一种RNA检测方法技术

本发明专利技术属于分子生物技术领域，具体的说是一种RNA检测方法，包括用于移动RNA的移液枪；该方法中通过将移液枪的吸嘴与吸头通过锁紧杆连接，不仅有效的降低了吸头与吸嘴装卸时的不便与磨损，也能有效的降低手部与吸头直接接触导致RNA的交叉污染，从而有效的提高了RNA在检测时的便捷性与准确性；且该方法中通过在锁紧杆顶端与二号槽口内部分别设有一号磁铁与二号磁铁，使得密封囊在两磁铁的压力下更紧密的贴合在吸嘴与吸头之间，从而对两者之间的空间进行更有效的密封，从而大大提高了RNA检测时的准确性。

A method of RNA detection

【技术实现步骤摘要】
一种RNA检测方法
本专利技术属于分子生物
，具体的说是一种RNA检测方法。
技术介绍
RNA即为核糖核酸，存在于生物细胞以及部分病毒、类病毒中的遗传信息载体。RNA由核糖核苷酸经磷酸二酯键缩合而成长链状分子，一个核糖核苷酸分子由磷酸，核糖和碱基构成，医学或研究中常常需要对RNA进行检测。如现有技术中叶出现了一些关于RNA检测的技术方案，如专利号为2015104666853的一项中国专利，一种肝癌中环状RNA-MET基因及其表达方法和荧光定量PCR检测方法，该方法通过设计能扩增环状RNA的特异性引物，PCR扩增出来MET基因的环状RNA，通过PCR产物克隆DNA测序的方法测定出来了环状RNA-MET的准确的环化位点；确定了MET基因客观存在一种由1214个核苷酸组成的环状RNA。本专利技术通过肝癌中环状RNA-MET基因的荧光定量PCR检测方法；能够特异性检测肝癌细胞和肝癌临床组织标本中的环状RNA-MET的存在及表达性差异；本专利技术可以为肝癌的早期临床诊断提供一种理想的基因检测方法；当使用移液枪对RNA所在的溶液进行移动时，需要用力的按住吸头向吸嘴内部挤压使其与吸嘴紧密装配，此操作一方面使得吸头与吸嘴在反复用力的挤压装配中造成磨损与破坏，一方面使用双手接触按压吸头时容易造成皮肤上的RNA酶对吸头造成污染，从而使得RNA所在的溶液在移动的过程中受到交叉污染，且此种方法下的吸头与吸嘴不管在装配与卸下时都比较费时费力，从而增加了实验者的操作难度，影响RNA检测的顺利进行。鉴于此，本专利技术提供了一种RNA检测方法，通过改变移液枪吸头与吸嘴的连接方式，有效的提高了RNA在检测时的便捷性与准确性。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术提供一种RNA检测方法，通过改变移液枪吸头与吸嘴的连接方式，有效的提高了RNA在检测时的便捷性与准确性。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：本专利技术所述的一种RNA检测方法，该方法包括以下步骤：S1：研钵加液氮3次，加入样品，研磨至粉末，加入Trizol，且使每100mg组织加1ml的Trizol，充分研磨后放在室温下解冻，解冻过程中利用暖风机加速接解冻；通过暖风机吹热风一方面可以加速空气的流动，从而在不破坏本身样品性质的情况下，提高解冻的速度，另一方面利用热风也实现了热传递，进一步加速了解冻速度；S2：在S1中样品解冻后，将样品放在2-50℃环境下离心10min，使得不溶性物质沉淀，将RNA上清液通过移液枪的吸嘴将RNA上清液吸入之后，再次沿同一方向甩动10-15次，再次用移液枪移入至1.5ml离心管中；在15-30℃下放置5min，使核蛋白复合物完全解离，加入0.2m1氯仿，振荡15sec，室温温浴2-3min，2-8℃离心15min，使得RNA全部溶解于上层水相中，用移液枪把水相移入另一1.5m1离心管中；S3：在S2中对核蛋白复合物完全解离后，向水相中加0.5m1氯仿，振荡15sec，室温下温浴2-3min；2-8℃下离心15min，把水相用移液枪转入至1.5m1离心管中，并加入0.5ml异丙醇，15-30℃温浴10min；2-8℃下离心10min，使得RNA沉积在离心管的底部及侧壁；S4：在S3中RNA沉积在离心管的底部及侧壁后，加入1ml75％乙醇，2-8℃温度离心5min，将上清液倒掉，将离心管倒扣在吸水纸上5-10min，每管加30u1的DEPC水，用DEPC水稀释100倍，并用紫外分光光度计测定0D值；S5：待移液枪使用完毕之后采用清水冲洗之后，利用75％的酒精进行杀毒，随后采用