生物样品表面形貌超高倍分辨率观察测定技术制造技术

本发明专利技术公开了生物样品表面形貌超高倍分辨率观察测定技术，包括梯度脱水、超临界干燥处理、喷碳膜以及观察等步骤。本发明专利技术的生物样品表面形貌超高倍分辨率观察测定技术，利用超临界干燥技术对植物样品进行干燥处理，制得的植物样品比较稳定，植物样品的表面形貌无损伤，可以更好的保留植物样品的特征；处理后的植物样品采用场发射扫描电镜观察，使生物样品超高倍成像及元素测定摆脱了对环境扫描电镜的依赖，且放大倍数、分辨率和图片质量都大大优于环境扫描电镜。

Ultra high resolution observation and measurement technology of surface morphology of biological samples

【技术实现步骤摘要】
生物样品表面形貌超高倍分辨率观察测定技术
本专利技术涉及生物样品超高倍成像及元素测定
，尤其涉及生物样品表面形貌超高倍分辨率观察测定技术。
技术介绍
随着近代材料科学的发展，光学显微镜的专利技术帮助大众对材料的认知从肉眼宏观观察提升到微米尺度。1965年专利技术了第一台商用扫描电子显微镜，其利用电子二次成像的原理可以将样品放大到几十万倍。但其只能在高真空条件下观察干燥的、具有导电性的材料样品。为了观察生物活体组织，环境扫描电镜应运而生。其成像原理与普通扫描电镜相同，独特之处在于多配备了多级可变压力真空系统和能够进行气体检测的二次电子探测器，其可以在接近自然环境的低真空条件下对含有水分的样品进行成像和原位元素分析，对研究生物表面纳米结构具有重要的意义。但是，目前的环境扫描电镜技术不太成熟。存在样品水分蒸发会造成成像模糊、样品中挥发的成分污染镜头和探测器等问题。含水样品很容易对电子枪产生损伤，甚至导致仪器损坏。且环境扫描电镜观测价格比较昂贵，只有实验室等极少装配有该设备。基于此，如何设计一种可以替代环境扫描电镜，实现对生物样品表面形貌超高倍观察测定的技术是本专利技术所要解决的技术问题。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术的不足，提供一种可以替代环境扫描电镜，实现对生物样品表面形貌超高倍观察测定的技术。本专利技术通过以下技术手段实现解决上述技术问题的：生物样品表面形貌超高倍分辨率观察测定技术，包括以下步骤：a梯度脱水：取植物样品依次浸泡在25％、50％、75％、100％的乙醇溶液中，进行梯度脱水；b超临界干燥处理：将梯度脱水后的植物样品快速转移到装有异丙醇和乙醇混合溶液的超临界干燥盒中，在超临界干燥仪中进行CO2超临界干燥；c喷碳膜：用镊子将干燥后的植物样品固定在扫面电镜样品台的导电胶上，然后将扫面电镜样品台放入到溅射仪中喷碳膜；d观察：植物样品喷碳膜结束后进行场发射扫描电镜观察。优选的，所述的生物样品表面形貌超高倍分辨率观察测定技术，步骤a中，植物组织在25％、50％、75％、100％的乙醇溶液中的浸泡时间都为30min。优选的，所述的生物样品表面形貌超高倍分辨率观察测定技术，步骤b中，CO2超临界干燥的条件为：温度31.1℃，压强73.9×105Pa。优选的，所述的生物样品表面形貌超高倍分辨率观察测定技术，步骤c中，根据观察部位的需要，植物样品按一定角度固定在扫面电镜样品台的导电胶上。优选的，所述的生物样品表面形貌超高倍分辨率观察测定技术，步骤c中，喷碳厚度为0.9-1.1nm。本专利技术的优点在于：本专利技术的生物样品表面形貌超高倍分辨率观察测定技术，利用超临界干燥技术对植物样品进行干燥处理，制得的植物样品比较稳定，植物样品的表面形貌无损伤，可以更好的保留植物样品的特征；处理后的植物样品采用场发射扫描电镜观察，使生物样品超高倍成像及元素测定摆脱了对环境扫描电镜的依赖，且放大倍数、分辨率和图片质量都大大优于环境扫描电镜。