用高效液相色谱法测定，重复性好，灵敏度高，实验结果可靠，为凤仙花药材的质量标准研究提供了一定的实验依据，为进一步研究凤仙花药材的质量标准提供可靠的实验方法。

【技术实现步骤摘要】
一种凤仙花药材中2-甲氧基-1,4-萘醌的含量检测方法
本专利技术属于药物分析
，涉及一种凤仙花药材中2-甲氧基-1,4-萘醌的含量检测方法。凤仙花，为凤仙花科植物凤仙花ImpatiensbalsaminaL.的全草。凤仙花主要含黄酮醇类及萘醌衍生物，如2-甲氧基-1,4-萘醌、山奈酚-3-鼠李糖基双葡萄糖苷、2-羟基-1,4-萘酚等,凤仙花的根含有指甲醌(lawsone)、2-甲氧基-1,4-萘醌(2-methoxy-1,4-naphtho-quinone)、东莨菪素、异嗪皮啶，菠菜甾醇(spinasterol等,具有抗真菌、抗过敏、抗炎镇痛、促皮透析等作用,其中2-甲氧基-1,4-萘醌(2-methoxy-1,Naphtho4-quinone)为其主要的抗真菌成分。姜洪芳，石宝俊，张峰伦，等.江苏农业科学2014年第42卷第12期，高效液相色谱法同时测定凤仙花中的萘醌类和黄酮类成分[J].江苏农业科学，2014，42(12):344－346.doi:10.15889/j.issn.1002－1302.2014.12.117，该方案公开了利用反相高效液相色谱，测定不同花色单瓣凤仙花和多重瓣茶凤仙茎、叶、花中指甲花醌、槲皮素、2－甲氧基－1，4萘醌、山奈酚含量。具体方法：HPLC分析条件：AgilentEclipseXDB－C18分离柱(4.6mm×150mm,5μm)；流动相为乙腈－2.5％醋酸水，梯度洗脱条件:0～10min，25:75；10～20min，32:68；20～35min，25:75，流速1.0mL/min，进样量20μL，柱温为25℃，DAD检测器，检测波长245、250、280、360nm。对照品溶液的制备：分别称取指甲花醌、2－甲氧基－1，4萘醌、槲皮素、山奈酚对照品10mg，精确称定，甲醇溶解并定容，稀释成浓度为50、40、25、12.5、10、6.25、3.12μg/mL的溶液，经0.45μm微孔滤膜过滤，供HPLC测定，并绘制每种物质的标准曲线。供试品溶液的制备：称取样品粉末(50℃烘干12h，磨碎过40目筛)5.0g，精确称定，加入55％乙醇水溶液80mL，室温浸泡2h，超声提取1h，定容至100mL,滤液经0.45μm的微孔滤膜过滤，供HPLC测定。上述技术方案流动相采用乙腈－2.5％醋酸水，腐蚀性大，峰形较差，分离度有待进一步提高，供试品处理方法较复杂。本专利技术为了解决上述缺限，确保凤仙花中药材中2-甲氧基-1,4-萘醌含量检测的可靠性，准确性，专利技术人通过了大量的实验研究，对色谱条件进行系统化合理控制，采用的是高效液相色谱法测定凤仙花中的2-甲氧基-1,4-萘醌的含量，色谱条件的流动相为水和乙腈进行梯度洗脱，水相比醋酸水腐蚀性小，粘度小，从速率方程角度说，流动相传质阻抗小，有利于柱效提高，峰形较好，分离度高；另本专利技术供试品的制备用甲醇回流提取既得，与上述供试品的制备相比供试品处理简单易行，成分在处理过程中相对流失较少，有效成分提取率较高。本专利技术通过试验证实该方法线性关系良好，精密度高，重现性好,回收率高，且该方法简单、快速、准确。
技术实现思路
本专利技术的目的提供一种凤仙花药材中2-甲氧基-1,4-萘醌的含量检测方法。本专利技术所述检测方法为高效液液相色谱法，具体步骤为：1)供试品溶液的制备：精密称取凤仙花药材粉末0.5～1.5g，加入50～150mL的甲醇溶液，称定重量，回流提取，放冷至室温，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用干燥的滤纸过滤后，续滤液用0.45um的微孔滤膜过滤后既得供试品溶液；2)对照品溶液的制备：精密称取2-甲氧基-1，4-萘醌对照品5mg，加入甲醇100mL配成0.05mg/mL的2-甲氧基-1，4-萘醌的对照品溶液；3)色谱条件与系统适应性试验：COSMOSILCholester色谱柱：规格为4.6×250mm，5um；流动相：A相为水，B相为乙腈，梯度洗脱；检测波长：260～300nm；柱温：27～33℃；流速：0.7～1.3ml/min；进样量：10uL；4)测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，测得峰面积值并计算含量，即得。优选的，1)供试品溶液的制备：精密称取凤仙花药材粉末0.6～1.4g，加入60～140mL的甲醇溶液，称定重量，回流提取，放冷至室温，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用干燥的滤纸过滤后，续滤液用0.45um的微孔滤膜过滤后既得供试品溶液；2)对照品溶液的制备：精密称取2-甲氧基-1，4-萘醌对照品5mg，加入甲醇100mL配成0.05mg/mL的2-甲氧基-1，4-萘醌的对照品溶液；3)色谱条件与系统适应性试验：COSMOSILCholester色谱柱；规格为4.6×250mm，5um；流动相：A相为水，B相为乙腈，梯度洗脱；检测波长：265～295nm；柱温：28～32℃；流速：0.8～1.2ml/min；进样量：10uL；4)测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，测得峰面积值并计算含量，即得；进一步优选的，1)供试品溶液的制备：精密称取凤仙花药材粉末0.8～1.2g，加入80～120mL的甲醇溶液，称定重量，回流提取，放冷至室温，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用干燥的滤纸过滤后，续滤液用0.45um的微孔滤膜过滤后既得供试品溶液；2)对照品溶液的制备：精密称取2-甲氧基-1，4-萘醌对照品5mg，加入甲醇100mL配成0.05mg/mL的2-甲氧基-1，4-萘醌的对照品溶液；3)色谱条件与系统适应性试验：COSMOSILCholester色谱柱：规格为4.6×250mm，5um；流动相：A相为水，B相为乙腈，梯度洗脱；270～290nm；柱温：29～31℃；流速：0.9～1.1ml/min；进样量：10uL；4)测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，测得峰面积值并计算含量，即得。更进一步优选的，1)供试品溶液的制备：精密称取凤仙花药材粉末1.0g，加入100mL的甲醇溶液，称定重量，回流提取，放冷至室温，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用干燥的滤纸过滤后，续滤液用0.45um的微孔滤膜过滤后既得供试品溶液；2)对照品溶液的制备：精密称取2-甲氧基-1，4-萘醌对照品5mg，加入甲醇100mL配成0.05mg/mL的2-甲氧基-1，4-萘醌的对照品溶液；3)色谱条件与系统适应性试验：COSMOSILCholester色谱柱：规格为4.6×250mm，5um；流动相：A相为水，B相为乙腈，梯度洗脱；280nm；柱温：30℃；流速：1.0ml/min；进样量：10uL；4)测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，测得峰面积值并计算含量，即得。供试品溶液的制备中所述的回流提取指70～110本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种凤仙花药材中2-甲氧基-1,4-萘醌的含量检测方法，其特征在于所述检测方法为高效液相色谱法，具体步骤为：/n1)供试品溶液的制备：精密称取凤仙花药材粉末0.5～1.5g，加入50～150mL的甲醇溶液，称定重量，回流提取，放冷至室温，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用干燥的滤纸过滤后，续滤液用0.45um的微孔滤膜过滤后既得供试品溶液；/n2)对照品溶液的制备：精密称取2-甲氧基-1，4-萘醌对照品5mg，加入甲醇100mL配成0.05mg/mL的2-甲氧基-1，4-萘醌的对照品溶液；/n3)色谱条件与系统适应性试验：COSMOSIL Cholester色谱柱：规格为4.6×250mm，5um；流动相：A相为水，B相为乙腈，梯度洗脱；检测波长：260～300nm；柱温：27～33℃；流速：0.7～1.3ml/min；进样量：10uL；/n4)测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，测得峰面积值并计算含量，即得。/n