风机进行干燥，干燥完毕后，将手指放置在吸头两端的锁紧杆底端，通过对锁紧杆底端施加压力使得锁紧杆顶端从二号槽口内转出，随后将移液枪的吸嘴底端插入至吸头内部，锁紧杆顶端在转入二号槽口的过程中也对其内部的密封囊进行挤压，使得膨胀的密封囊紧密贴合在吸嘴与吸头之间的间隙里，对吸嘴与吸头内部的空间进行密封；随后将移液枪倒置放入专用的冷藏箱内保存；通过对吸嘴3的充分密封，从而保证移液枪不会受污染，进而保证了下次的整个检测过程的安全性；S2中使用的所述移液枪包括操作杆、套筒、吸嘴与吸头，所述操作杆位于套筒顶端，所述吸嘴位于套筒底部，所述吸头安装在吸嘴底端；所述吸头顶端的侧壁上设置有一号槽口，所述一号槽口内设有弹性的密封膜；所述吸头外表面对称设有固定块，所述固定块上均用扭簧连接有弧形的锁紧杆，所述锁紧杆顶端与一号槽口位置齐平，所述吸嘴底端的外表面上设置有环形的二号槽口，所述二号槽口内设有一圈密封囊，所述密封囊受力挤压能够发生弹性变形；所述锁紧杆顶端能够转动至二号槽口内部并与之配合锁紧；工作时，当使用移液枪对RNA所在的溶液进行移动时，需要用力的按住吸头向吸嘴内部挤压使其与吸嘴紧密装配，此操作一方面使得吸头与吸嘴在反复用力的挤压装配中造成磨损与破坏，一方面使用双手接触按压吸头时容易造成皮肤上的RNA酶对吸头造成污染，从而使得RNA所在的溶液在移动的过程中受到交叉污染，且此种方法下的吸头与吸嘴不管在装配与卸下时都比较费时费力，从而增加了实验者的操作难度，影响RNA检测的顺利进行；而本专利技术中的移液枪在工作时，将手指放置在吸头两端的锁紧杆底端，通过对锁紧杆底端施加压力使得锁紧杆顶端从二号槽口内转出，随后将移液枪的吸嘴底端插入至吸头内部，并使得二号槽口运动至与一号槽口位置齐平，此时将手指从锁紧杆底端缓慢松开，使得锁紧杆顶端在扭簧的作用下带动密封膜通过一号槽口转入至二号槽口内，从而使得锁紧杆顶端对吸嘴与吸头起到锁紧与固定的作用，且锁紧杆顶端在转入二号槽口的过程中也对其内部的密封囊进行挤压，使得密封囊在外界压力的作用下在二号槽口内膨胀，膨胀的密封囊紧密贴合在吸嘴与吸头之间的间隙里，起到对吸嘴与吸头内部的空间进行密封的作用；且一号槽口内设置的密封膜也在锁紧杆顶端运动的过程中对吸头内部进行密封，减少吸头在工作的过程中受到外界环境的交叉污染；采用此专利技术的有益效果为：通过将吸嘴与吸头的连接方式设置成锁紧杆连接的方式，不仅有效的降低了吸头与吸嘴装卸时的不便与磨损，也能有效的降低手部与吸头直接接触导致RNA的交叉污染，从而有效的提高了RNA在检测时的便捷性与准确性。优选的，所述锁紧杆顶端设有一号磁铁，所述一号磁铁能够转动至二号槽口内部并与之配合锁紧，所述二号槽口内端的侧壁上设有二号磁铁，所述二号磁铁与一号磁铁磁性相反；工作时，当锁紧杆顶端在扭簧的作用下转入二号槽口的过程中，此时设置的一号磁铁与二号磁铁相互吸引，使得一号磁铁在二号磁铁的作用下快速转入至二号槽口内，同时也能使得一号磁铁更紧密的贴合在二号槽口内壁上，同时相互作用的磁铁对位于两者之间的密封囊施加更大的挤压力，使得密封囊在两磁铁的压力下更紧密的贴合在吸嘴与吸头之间，从而对两者之间的空间进行更有效的密封，减少RNA在移液枪工作过程中受到的交叉污染，从而大大提高了RNA检测时的准确性。优选的，所述锁紧杆底端一侧的吸头侧面上对称设有限位块，所述限位块侧面至吸头侧面的距离保持在1-2cm；工作时，当手指过度按压锁紧杆本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种RNA检测方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：/nS1：研钵加液氮3次，加入样品，研磨至粉末，加入Trizol，且使每100mg组织加1ml的Trizol，充分研磨后放在室温下解冻，解冻过程中利用暖风机加速接解冻；/nS2：在S1中样品解冻后，将样品放在2-50℃环境下离心10min，使得不溶性物质沉淀，将RNA上清液通过移液枪的吸嘴(3)将RNA上清液吸入之后，再次沿同一方向甩动10-15次，再次用移液枪移入至1.5ml离心管中；在15-30℃下放置5min，使核蛋白复合物完全解离，加入0.2m1氯仿，振荡15sec，室温温浴2-3min，2-8℃离心15min，使得RNA全部溶解于上层水相中，用移液枪把水相移入另一1.5m1离心管中；