用于牛种、羊种和猪种布鲁氏菌多重RPA检测引物组和试剂盒制造技术

本发明专利技术提供了用于牛种、羊种和猪种布鲁氏菌多重RPA检测引物组、试剂盒，属于布鲁氏菌检测技术领域；所述引物组包括包括B

【技术实现步骤摘要】
用于牛种、羊种和猪种布鲁氏菌多重RPA检测引物组和试剂盒
本专利技术属于布鲁氏菌检测
，尤其涉及用于牛种、羊种和猪种布鲁氏菌多重RPA检测引物组和试剂盒。
技术介绍
布鲁氏菌病(Brucellosis)是由布鲁氏菌(Brucellaspp.)引起的一种人兽共患传染病，布鲁氏菌宿主广泛，不仅可感染牛、羊、猪等多种家畜，也可通过直接或间接接触感染人类，严重危害我国畜牧业发展和人类健康(任洪林,卢士英,周玉,李兆辉,柳增善.布鲁氏菌病的研究与防控进展[J].中国畜牧兽医.2009,36(9):139-43.)。该病流行广泛，已超过150个国家爆发过布鲁氏菌病疫情，被世界动物卫生组织列为B类传染病，同时我国动物防疫法也将其列为乙类动物传染病(盛宗华.浅析布鲁氏菌病疫情上升的原因与防控建议[J].青海畜牧兽医杂志.2014,44(5):49-50.)。主要侵害患病动物的生殖系统，导致怀孕母畜流产、公畜睾丸炎、关节炎、不孕不育、生产力下降等症状。布鲁氏菌种类多，早期报道的有六个种，包括羊种布鲁氏菌(B.melitensis)、牛种布鲁氏菌(B.abortus)、猪种布鲁氏菌(B.suis)、沙林鼠种布鲁氏菌(B.neotomae)、绵羊附睾种布鲁氏菌(B.ovis)和犬种布鲁氏菌(B.canis)(高明华,张志琰,李跃,邓庆华,诺敏.布鲁氏菌病实验室诊断研究进展[J].中国人兽共患病学报.2010,26(1):81-3.；VERGERJ-M,GRIMONTF,GRIMONTPAD,GRAYONM.Brucella,aMonospecificGenusasShownbyDeoxyribonucleicAcidHybridization[J].IntJSystEvolMicrobiol.1985,35(3):292-5.)；随着研究的深入，Foster等研究者从水生哺乳动物体中陆续分离到鲸型布鲁氏菌(B.ceti)和鳍型布鲁氏菌(B.pinnipedialis)(GeoffreyF,OstermanBS,JacquesG,IsabelleJ,AxelC.Brucellacetisp.nov.andBrucellapinnipedialissp.nov.forBrucellastrainswithcetaceansandsealsastheirpreferredhosts[J].IntJSystEvolMicrobiol.2007,57(11):2688-93.)；Scholz和Whatmore等相继又分离到田鼠布鲁氏菌(B.microti)、意外种布鲁氏菌(B.inopinata)、赤狐种布鲁氏菌(B.vulpis)、以及狒狒种布鲁氏菌(B.papionis)(ScholzHC,RevillafernándezS,DahoukSA,HammerlJA,ZygmuntMS,CloeckaertA,etal.Brucellavulpissp.nov.,isolatedfrommandibularlymphnodesofredfoxes(Vulpesvulpes)[J].IntJSystEvolMicrobiol.2016,66(5):2090-8.；ScholzHC,K,C,BahnP,VergnaudG,TomasoH,etal.Brucellainopinatasp.nov.,isolatedfromabreastimplantinfection[J].InternationalJournalofSystematic&EvolutionaryMicrobiology.2010,60(Pt4):801.；ScholzHC,HubalekZ,SedlácekI,VergnaudG,TomasoH,AlDS,etal.Brucellamicrotisp.nov.,isolatedfromthecommonvoleMicrotusarvalis[J].InternationalJournalofSystematic&EvolutionaryMicrobiology.2008,58(2):375-82.；WhatmoreAM,DavisonN,CloeckaertA,AlDahoukS,ZygmuntMS,BrewSD,etal.Brucellapapionissp.nov.,isolatedfrombaboons(Papiospp.)