一种快速检测血清中酪氨酸酶的试纸条及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种快速检测血清中酪氨酸酶的试纸条及其制备方法与应用。该试纸条检测酪氨酸酶的方法，首先制备检测试纸条；然后配制一系列不同浓度的酪氨酸酶标准溶液与相同浓度的多巴胺混合一定时间后，将混合溶液滴在检测试纸条上反应，试纸条显现不同的颜色，作为标准比色卡使用；本发明专利技术通过设计标准比色卡，可实时、快速的根据体系的颜色来检测待测酪氨酸酶的活性，并且设计了紫外吸光度与酪氨酸酶活性的标准曲线，通过测试体系的紫外可见光吸收光谱，将相关数据代入标准曲线即可得到准确的酪氨酸酶活性，不需要使用贵重的仪器，检测方法更简便、经济，具有较高的实用价值。

A test strip for rapid detection of tyrosinase in serum and its preparation and Application

【技术实现步骤摘要】
一种快速检测血清中酪氨酸酶的试纸条及其制备方法与应用
本专利技术涉及一种快速检测血清中酪氨酸酶的试纸条及其制备方法与应用，属于分析检测的

技术介绍
酪氨酸酶（TYR），又称为多酚氧化酶，是一种含铜的金属酶，广泛分布于微生物、动植物及人体中。酪氨酸酶在生物体中具有重要的生理功能，是黑色素生物合成途径中的关键酶，与人体雀斑、褐斑等黑色素过度沉积等疾病的发生有关，与昆虫的蜕皮和果蔬的褐化也有很大关系。因此对酪氨酸酶的活性水平的检测，不仅能为临床疾病如恶性黑色素瘤等诊断和治疗提供依据，同时在食品工业中果蔬保鲜及环境监测等多个领域有重要的意义。目前国内外已经有报道的关于酪氨酸酶的活性测定的方法主要包括放射性同位素检测法、高效液相色谱法、荧光检测法等。但这些方法都存在一些局限性，操作复杂、分析时间长、分析成本高等，从而限制了它们的广泛使用。化学和生物传感器方法具有简单，快速，有效检测的优点，已经被开发出来，然而化学和生物传感器检测汞离子方法无法实现现场检测的效果。中国专利号CN108152495A公开了一种检测酪氨酸的胶体金试纸，但是需要利用到酶联反应，抗原抗体价格昂贵。因此研发一种快速的、免仪器现场即时检测的、高灵敏度和高选择性的检测酪氨酸酶的方法对食品安全和临床诊断领域具有重大意义。
技术实现思路
为了解决上述问题，本本专利技术的目的在于提供一种基于功能化纳米金核壳结构材料的试纸条检测血清中酪氨酸酶的方法，以实时、快速、经济、实用地检测血清中酪氨酸酶含量。本专利技术的技术方案如下：一种快速检测血清中酪氨酸酶的检测试纸条的制备方法，步骤如下：S1、AuPB@Au胶体的合成取10mL纳米金胶溶液，加入10μL浓度为0.1mol/L的普鲁士蓝溶液作为拉曼信号分子，搅拌混合均匀后离心，重新悬浮于10mL超纯水中，得Au@PB胶体；往10mL的制备好的Au@PB胶体中加入250μL浓度为6*10-2mol/L的柠檬酸钠溶液，磁力搅拌加热至沸腾后，加入2.5mL浓度为1mmol/L氯金酸溶液后停止加热，继续磁力搅拌1h后，将胶体离心洗涤2次，重新分散于5mL超纯水中，得到AuPB@Au胶体；S2、功能化AuPB@AuNPs的制备将步骤S1制备好的AuPB@Au胶体与Fe（NTA）溶液按体积1:1混合后，搅拌混合后，离心洗涤除去未反应的Fe（NTA），去除上清液，重分散备用，即得功能化AuPB@AuNPs；S3、将试纸条基材充分浸泡在3-巯丙基甲基二甲氧基硅烷乙醇溶液中30min，取出后用蒸馏水和无水乙醇分别进行漂洗，通过有机硅烷耦合作用在纸张纤维表面自组装形成一层单分子层，烘干备用得功能化的试纸条；将其功能化的试纸条基材放入100mLG4的玻璃砂芯漏斗装置中，取制备好50mL的功能化AuPB@AuNPs材料倒入砂芯漏斗装置中，抽滤，最后将滤纸取出干燥即为检测试纸条。进一步地，所述Fe（NTA）溶液的合成方法如下：首先取浓度为10−3M的九水硝酸铁溶液和浓度为10−3M的氨三乙酸三钠溶液按体积1:1混合后，往溶液中添加pH调节剂调节Fe（NTA）溶液的pH为7.0，混合液静置，得Fe（NTA）溶液。进一步地，所述纳米金胶溶液的制备方法如下：取100mL质量分数为0.01%的氯金酸溶液在磁力搅拌下加热至沸腾；然后取1.5mL质量分数为1%柠檬酸钠溶液，加入到沸腾的上述氯金酸溶液中，待沸腾15min后，反应结束，冷却至室温，制成纳米金溶胶；进一步地，检测试纸条检测酪氨酸酶的方法，包括以下步骤：1）制作标准比色卡：将不同浓度的酪氨酸酶标准溶液（500U/mL、400U/mL、300U/mL、200U/mL、100U/mL、50U/mL、10U/mL、0U/mL）与多巴胺混合，依次滴加10μL在检测试纸条上，室温反应1.5分钟后晾干，记录检测试纸条颜色分别为深红、酒红、紫红、淡紫红、淡紫、蓝紫、紫灰、灰色，根据不同颜色，整理得到酪氨酸酶标准比色卡；2）检测酪氨酸酶：将待测样品与多巴胺混合后滴到检测试纸条上，室温反应1.5分钟后晾干，然后观察检测试纸条的颜色，并与步骤1）所得标准比色卡进行对照，通过颜色对比，估算出待测血清中的酪氨酸酶含量。本专利技术具有如下有益效果：1、本专利技术提供了一种用于简便快速检测血清中酪氨酸酶的检测试纸条。本专利技术制备的AuPB@AuNPs比传统的AuNPs更稳定，不易变质，便于保存备用；2、本专利技术提供的检测试纸条测试范围广，检测限低。3、本专利技术不需要大型仪器，方法简单、快速、易操作，通过裸眼观察比色，即可识别检测结果，可进行现场原位快速检测。4、本专利技术所用的试纸条的制备方法更稳定，纳米粒子不易从滤纸上脱落。5、本专利技术所用的试剂和操作过程无毒副作用。6、本专利技术通过设计标准比色卡，可实时、快速、简便、经济地的根据颜色来检测待测酪氨酸酶的浓度，并且设计了紫外吸光度与酪氨酸酶的浓度的标准曲线，通过测试体系的紫外可见光吸收光谱，将相关数据代入标准曲线即可得到准确的酪氨酸酶的浓度。7、本专利技术利用AuPB@AuNPs做为SERS增强基底，Fe(NTA)与DA形成Fe(NTA)DA络合物，该络合物可以放大DA的拉曼信号。由于酪氨酸酶催化氧化多巴胺产生多巴醌，在同一时间内，随着酪氨酸酶浓度增加，DA含量的降低，同一时间内消耗的DA增加，混合液中剩余的DA含量少，拉曼信号降低，所以可以通过DA间接检测TYR的活性。该方法通过对DA信号放大，大大提高了TYR的检测限。8、本专利技术研究的AuPB@Au核壳结构具有如下优势：纳米金生物相容性好，对细胞毒性小；外面的金壳既可以增强内标分子的信号又可以保护内标分子不受外界环境，pH和温度等的影响。9、普鲁士蓝做为拉曼信号分子，在生物静默区（＞1800cm-1）有个特征峰,具有高信噪比，细胞或者血液在1800cm-1波数前也存在特征峰，不会与细胞自身的谱峰重叠，造成背景干扰。附图说明图1为本专利技术功能化纳米金核壳结构材料与酪氨酸酶发生颜色反应的机理示意图；图2为实施例1制备的AuNPs的透射电镜图；图3是实施例1制备的AuPB@AuNPs的透射电镜图；图4为实施例1比色卡制作流程图；图5为实施例1待测溶液试纸的显色图片；图6是实施例1中不同浓度酪氨酸酶的紫外光谱图；图7是实施例1中不同浓度酪氨酸酶与吸光度的线性关系图；图8是实施例1中不同浓度酪氨酸酶对应的颜色变化。具体实施方式以下实施例用于说明本专利技术以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。但不用来限制本专利技术的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。实施例1（1）纳米金的制备纳米金胶溶液的制本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种快速检测血清中酪氨酸酶的检测试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1、Au