具体实施方式为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。生物样品表面形貌超高倍分辨率观察测定技术，包括以下步骤：a梯度脱水：取植物样品依次浸泡在25％、50％、75％、100％的乙醇溶液中，进行梯度脱水；b超临界干燥处理：将梯度脱水后的植物样品快速转移到装有异丙醇和乙醇混合溶液的超临界干燥盒中，在超临界干燥仪中进行CO2超临界干燥；c喷碳膜：用镊子将干燥后的植物样品固定在扫面电镜样品台的导电胶上，然后将扫面电镜样品台放入到溅射仪中喷碳膜；d观察：植物样品喷碳膜结束后进行场发射扫描电镜观察。优选的，步骤a中，植物组织在25％、50％、75％、100％的乙醇溶液中的浸泡时间都为30min。优选的，步骤b中，CO2超临界干燥的条件为：温度31.1℃，压强73.9×105Pa。优选的，步骤c中，根据观察部位的需要，植物样品按一定角度固定在扫面电镜样品台的导电胶上。优选的，步骤c中，喷碳厚度为0.9-1.1nm。需要注意的是，脱水后的植物样品需要快速转移到装有异丙醇和乙醇混合溶液的超临界干燥盒中，不能长时间暴露在空气中；植物样品超临界干燥处理后，可先放入到培养皿中，并用封口膜密封保存，需要喷碳膜时再用镊子将样品取出；另外，脱水后的植物样品较脆，将其轻轻粘在扫面电镜样品台的导电胶上即可，不可用镊子尖端反复按压样品；本专利技术的生物样品表面形貌超高倍分辨率观察测定技术，利用超临界干燥技术对植物样品进行干燥处理，制得的植物样品比较稳定，植物样品的表面形貌无损伤，可以更好的保留植物样品的特征；处理后的植物样品采用场发射扫描电镜观察，使生物样品超高倍成像及元素测定摆脱了对环境扫描电镜的依赖，且放大倍数、分辨率和图片质量都大大优于环境扫描电镜。需要说明的是，在本文中，如若存在第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素。以上实施例仅用以说明本专利技术的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本专利技术进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本专利技术各实施例技术方案的精神和范围。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.生物样品表面形貌超高倍分辨率观察测定技术，其特征在于，包括以下步骤：/na梯度脱水：取植物样品依次浸泡在25％、50％、75％、100％的乙醇溶液中，进行梯度脱水；/nb超临界干燥处理：将梯度脱水后的植物样品快速转移到装有异丙醇和乙醇混合溶液的超临界干燥盒中，在超临界干燥仪中进行CO2超临界干燥；/nc喷碳膜：用镊子将干燥后的植物样品固定在扫面电镜样品台的导电胶上，然后将扫面电镜样品台放入到溅射仪中喷碳膜；/nd观察：植物样品喷碳膜结束后进行场发射扫描电镜观察。/n

【技术特征摘要】
1.生物样品表面形貌超高倍分辨率观察测定技术，其特征在于，包括以下步骤：
a梯度脱水：取植物样品依次浸泡在25％、50％、75％、100％的乙醇溶液中，进行梯度脱水；
b超临界干燥处理：将梯度脱水后的植物样品快速转移到装有异丙醇和乙醇混合溶液的超临界干燥盒中，在超临界干燥仪中进行CO2超临界干燥；
c喷碳膜：用镊子将干燥后的植物样品固定在扫面电镜样品台的导电胶上，然后将扫面电镜样品台放入到溅射仪中喷碳膜；
d观察：植物样品喷碳膜结束后进行场发射扫描电镜观察。


2.根据权利要求1所述的生物样品表面形貌超高倍分辨率观察测定技术，其特征在于：步...

【专利技术属性】
技术研发人员：骆天治，丁卫平，苗春光，刘亮亮，
申请(专利权)人：安徽骆华生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34