[J].IntJSystEvolMicrobiol.2014,64(Pt12):4120-8.)，共计12个种。流行病学调查结果显示，我国布病流行的菌株种，以牛种、羊种、猪种布鲁氏菌引起的布病疫情高达93.21％。由此可见，建立牛种、羊种、猪种布鲁氏菌快速简便的检测鉴定方法，对布病防控及净化具有重要意义。目前常规的布病检测技术以细菌学、血清学方法和分子生物学方法。细菌学方法得对病原进行分离鉴定，费时费力，对人员操作要求高且存在生物安全风险，需要在生物安全3级实验室进行。布鲁氏菌种类多，通过肉眼难以对种型进行区分，往往容易因为操作人员个人主观原因造成错误判断。而血清学方法，只针对布病抗体进行检测，容易出现假阳性的结果，也不能胜任布鲁氏菌的种属鉴定。分子生物学方法中，多是根据IS711基因在不同种布鲁氏菌全基因组中拷贝数不同，常常利用多重PCR技术进行布鲁氏菌的种型鉴定。例如，1994年，Bricker等通过AMOS-PCR技术将牛种1型、2型、4型、羊种、猪种、绵羊附睾种布鲁氏菌进行区分(BrickerBJ,HallingSM.DifferentiationofBrucellaabortusbv.1,2,and4,Brucellamelitensis,Brucellaovis,andBrucellasuisbv.1byPCR[J].JClinMicrobiol.1994,32(11):2660-6.)；李建云建立多重PCR将牛种、羊种、猪种布鲁氏菌进行区分(李建云.动物布鲁氏菌快速检测方法的研究:内蒙古农业大学；2012.)。为了对更多种型进行区分，Lopez-Goni等专利技术Bruce-ladder方法，可对牛种、羊种、绵羊附睾种、猪种、沙林鼠种、牛种疫苗株S19、牛种疫苗株RB51、羊种疫苗株Rev1、犬种、海洋种、田鼠种、意外种布鲁氏菌进行区分；国内许邹亮建立的循环探针荧光定量PCR方法，可将牛种、羊种、猪种、犬种、沙林鼠种、海洋种布鲁氏菌进行区分(许邹亮.循环探针荧光定量PCR方法用于布鲁氏菌分种的研究以及布鲁氏菌LAMP可视化检测方法的建立:扬州大学；2011.)。但由于PCR仪及荧光定量PCR仪相对价值较高，目的片段扩增需要经过变性、退火、延伸，扩增时间较长，因此该方法在实际的应用中受到一定的限制。自2006年，Piepenburg等开发重组酶聚合酶扩增(RecombinasePolymeraseAmplification，RPA)技术以来，该技术已广泛应用于病原的检测(PiepenburgO,WilliamsCH,StempleDL,ArmesNA.DNADetectionUsingRecomb本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于牛种、羊种和猪种布鲁氏菌多重RPA检测的引物组，其特征在于，包括B

【技术特征摘要】
1.用于牛种、羊种和猪种布鲁氏菌多重RPA检测的引物组，其特征在于，包括B107F、B107R、B192F、B192R、B285F和B285R；所述B107F、B107R、B192F、B192R、B285F和B285R的核苷酸序列依次如SEQIDNo.1～SEQIDNo.6所示。


2.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于，所述B107F、B107R、B192F、B192R、B285F和B285R的使用浓度独立为8～12μmol/L。


3.根据权利要求2所述的引物组，其特征在于，所述B107F、B107R、B192F、B192R、B285F和B285R使用的体积比为(1.15～1.25):(1.15～1.25):(1.08～1.12):(1.08～1.12):(1.08～1.12):(1.08～1.12)。


4.根据权利要求3所述的引物组，其特征在于，所述B107F、B107R、B192F、B192R、B285F和B285R使用的体积比为1.2:1.2:1.1:1.1:1.1:1.1。


5.用于牛种、羊种和猪种布鲁氏菌多重RPA检测的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1～4任意一项所述的引物组。

【专利技术属性】
技术研发人员：任洪林，张士军，柳溪林，胡盼，张英，祝万菊，卢士英，柳增善，李岩松，闫守庆，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：吉林;22