【技术特征摘要】
1.一种快速检测血清中酪氨酸酶的检测试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、AuPB@Au胶体的合成
取10mL纳米金胶溶液，加入10-20μL浓度为0.1mol/L的普鲁士蓝溶液作为拉曼信号分子，搅拌混合均匀后离心，重新悬浮于10mL超纯水中，得Au@PB胶体；往10mL的制备好的Au@PB胶体中加入250μL浓度为6*10-2mol/L的柠檬酸钠溶液，磁力搅拌加热至沸腾后，加入2.5mL浓度为1mmol/L氯金酸溶液后停止加热，继续磁力搅拌1h后，将胶体离心洗涤2次，重新分散于5mL超纯水中，得到AuPB@Au胶体；
S2、功能化AuPB@AuNPs的制备
将步骤S1制备好的AuPB@Au胶体与Fe（NTA）溶液按体积1:1混合后，搅拌混合后，离心洗涤除去未反应的Fe（NTA），去除上清液，重分散备用，即得功能化AuPB@AuNPs；
S3、将试纸条基材充分浸泡在3-巯丙基甲基二甲氧基硅烷乙醇溶液中，取出后用蒸馏水和无水乙醇分别进行漂洗，通过有机硅烷耦合作用在纸张纤维表面自组装形成一层单分子层，烘干备用即为功能化的试纸条；将其功能化的试纸条基材放入100mLG4的玻璃砂芯漏斗装置中，取50mL-100mL的制备好的功能化AuPB@AuNPs材料倒入均匀的砂芯漏斗装置中，抽滤，最后将滤纸取出干燥即为检测试纸条。


2.根据权利要求1所述的快速检测血清中酪氨酸酶的检测试纸条的制备方法，其特征在于，所述Fe（NTA）溶液的合成方法如下：首先取浓度为10−3M的九水硝酸铁溶液和浓度为10−3M的氨三乙酸三钠溶液按体积1:1混合后，往溶液中添加pH调节剂调节Fe（NTA）溶液的pH为7.0，混合液静置，得Fe（NTA）溶液。


3.根据权利要求1所述的快速检测血清中酪氨酸酶的检测试纸条的制备方法，其特征在于，所述纳米金胶溶液的制备方法如下：取100mL质量分数为0.01%的氯金酸溶...

【专利技术属性】
技术研发人员：卢玉栋，陆德婵，游瑞云，黄祖芳，沈慧英，
申请(专利权)人：福建师范大学，
类型：发明
国别省市：福建;35