【技术特征摘要】
1.一种凤仙花药材中2-甲氧基-1,4-萘醌的含量检测方法，其特征在于所述检测方法为高效液相色谱法，具体步骤为：
1)供试品溶液的制备：精密称取凤仙花药材粉末0.5～1.5g，加入50～150mL的甲醇溶液，称定重量，回流提取，放冷至室温，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用干燥的滤纸过滤后，续滤液用0.45um的微孔滤膜过滤后既得供试品溶液；
2)对照品溶液的制备：精密称取2-甲氧基-1，4-萘醌对照品5mg，加入甲醇100mL配成0.05mg/mL的2-甲氧基-1，4-萘醌的对照品溶液；
3)色谱条件与系统适应性试验：COSMOSILCholester色谱柱：规格为4.6×250mm，5um；流动相：A相为水，B相为乙腈，梯度洗脱；检测波长：260～300nm；柱温：27～33℃；流速：0.7～1.3ml/min；进样量：10uL；
4)测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，测得峰面积值并计算含量，即得。


2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于所述检测方法为高效液相色谱法，具体步骤为：
1)供试品溶液的制备：精密称取凤仙花药材粉末0.6～1.4g，加入60～140mL的甲醇溶液，称定重量，回流提取，放冷至室温，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用干燥的滤纸过滤后，续滤液用0.45um的微孔滤膜过滤后既得供试品溶液；
2)对照品溶液的制备：精密称取2-甲氧基-1，4-萘醌对照品5mg，加入甲醇100mL配成0.05mg/mL的2-甲氧基-1，4-萘醌的对照品溶液；
3)色谱条件与系统适应性试验：COSMOSILCholester色谱柱；规格为4.6×250mm，5um；流动相：A相为水，B相为乙腈，梯度洗脱；检测波长：265～295nm；柱温：28～32℃；流速：0.8～1.2ml/min；进样量：10uL；
4)测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，测得峰面积值并计算含量，即得。


3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于所述检测方法为高效液相色谱法，具体步骤为：
1)供试品溶液的制备：精密称取凤仙花药材粉末0.8～1.2g，加入80～120mL的甲醇溶液，称定重量，回流提取，放冷至室温，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用干燥的滤纸过滤后，续滤液用0.45um的微孔滤膜过滤后既得供试品溶液；
2)对照品溶液的制备：精密称取2-甲氧基-1，4-萘醌对照品5mg，加入甲醇100mL配成0.05mg/mL的2-甲氧基-1，4-萘醌的对照品溶液；
3)色谱条件与系统适应性试验：COSMOSILCholester色谱柱：规格为4.6×250mm，5um；流动相：A相为水，B相为乙腈，梯度洗脱；270～290nm；柱温：29～31℃；流速：0.9～1.1ml/min；进样量：10uL；
4)测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，测得峰面积值并计算含量，即得。


4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于所述检测方法为高效液相色谱法，具体步骤为：
1)供试品溶液的制备：精密称取...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡成刚，吴海燕，刘丹，陈彦伶，李春宁，
申请(专利权)人：贵州中医药大学，
类型：发明
国别省市：贵州;52