/nS3：在S2中对核蛋白复合物完全解离后，向水相中加0.5m1氯仿，振荡15sec，室温下温浴2-3min；2-8℃下离心15min，把水相用移液枪转入至1.5m1离心管中，并加入0.5ml异丙醇，15-30℃温浴10min；2-8℃下离心10min，使得RNA沉积在离心管的底部及侧壁；/nS4：在S3中RNA沉积在离心管的底部及侧壁后，加入1ml75％乙醇，2-8℃温度离心5min，将上清液倒掉，将离心管倒扣在吸水纸上5-10min，每管加30u1的DEPC水，用DEPC水稀释100倍，并用紫外分光光度计测定0D值；/nS5：待移液枪使用完毕之后采用清水冲洗之后，利用75％的酒精进行杀毒，随后采用风机进行干燥，干燥完毕后，将手指放置在吸头(4)两端的锁紧杆(6)底端，通过对锁紧杆(6)底端施加压力使得锁紧杆(6)顶端从二号槽口(31)内转出，随后将移液枪的吸嘴(3)底端插入至吸头(4)内部，锁紧杆(6)顶端在转入二号槽口(31)的过程中也对其内部的密封囊(32)进行挤压，使得膨胀的密封囊(32)紧密贴合在吸嘴(3)与吸头(4)之间的间隙里，对吸嘴(3)与吸头(4)内部的空间进行密封；随后将移液枪倒置放入专用的冷藏箱内保存；/n其中，S2中使用的所述移液枪包括操作杆(1)、套筒(2)、吸嘴(3)与吸头(4)，所述操作杆(1)位于套筒(2)顶端，所述吸嘴(3)位于套筒(2)底部，所述吸头(4)安装在吸嘴(3)底端；所述吸头(4)顶端的侧壁上设置有一号槽口(41)，所述一号槽口(41)内设有弹性的密封膜(42)；所述吸头(4)外表面对称设有固定块(5)，所述固定块(5)上均用扭簧连接有弧形的锁紧杆(6)，所述锁紧杆(6)顶端与一号槽口(41)位置齐平，所述吸嘴(3)底端的外表面上设置有环形的二号槽口(31)，所述二号槽口(31)内设有一圈密封囊(32)，所述密封囊(32)受力挤压能够发生弹性变形；所述锁紧杆(6)顶端能够转动至二号槽口(31)内部并与之配合锁紧。/n...

【技术特征摘要】
20191115 CN 20191112026011.一种RNA检测方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
S1：研钵加液氮3次，加入样品，研磨至粉末，加入Trizol，且使每100mg组织加1ml的Trizol，充分研磨后放在室温下解冻，解冻过程中利用暖风机加速接解冻；
S2：在S1中样品解冻后，将样品放在2-50℃环境下离心10min，使得不溶性物质沉淀，将RNA上清液通过移液枪的吸嘴(3)将RNA上清液吸入之后，再次沿同一方向甩动10-15次，再次用移液枪移入至1.5ml离心管中；在15-30℃下放置5min，使核蛋白复合物完全解离，加入0.2m1氯仿，振荡15sec，室温温浴2-3min，2-8℃离心15min，使得RNA全部溶解于上层水相中，用移液枪把水相移入另一1.5m1离心管中；
S3：在S2中对核蛋白复合物完全解离后，向水相中加0.5m1氯仿，振荡15sec，室温下温浴2-3min；2-8℃下离心15min，把水相用移液枪转入至1.5m1离心管中，并加入0.5ml异丙醇，15-30℃温浴10min；2-8℃下离心10min，使得RNA沉积在离心管的底部及侧壁；
S4：在S3中RNA沉积在离心管的底部及侧壁后，加入1ml75％乙醇，2-8℃温度离心5min，将上清液倒掉，将离心管倒扣在吸水纸上5-10min，每管加30u1的DEPC水，用DEPC水稀释100倍，并用紫外分光光度计测定0D值；
S5：待移液枪使用完毕之后采用清水冲洗之后，利用75％的酒精进行杀毒，随后采用风机进行干燥，干燥完毕后，将手指放置在吸头(4)两端的锁紧杆(6)底端，通过对锁紧杆(6)底端施加压力使得锁紧杆(6)顶端从二号槽口(31)内转出，随后将移液枪的吸嘴(3)底端插入至吸头(4)内部，锁紧杆(6)顶端在转入二号槽口(31)的过程中也对其内部的密封囊(32)进行挤压，使得膨胀的密封囊(32)紧密贴合在吸嘴(3)与吸头(4)之间的间隙里，对吸嘴(3)与吸头(4)内部的空间进行密封；随后将移液枪倒置放入专用的冷藏...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏生鹏，李智，郑豪，
申请(专利权)人：李连娟，
类型：发明
国别省市：广东;44